老年冠心病慢性心衰患者血清miR-214 galectin-3表達及其預后相關性研究

侯培培，于 倩，矯 妮，孟 錦，欒 波

(遼寧省人民醫院/中國醫科大學人民醫院，遼寧 沈陽 110016)

冠心病慢性心衰主要臨床表現為體循環或肺循環淤血、器官組織血液灌注不足，它是心血管疾病的終末期表現和最主要死因[1]。隨著人口老齡化及生活水平的發展，慢性心衰引發的心律失常、心源性死亡等不良預后成為重大公共問題[2]。因此，尋找一種用于慢性心衰預后預測的生物標志物十分必要。微小RNA-214(miR-214)在血管內皮細胞中呈異常表達，與動脈粥樣硬化斑塊破裂有重要聯系[3]。半乳糖凝集素-3(galectin-3)在免疫和炎性反應、動脈粥樣硬化等過程中發揮重要作用，且研究表明，galectin-3在心衰病理生理學方面有一定作用[4]。因此，本研究通過分析老年冠心病慢性心衰患者血清miR-214、galectin-3水平與心衰相關臨床指標間的關系，以期為不良預后的早期預測提供參考指標。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2017年7月至2019年4月于本院心內科住院治療的72例老年冠心病慢性心衰患者為研究對象(心衰組)，年齡60～88歲，平均(73.23±10.79)歲，男34例，女38例，合并高血壓26例，合并高脂血癥20例；同期選取健康體檢者84例作為對照組，年齡60～87歲，平均(72.87±10.52)歲，男46例，女38例。兩組之間性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究所有受試者均簽署知情同意書，且經遼寧省人民醫院倫理委員會審核批準。納入標準：①符合慢性心力衰竭診斷標準[5]，左心衰竭診斷要點：有咳嗽、勞力性呼吸困難、陣發性夜間呼吸困難、肺靜脈瘀血，右心衰竭診斷要點：體位性水腫、靜脈壓升高、肝臟腫大；②病例資料齊全者；③未進行過放療、化療者。排除標準：①伴有感染性疾病及腫瘤者；②伴有嚴重肝腎功能不全者；③近1周內使用抗炎藥物、免疫抑制劑者；④伴有其它血液系統及自身免疫疾病者；⑤6個月內發生過腦卒中、不穩定型心絞痛、急性心肌梗死、急性腦血管意外者。查閱門診及住院病歷，收集所有受試者一般資料，包括性別、年齡、體質量指數(BMI)、肌酐水平、吸煙史等。

1.2主要試劑與儀器:RNA提取試劑盒(批號：R1200-100)購自北京索萊寶科技有限公司；反轉錄試劑盒(批號：KL266)購自上海康朗生物科技有限公司；miScript SYBR?Green Mix熒光定量PCR試劑盒(批號：218073)購自德國QIAGEN公司；氨基N末端B型利鈉肽前體(NT-proBNP)酶聯免疫吸附(ELISA)試劑盒(批號：YB-E1449)購自上海鈺博生物科技有限公司；galectin-3 ELISA試劑盒(批號：EY-D9212)購自上海一研生物科技有限公司。實時熒光定量PCR(qRT-PCR)儀(型號：Stratagene Mx3005P)購自上海普迪生物科技有限公司；彩色多普勒超聲診斷儀(型號：EPIQ7C)購自荷蘭飛利浦公司。

1.3研究方法

1.3.1樣品采集及保存:采集體檢者體檢當天及慢性心衰患者入院第2天晨起空腹肘靜脈血樣5mL，3000r/min離心15min后收集血清，置于-80℃保存待測。

1.3.2血清miR-214水平測定:采用RNA提取試劑盒提取血清總RNA，反轉錄試劑盒將RNA反轉錄得cDNA，具體操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。采用qRT-PCR法檢測血清中miR-214表達水平，采用qRT-PCR儀對miR-214及其內參U6進行擴增。反應體系共20μL：cDNA模板(50ng/μL)2μL，miScript SYBR?Green Mix10μL，上下游引物(10μM)各0.8μL，ddH2O 6.4μL。反應條件：95℃預變性5min；95℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 30s，40個循環。miR-214及內參U6的引物序列見表1，引物由上海生工生物工程股份有限公司設計并合成。每份樣品均設3個重復孔，采用2-△△CT法計算血清miR-214相對表達量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.3血清galectin-3及心功能指標測定:采用彩色多普勒超聲診斷儀檢查心功能指標左心室射血分數(LVEF)、左室舒張末期內徑(LVEDD)及左室收縮末內徑(LVESD)。采用ELISA法檢測血清galectin-3、NT-proBNP水平。

1.3.4隨訪:慢性心衰患者出院12個月內以電話等方式隨訪，收集了解患者心血管事件發生情況，包括心衰復發、心律失常、心源性死亡，根據是否發生上述事件將慢性心衰患者分為心血管事件組23例和非心血管事件組49例。

2 結 果

2.1對照組與心衰組一般資料比較:對照組與心衰組性別、年齡、BMI、吸煙比例、肌酐水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 對照組與心衰組一般資料比較

2.2對照組與心衰組血清miR-214、galectin-3水平及心功能指標比較:心衰組miR-214、galectin-3、LVESD、LVEDD、NT-proBNP高于對照組，LVEF低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 對照組與心衰組血清miR-214 galectin-3水平及心功能指標比較

2.3慢性心衰患者血清miR-214、galectin-3水平與心功能指標相關性:Pearson法分析結果顯示，慢性心衰患者血清中miR-214、galectin-3水平與LVESD、LVEDD、NT-proBNP呈正相關(P<0.05)，與LVEF呈負相關(P<0.05)，見表4。

表4 慢性心衰患者血清miR-214 galectin-3水平與心功能指標相關性

2.4不同預后慢性心衰患者血清miR-214、galectin-3水平及心功能指標比較:心血管事件組miR-214、galectin-3、LVESD、LVEDD、NT-proBNP高于非心血管事件組，LVEF低于非心血管事件組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 不同預后慢性心衰患者血清miR-214 galectin-3水平及心功能指標比較

2.5影響慢性心衰患者預后的多因素Logistic回歸分析:將慢性心衰患者是否發生不良心血管事件作為因變量，以miR-214、galectin-3、LVEF、LVESD、LVEDD、NT-proBNP為自變量進行Logistic回歸分析，結果顯示miR-214、galectin-3是影響慢性心衰患者發生不良心血管事件的獨立危險因素(P<0.05)，LVEF是影響慢性心衰患者發生不良心血管事件的保護因素(P<0.05)，見表6。

表6 影響慢性心衰患者預后的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

微小RNA(miRNA)可通過調節血管生成相關因子，調控內皮細胞增殖、遷移等，進而調節血管新生，影響缺血性心腦血管疾病[6,7]。趙寧等[8]研究表明，miR-214可通過抑制血管新生等作用，加劇心力衰竭的發展。本研究結果顯示，慢性心衰患者血清miR-214高于健康人群，與陳勁松等[9]研究結果中miR-214的表達趨勢一致；慢性心衰患者中發生心血管事件患者血清miR-214高于未發生心血管事件患者，且miR-214是影響慢性心衰患者發生不良心血管事件的獨立危險因素。提示miR-214可能通過高表達參與心衰的發生、發展，推測可能是miR-214高表達后抑制人體血管新生，加重心衰患者病情，影響預后；或miR-214的高表達使得基質細胞衍生因子-1表達水平升高，進而以微粒體形式釋放入血，二者共同調節炎性因子的表達，從而參與心衰發生、發展，導致心衰患者發生心血管事件。

galectin-3可誘導I型膠原沉積、成纖維細胞增殖以及心室功能不全，且能作為心肌重構和纖維化的生物標記物[10]。galectin-3可參與心肌中巨噬細胞的浸潤，進而影響心力衰竭[11]。本研究結果中慢性心衰患者血清galectin-3高于健康人群，且慢性心衰患者中發生心血管事件患者血清galectin-3高于未發生心血管事件患者，且galectin-3是影響慢性心衰患者發生不良心血管事件的獨立危險因素，與秦榕蔚等[12]研究結果基本一致。推測其可能機制為：galectin-3高表達后促進心肌巨噬細胞浸潤，增加膠原沉積，導致心肌順應性減低、心肌肥厚，進而促進心力衰竭的發生；galectin-3高表達可調節炎癥水平和心肌纖維化，導致心肌重構，而心肌重構和心肌纖維化是心力衰竭的病理基礎，間接影響心力衰竭發生、發展及預后。丁才智等[13]研究顯示，LVEF、LVESD等與心力衰竭密切相關，本研究與其結果基本一致。此外，本研究中慢性心衰患者血清中miR-214、galectin-3水平與LVESD、LVEDD、NT-proBNP呈正相關，與LVEF呈負相關。進一步提示miR-214、galectin-3可能通過影響LVEF等心功能指標的變化，間接參與慢性心力衰竭的發生、發展。

綜上所述，miR-214、galectin-3水平的變化對慢性心衰疾病的發生、發展及預后均有重要意義，可能會成為冠心病慢性心衰潛在的治療靶點。但miR-214、galectin-3影響冠心病慢性心衰的具體作用機制仍需深入探究，同時還需進一步探索miR-214、galectin-3的實際臨床應用價值。