三種常見漱口水對變形鏈球菌的體外抑菌效果研究

馬小航 徐婧 楊一帆 劉伯陽

齊齊哈爾醫學院

一、引言

眾所周知，世界衛生組織已將癌癥、心血管病、齲病 (dental caries)并列為當代危害健康的三大疾病。齲病已然成為了全世界人口共同關注的健康問題[1]。由于齲病進展緩慢、不易發現，常被人們忽視。齲病的產生取決于一些重要條件：在牙表面隱蔽的部位，保持高濃度的致齲菌，并處于能夠持續發揮損害作用的口腔環境。變形鏈球菌(Streptococcus mutans,S.m)是公認的主要致齲菌，能夠選擇性地在牙齒表面粘附，形成細菌生物膜，促進菌斑形成，通過糖酵解產生能量時生成大量乳酸，使牙釉質脫礦形成齲齒，嚴重危害人體口腔健康[2]。因此抑制S.m生長可達到預防齲病的目的。

由于菌斑的生長是持續的過程，經常漱口可以有效控制菌斑。漱口水滲入牙間隙和窩溝，補充機械性清除菌斑的不足，逐漸被大眾接受。我國市場上常見的非處方性漱口水種類繁多，宣傳側重點不同。

本研究選擇了三種市面上常見的抑菌漱口水，分別為：漱口水A（有效成分：麝香草酚，對金黃色葡萄球菌、變形桿菌等都有抑制或殺滅作用；桉葉油素）不添加乙醇，適用人群更加廣泛，易被大眾接受；漱口水B（有效成分：西瓜霜，可有效抑制金黃色葡萄球菌和大腸桿菌[3]；乙醇）；漱口水C（有效成分：西吡氯銨，作為表面活性劑，主要通過降低表面張力而抑制和殺滅細菌；氟化鈉，促進釉質再礦化防齲、抑制細菌產酸）。因其成分有所相差，故殺菌效果不一,本實驗研究三種不同有效成分的漱口水對變形鏈球菌的抑菌效果差異，并希望選出能夠適合日常口腔防齲的一款產品。

二、材料與方法

（一）試驗材料

1.試驗菌株

本次實驗中所采用的菌株是S.mutans凍干粉（瑞楚生物ATCC 25175），于4℃冰箱內保存。

2.其他材料

漱口水A、漱口水B、漱口水C、無菌生理鹽水、恒溫培養箱、超凈工作臺、接種環、高壓滅菌鍋、電子顯微鏡、革蘭染色染液、麥氏細菌濃度比濁管、小試管、濾紙。

（二）實驗方法

1.菌株準備

首次活化后用接種環劃板于TSB培養基內，利用燭缸法制造厭氧環境。在37℃溫箱內培養48h后，挑選完整菌落進行革蘭氏染色，在光鏡下觀察后能夠鑒定為變形鏈球菌。挑取菌落接種于BHIA培養基內傳代培養48h，將菌種放入試管中加入蒸餾水，用麥氏比濁管調整菌液濁度為1.5×106cfu/mL。

2.培養基

本實驗采用腦心浸液瓊脂培養基(Brain heart infusion AGAR，BHIA)，固相成分：牛腦浸粉4g，牛心浸粉4g，蛋白胨5g，酪蛋白胨16g，瓊脂13.5g；液相成分：氯化鈉5g，葡萄糖2g，磷酸氫二鈉2.5g，蒸餾水1000ml。稱BHIA培養基5.2g加熱溶于100ml蒸餾水，121℃高壓滅菌15min平均倒入4個培養皿后靜置冷卻。

3.實驗觀察與結果判斷

將直徑5.5mm的濾紙片高壓滅菌后充分烘干，放于平皿內。用移液器將三組漱口水分別滴在紙片上。在TSB培養基上涂布已經調整好濃度的菌液，每皿放入4片無菌濾紙片，用無菌NaCl溶液作陰性對照，紙片間距≥20mm，紙片中點與平皿邊緣間距≥15mm。分別置于37°恒溫培養箱內厭氧環境與箱內有氧環境，靜置培養48h，記錄抑菌圈大小，取平均值。結果判斷：抑菌環直徑5.5～7.5mm為中度敏感，＞7.5mm為高度敏感，無抑菌圈出現為無效。選擇具有中、高敏感度的漱口水，在厭氧環境下（實驗證明此環境下抑菌效果更明顯）重復試驗，取平均值。

（三）統計學分析

應用SPSS22.0統計軟件進行統計數據分析，計量資料符合正態分布以均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，均以P＜0.05表示存在差異有統計學意義。

三、結果與分析

（一）不同環境下實驗組漱口水對變形鏈球菌生長的影響

本研究用藥敏實驗檢測了不同品牌漱口水在不同條件下對變形鏈球菌的抑菌效果。漱口水A對變形鏈球菌的抑制作用結果呈現高度敏感，漱口水B組的抑菌環結果表現為無效，漱口水C對變形鏈球菌的抑制結果為中度敏感。并且在厭氧環境下兩組漱口水對變形鏈球菌抑效制果更加理想。

表1 不同品牌漱口水對變形鏈球菌的抑菌圈大小/mm

（二）抑菌結果較好的漱口水在厭氧條件下對變形鏈球菌生長的影響

將漱口水A與漱口水C重復試驗，取平均值，結果證明，漱口水C對于變形鏈球菌的抑菌能力明顯強于漱口水A。（見表2）

表2 漱口水A與漱口水C對變形鏈球菌生長的抑菌圈大小/mm

四、討論

對口腔主要致齲菌變形鏈球菌的體外抑菌實驗結果表明，漱口水C和漱口水A對于抑制S.m生長有一定作用。漱口水C的效果遠優于其他兩種品牌，針對齲病的預防作用更為可靠。

漱口水C的抗菌成分較為豐富，西吡氯銨為陽離子季銨化合物，作為表面活性劑添加其中，主要通過降低表面張力而抑制和殺滅細菌。梁紅艷等的研究證明，西吡氯銨對如金黃色葡萄球菌、白色念珠菌的革蘭陽性菌具有抑菌能力，能夠有效減少牙菌斑[4]。報道稱，其中添加的氟化鈉能夠降低釉質溶解度、阻止釉質進一步脫礦，同時促進釉質再礦化，抑制菌斑形成[5]。故此產品防齲抑菌效果優秀。

漱口水A主要抗菌成分有: 麝香草酚0．64 g /L，桉油精0.092%，冬青油0.060%，薄荷醇0.042%，具有廣譜抗微生物活性作用，可以快速的滲透牙菌斑生物膜，原位殺死較廣泛的G+菌和G-菌，還能縮小現有牙菌斑和牙齦炎的病灶。梁堅強的研究表明，牙齦炎病人在進行牙周基礎治療，輔佐以漱口水A治療，可在一定程度上提高療效，降低牙齦出血情況、減少牙齦炎復發[6]。因此產品安全性高，長期使用不易造成口腔菌株改化、牙垢增加和味覺衰退等明顯副作用，也沒有口腔腫瘤和口干癥的風險。香料成分對于控制口腔異味有一定的改善作用。

隨著人們對口腔保健的重視，漱口水漸漸走入大眾的視野。細菌的存在是齲病發生的關鍵，抑制變形鏈球菌強大的產酸能力、耐酸能力和附著能力是突破齲病防治的關鍵。越來越多的研究重點轉移到新型抑菌漱口水成分的開發中[7,8]，漱口水的市場前景可見一斑。