IGF-I EGFR在子宮組織的表達及與肌瘤復發的關系

顏紅麗，鄭麗華，白昌民，邵美麗

(西北婦女兒童醫院/陜西省婦幼保健院婦產科，陜西 西安 710061)

子宮肌瘤為常見婦科生殖系統良性腫瘤，其主要是因子宮平滑肌細胞增生引起，故稱為子宮平滑肌瘤較為確切，簡稱子宮肌瘤[1]。對于希望保留生育功能的子宮肌瘤患者而言，子宮肌瘤剔除術具有傷口美觀、術后恢復快、微創、安全等優勢，但其術后復發率較高[2]。近年研究顯示，雌激素介導的促有絲分裂活動對子宮肌瘤發生、進展具有重要作用，而這種作用是通過如胰島素樣生長因子-I(Insulin like growth factor-I,IGF-I)、表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)等生長因子來實現[3]。但關于IGF-I、EGFR在子宮肌瘤復發中的作用尚不明確[4]?；诖耍狙芯炕仡櫺苑治隽俗訉m肌瘤復發與未復發患者子宮不同組織中的IGF-I、EGFR表達情況，報道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料:選擇2018年1月至2018年12月于醫院行子宮肌瘤剔除術的子宮肌瘤患者為研究對象，實際入組875例，按照1：7比例隨機抽取，最終納入125例患者。納入標準：①均符合子宮肌瘤診斷標準，且經術后病理活檢、宮腔鏡、超聲檢查等確診者；②希望保留生育能力，且符合子宮肌瘤剔除術指征者；③年齡為26～40歲者；④患者及其家屬知情同意。排除標準：①合并其他婦科惡性腫瘤者；②合并心、肝、肺、腎等器官嚴重功能障礙者；③術前3個月激素類藥物使用史者；④合并甲狀腺功能異常、糖尿病等影響內分泌代謝疾病者；⑤不符合子宮肌瘤剔除術指征者；⑥術后拒絕隨訪者；⑦妊娠、哺乳期者。

1.2方 法

1.2.1手術方法:術前常規消毒鋪巾，靜脈全麻，囑患者取膀胱截石位。行氣腹針穿刺，輸入二氧化碳(CO2)，構建人工氣腹，保持腹內壓在12～14mmHg范圍內，穿刺部位選擇為臍左旁、右下腹、左下腹、臍輪上緣等處，放置手術器械及腹腔鏡；在肌壁和肌瘤交匯處注入用生理鹽水稀釋過的垂體后葉素，在周圍組織變白后，縱向切開子宮肌瘤最明顯突出處，并依次將子宮漿膜、子宮肌層、肌瘤假包膜切開，暴露肌瘤表面，牽引肌瘤，沿假包膜剝離、剔除子宮肌瘤，然后放置旋切器，將肌瘤粉碎并從套管內取出；最后用可吸收線連續或間斷逐層縫合創口。

1.2.2檢測方法:①標本采集及處理：術中留取部分子宮肌瘤中心處肌瘤組織、子宮肌層(距肌瘤包膜外>5cm)及肌瘤旁組織(距肌瘤包膜外1cm)各1份，標本大小均為1×1×0.2cm3，使用10%甲醛液進行固定，再石蠟包埋，切4μm厚切片待檢。②IGF-I、EGFR表達檢測：采用免疫組化SABC法檢測3種標本中的IGF-I、EGFR表達情況，主要試劑為兔抗人IGF-I多克隆抗體(試劑1)、兔抗人EGFR單克隆抗體(試劑2)均購自美國Abcam公司。具體檢測方法見表1。③結果判定：以已知IGF-I、EGFR陽性片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。①IGF-I：高倍鏡下(×400)，隨機選取5個視野，觀察切片顯色情況，細胞漿內有棕黃色顆粒為IGF-I陽性表現。最終結果采用陽性細胞百分比與陽性細胞染色深度計分總和判定：陽性細胞百分比計分：細胞著色≤5%計0分、細胞著色≤25%計1分、細胞著色≤50%計2分、細胞著色≤75%計3分、細胞著色>75%計4分。陽性細胞染色深度：未見染色計0分、輕度染色計1分、中度染色計2分、深度染色計3分?？偡?～2分為陰性，≥3分為陽性。②EGFR：高倍鏡下(×400)，隨機選取5個視野，觀察切片顯色情況，細胞質、細胞膜內有棕黃色顆粒為EGFR陽性表現。根據著色癌細胞占總細胞百分數判定EGFR表達強度，具體標準如下：陰性(-)：陽性細胞≤5%；弱陽性(+)：陽性細胞占6%～30%；中等陽性(++)：陽性細胞占31%～60%；強陽性(+++)：陽性細胞>60%。

1.3免疫組化SABC法操作過程:1.將切片放入二甲苯溶液中脫蠟、水化；2.用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗，2次，5min/次；3.用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5～10min，蒸餾水洗3次；4.放入乙二胺四乙酸(EDTA)緩沖液中，抗原高壓熱修復；5.PBS沖洗5min；6.滴加正常山羊血清封閉液，室溫20min。甩去多余液體；7.滴加(試劑1/試劑2)，室溫1h或者4℃過夜或者37℃1h(4℃過夜后在37℃復溫45min)；8.PBS沖洗，3次，2min/次；9.滴加生物素化二抗，20℃～37℃20min；10.PBS沖洗，3次，2min/次；11.滴加試劑SABC(鏈霉卵白素+辣根酶標記生物素)，20℃～37℃20min；12.PBS沖洗，4次，5min/次；13.DAB(二氨基聯苯胺)顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色(鏡下掌握顯色程度)；14.蒸餾水洗。蘇木素復染2min、鹽酸酒精分化；15.脫水、透明、封片、鏡檢。

1.4觀察指標:術后隨訪1年，根據肌瘤是否復發分為復發組(37例)和未復發組(88例)。收集兩組患者的臨床資料(年齡、病程、BMI、肌瘤平均直徑、肌瘤發病情況、疾病類型(依據肌瘤與子宮壁的關系分類)、文化程度、典型癥狀)，并行回顧性分析。分析并比較兩組患者3種子宮組織(肌瘤組織、子宮肌層及肌瘤旁組織)中的IGF-I、EGFR表達情況。肌瘤復發標準[5]：術后3個月未檢出新發肌瘤，但術后6個月后經婦科檢查、盆腔超聲等手段檢出新發肌瘤，且直徑超過5cm。

2 結 果

2.1兩組患者臨床資料比較:兩組患者的年齡、病程、BMI、肌瘤平均直徑、肌瘤發病情況、疾病類型、文化程度、典型癥狀等臨床資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 兩組患者臨床資料比較

2.2兩組患者不同子宮組織中的IGF-I、EGFR表達情況比較:IGF-I、EGFR在不同子宮組織中的表達情況比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。復發組患者肌瘤組織、瘤旁組織、肌層組織中的IGF-I、EGFR表達情況均高于未復發組患者，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2、表3。

表2 兩組患者不同子宮組織中的IGF-I陽性表達情況比較n(%)

表3 兩組患者不同子宮組織中的EGFR表達情況比較

3 討 論

子宮肌瘤系一類常見激素依賴性婦科良性腫瘤，發病率呈逐年上升趨勢[6]。目前，尚未完全探明子宮肌瘤的發病機制，推測其可能主要與雌性激素、生長因子有關。研究顯示，在應用抗孕激素藥物米非司酮及選擇性雌激素受體調節劑三苯氧胺治療患者中，雖可獲得不錯療效，但無法徹底治愈[7]。提示除性激素外，還有其他因素參與了子宮肌瘤的發生、進展過程[8]。

胰島素樣生長因子-I(IGF-I)系一類多肽類促有絲分裂原，對機體各類組織細胞的增殖、分類、凋亡抑制等具有刺激作用，且在多種生理、病理調節過程中扮演重要角色。宋瑜[9]報道顯示，IGF-I在多種腫瘤中表達增高，但在正常組織中低表達甚至不表達，表明IGF-I在促進腫瘤細胞增殖中發揮作用。鄒曉嵐等[10]研究稱，子宮肌瘤患者肌瘤組織中的IGF-I表達水平遠高于瘤旁組織及肌層組織。本研究結果發現，兩組患者肌瘤組織中的IGF-I表達水平均明顯高于瘤旁組織及正常肌層組織，與大多數研究結果一致。分析原因為：肌瘤中的高表達IGF-I與其受體(IGF-IR)結合，并通過酪氨酸激酶及β亞單位跨膜區，催化位于β亞單位內的磷酸化位點，啟動有絲分裂原激活蛋白激酶及磷脂酰肌醇-3激酶激活途徑等2條信號傳遞鏈，將代謝與有絲分裂信號傳遞至細胞核中，誘導肌瘤細胞有絲分裂并增殖，因而IGF-I表達強度呈向周圍遞減態勢。

EGFR為1186個氨基酸殘基構成單鏈跨膜蛋白，特異性結合其細胞外配基(EGF)后參與細胞生長調節，EGFR所介導信號轉導通路被證實與肌瘤細胞增殖有關。文獻提出[11]，子宮肌瘤為單克隆良性腫瘤，由肌瘤母細胞增殖、分裂產生，其發生與EFGR高表達密切相關。趙欣等[12]表示，EGFR在肌瘤組織中的陽性表達率較瘤旁組織及正常肌層組織更高，說明EGFR表達強度增強在肌瘤細胞增殖過程中起到關鍵作用，推測其為子宮肌瘤細胞持續增殖重要因素。本研究結果顯示，兩組患者肌瘤組織中的EGFR表達水平顯著高于瘤旁組織及正常肌層組織。推測此結果與EGFR與其特異性配基EGF結合引發細胞增殖、分化并惡性轉化有關。

陳霞等[13]研究結果表明，子宮肌瘤患者行子宮剔除術后的復發率達33.3%，說明子宮肌瘤患者術后復發率較高。因此，有必要對子宮肌瘤患者術后復發原因進行分析。本研究結果顯示，術后隨訪1年的125例子宮肌瘤患者中，37例出現復發情況，復發率達29.6%。復發組患者不同子宮組織內的IGF-I表達情況均高于未復發組患者，結果顯示IGF-I高表達可能促進了子宮肌瘤術后復發。此外，EGFR在復發組患者不同子宮組織內的表達亦高于未復發組患者，提示EGFR可能為子宮肌瘤患者術后復發的潛在推動因子。究其原因為高表達IGF-I、EGFR會與其特異性受體結合，從而促進肌瘤組織周圍組織不斷增殖分裂，最終導致肌瘤復發，提高術后復發風險，但具體機制有待進一步深入研究。

綜上所述，IGF-I、EGFR在子宮肌瘤患者肌瘤組織中的表達水平高于瘤旁組織及肌層組織，且IGF-I、EGFR的表達強度增強可能為肌瘤復發的潛在因素之一。