離子色譜法測定復方氨基酸注射液（18AA）中陰離子含量

周敏，郭艷芳，王烜，程奇珍

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，南昌 330029

復方氨基酸注射液（18AA）是含有多種氨基酸的腸外營養制劑，屬于營養用氨基酸注射液，用于各種應激狀態和危重患者的營養支持，臨床使用較廣［1］。復方氨基酸注射液引起的不良反應，涉及多個系統、器官，其臨床表現復雜多樣［2］，其中以靜脈炎最普遍，其次為過敏性休克。除使用方面的原因，靜脈炎主要與藥物中含山梨醇、電解質等多種成分相關，過敏性休克主要與藥品在生產過程中混有其它雜質或其代謝產物及亞硫酸氫鈉過敏［3,4］相關。

氯離子、亞硝酸根離子、磷酸根離子是水中常見的陰離子［5］，部分氨基酸結合醋酸根離子成鹽，同時制劑過程中調節pH 值時也可能引入部分醋酸根［6］，乙二胺四醋酸二鈉常用于注射液金屬離子絡合，亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉用于注射液中作為抗氧劑，以上多種陰離子均有可能在制劑中存在，可能與用藥引起的不良反應相關，為監控注射液用藥安全，有必要進行檢測監控。

離子色譜法需要樣品量少，具有專屬性、靈敏度、準確度、自動化程度高的優點，適合于分析陰離子、陽離子、有機酸、堿，特別適合分析各種離子，由于多數陰離子的紫外響應值較低，而本制劑中總離子強度較強，為減少解離，以氫氧根作為淋洗液。本次實驗建立離子色譜法同時測定多種陰離子含量的方法，用于測定不同來源復方氨基酸注射液（18AA）的多種陰離子含量，從而發現潛在的隱患。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

戴安離子色譜（ICS-1000 系統+AS40 進樣器+IONPAC AS11 陰離子交換柱+KOH 自動抑制外加水模式）；Synergguv Millipore 超純水制水機。

1.2 對照品

醋酸鈉（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20150417，含量99%）；乙二胺四醋酸二鈉（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20170527，含量：99.0%）；亞硝酸鈉（國藥集團化學試劑有限公司，批號：142024，含量99%）；氯化鈉（西隴化工股份有限公司，批號：170417，含量：99.5%）；磷酸鈉（西隴化工股份有限公司，批號：160106，含量：98%）；硫代硫酸鈉（SIGMA，批號：MKBT8948V，含量：99.5%）；硫酸鈉（西隴化工股份有限公司，批號：160105）；亞硫酸氫鈉（SIGMA，批號：MKBB5028，含量：100%）

2 實驗方法

2.1 色譜條件

色譜條件色譜柱：Ion Pac AS11 Analytical（4 mm ×250 mm），保護柱：Ion Pac AS11（50 mm × 4 mm），淋洗液：20 mmol/L KOH 溶液，流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃，檢測器：電導檢測器，進樣體積：25 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標準品貯備液的制備分別精密稱取醋酸鈉、乙二胺四醋酸二鈉、亞硝酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉、硫代硫酸鈉、硫酸鈉與亞硫酸氫鈉對照品適量，加超純水制成對照品貯備液（濃度與折算見表1，乙二胺四醋酸二鈉以EDTA 計）。

表1 標準品貯備液的濃度折算表

2.2.2 供試品溶液的制備取本品一支，用超純水溶解并轉移至25 mL 容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 標準曲線溶液的制備及線性考察分別精密量取適量各標準品貯備液，置同一容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，配制成相應濃度的標準曲線溶液，見表2。混合對照品溶液離子色譜圖，見圖1，各成分分離度良好。線性考察結果良好，見表3。

表2 混合標準曲線溶液濃度

表3 線性關系與檢測限

2.3 專屬性試驗

分別取溶劑（超純水）、氨基酸原料溶液（取氨基酸原料，按處方量配制混合氨基酸溶液）與復方氨基酸注射液（18AA），同法測定。結果：溶劑對樣品陰離子測定均無干擾，氨基酸對照品溶液僅檢測出氯離子，樣品溶液色譜圖中各檢出陰離子峰分離度良好。方法專屬性良好，見圖2。

2.4 穩定性試驗

取混合對照品溶液5 間隔24 h 進樣，比較結果。亞硫酸氫根離子峰有較明顯減小，硫酸根離子峰明顯增大，其余陰離子穩定，見圖3。

因亞硫酸氫根在水中不穩定，對亞硫酸氫根標準品貯備液進行穩定性試驗。從結果可知亞硫酸氫根離子在水中會部分轉化為硫酸根離子，且隨放置時間增長而增加，見圖4。

樣品由于長期存放，添加的亞硫酸氫根離子同樣會部分轉化成硫酸根離子，從用藥的安全性考慮應測定硫酸鹽與亞硫酸氫鹽的總和［7］，試驗結果見表4。

2.5 精密度試驗

取六份混合對照品溶液5 分別進樣，比較結果（硫酸鹽與亞硫酸鹽按總量計），精密度良好，見表5。

2.6 回收率試驗

分別稱取氨基酸原料藥（混合）12 份約50 mg，置100 mL 量瓶中，加適量高純水溶解，分別精密加入各陰離子貯備溶液0.5、1.0、2.0 mL，加高純水稀釋至刻度，搖勻，同法測定。回收率結果良好，結果見表6。

表4 亞硫酸氫根標準貯備液穩定性試驗結果

表5 精密度試驗結果（n=6）

表6 加標回收率測定結果 %

2.7 檢測限試驗

分別精密量取1 mL 混合對照溶液2 置5、25、50 mL 量瓶中，加高純水稀釋至刻度，搖勻，同法測定。分別得各陰離子檢出限濃度，見表3。

3 結果分析

本次共選取5 家企業樣品（制劑A～E），各抽取三批進行測定，測定結果（三批均值，見表7）。測定結果與理論值均存在一定差異。其中：（1）原料檢測結果氯離子與理論值一致，其余離子均未檢出。（2）制劑中氯離子檢測結果均高于處方量。根據處方，氯離子主要來源于原料中鹽酸精氨酸、鹽酸賴氨酸與鹽酸組氨酸。其中一家企業含量明顯高于處方量，推測來源：①工藝中調節pH 時使用帶入；②使用注射用水中帶入。天然水體中含有大量常規離子如氟離子、氯離子、硝酸鹽、硫酸鹽等以及其他可能的污染物。大量研究表明，對水體進行深度處理的常規消毒工藝如臭氧和二氧化氯等消毒技術的應用也越來越廣泛，其中氯化消毒是我國的主要飲用水消毒方法［9］。然而,消毒劑和飲用水中的天然有機物和無機物反應可生成溴酸鹽、氯酸鹽和鹵代乙酸等消毒產物；③本品包裝使用丁基膠塞，丁基膠塞中含有氯［10］，在產品貯存過程可能產生微量遷移。（3）亞硫酸氫根離子檢測，5 家制劑含量在59%～96%之間，均符合現行藥典標準［10］規定（不得過標示量的110.0%），但計算亞硫酸氫根離子與硫酸根離子總量卻有4 家均超過了110%，說明在添加亞硫酸氫鈉時可能存在實際添加量高于處方量的情況。現有藥典標準使用紫外-可見分光光度法檢測亞硫酸氫根含量，雖能有效監控溶液中亞硫酸氫根的含量，但從離子色譜法檢測結果來看，仍存在一定的隱患。（4）磷酸根離子5 家均有微量檢出，但原料溶液中未有檢出，推測為藥品包裝中產生的微量遷移。

表7 樣品測定結果（n=3） mg/mL

4 結論

本次實驗研究探討了離子色譜法對復方氨基酸注射液（18AA）多種陰離子同時進行分離測定。方法需要樣品量少、自動化程度高，精密度、準確度及回收率均較滿意，為該品種提供了一種較為新穎的質量控制手段，具有較好的參考和實用價值。