妊娠期糖尿病患者胎盤組織中miRNA-508-3p 和HGF 表達水平及其對滋養細胞胰島素抵抗的影響

黃 好, 賈 虹, 王曉霜, 張 鷺, 段亞亭

（1. 重慶市中醫院婦產科，重慶 400011；2. 重慶市中醫院超聲科，重慶 400011）

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）作為常見的妊娠并發癥，是臨床上孕產婦及圍產兒發病率和死亡率升高的重要原因，嚴重威脅母嬰健康。近年來，隨著妊娠平均年齡和肥胖率的增加，GDM 發生率也逐漸升高［1］。但迄今為止，GDM 發病機制尚不明確，多數學者認為胰島素抵抗（insulin resisitance，IR） 是GDM 發病的重要病理機制［2］。當GDM 發生時，滋養細胞作為胎盤組織的主要功能細胞，在結構及功能上均發生明顯改變，其中大量微小RNA （microRNA，miRNA）及蛋白表達異常，可能均與IR 的發生有密 切 關 聯。 微 小RNA-508-3p （microRNA-508-3p，miR-508-3p）位于X 染色體q27.3，有研究［3］顯示：miR-508-3p 在GDM 患者的胎盤組織中表達水平明顯升高，但其具體作用機制尚不明確。肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF） 是一種具有肝素結合特性的酸性蛋白質，在胎盤組織中含量豐富［4］。最新研究［5］證實： HGF 能夠通過降低抗原遞呈細胞主要組織相容性復合物Ⅱ的表達進而減輕IR，改善GDM 患者胎盤組織的病理損傷。應用生物信息學技術分析已發現HGF 的3′-UTR 區 存 在 與miR-508-3p 靶 向 結 合 位 點。但 關于兩者在GDM 胎盤組織中的表達及相互作用尚未見相關報道。本研究旨在通過分析GDM 患者胎盤組織中miR-508-3p 和HGF 的表達及調控機制，以期進一步闡明GDM 的發病機制，為臨床診斷及治療GDM 提供新的思路及策略。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2018 年4 月—2019 年4 月本院產科門診就診及住院孕產婦30 例，其中15 例為GDM 組，15 例健康孕產婦為正常對照組。GDM 的診斷按照第9 版《婦產科學》的診療標準［6］：在妊娠的第24～28周空腹口服75 g葡萄糖進行糖耐量實驗（oral glucose tolerance test，OGTT），當空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）≥5.1 mmol·L－1，或服糖后1 h血糖≥10.0 mmol·L－1，或服糖后2 h 血糖≥8.5 mmol·L－1，即可診斷為GDM。入選標準：所有孕產婦均為單胎妊娠，GDM 患者符合上述診斷標準；排除標準：妊娠并發心腦血管、肺、肝和腎等疾病者，妊娠并發甲狀腺等內分泌疾病及妊娠前即診斷為糖尿病者。所有產婦分娩后，在胎盤母體面的正中部位取約200 mg 組織（包括胎盤全層，不含羊膜層），并于30 min 內送至實驗室，無菌生理鹽水充分漂洗，用于免疫組織化學染色的胎盤組織置于10%甲醛溶液中進行固定，其余胎盤組織迅速置于液氮中凍存以供后續其他實驗研究。標本及資料采集均取得研究對象知情同意并簽署知情同意書，并獲得本院倫理委員會批準。

1.2 細胞、主要試劑和儀器人絨毛膜滋養細胞HTR-8/Svneo 購于中國科學院上海細胞所。RPMI 1640 培養基、胎牛血清（FBS） 和0.25%含EDTA 胰蛋白酶（美國Hyclone 公司），TRIzol（美國Thermo 公司），逆轉錄試劑盒和PCR 試劑盒（上海康為世紀生物科技有限公司），PCR 引物［生工生物工程（上海）有限公司］，Opti-MEM 培養基及脂質體轉染試劑LipofectamineTM2000（美國Invitrogen 公 司 ） ，miR-508-3p inhibitor、microRNA 無 關 序 列 （miR-NC）、 miR-508-3p mimic、野生型（WT）及突變型（MUT）HGF 熒光素酶報告基因質粒（pmirGLO 雙熒光素酶報告基因載體）（上海吉瑪制藥技術有限公司），雙熒光素酶系統（美國Promega 公司），HGF 抗體、磷酸化 磷 脂 酰 肌 醇 3 激 酶 （phosphorylated phosphatidylinositol 3 kinase，p-PI3K）抗體和磷酸化蛋白激酶B （phosphorylated protein kinase B，p-AKT）抗體（美國Abcam 公司），鼠抗人β-actin抗體、HRP 標記的山羊抗鼠抗體和BCA 蛋白定量試劑盒（廣州晶彩生物科技有限公司），免疫組織化學EnVison 兩步法試劑盒和二氮基聯苯胺（DAB）顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司），葡萄糖檢測試劑盒和胰島素（美國Sigma公司）。超凈工作臺（蘇凈集團安泰公司），PCR儀、凝膠電泳儀和凝膠成像系統（美國Bio-Rad 公司）。CO2細胞培養箱（美國Thermo 公司）。

1.3 免疫組織化學染色檢測胎盤組織中HGF 陽性表達率從液氮中取出胎盤組織，于室溫下采用PBS 緩沖液反復沖洗以去除血跡后經10%甲醛溶液固定，脫水，石蠟包埋，制成厚度約4 μm 的組織切片，采用EnVison 兩步法檢測胎盤組織中HGF 的表達。HGF 抗體稀釋比例為1∶500，其余操作參考說明書進行。陽性染色結果判斷：陽性染色細胞率≤5% 為0 分，5%＜陽性染色細胞率≤25% 為1 分，25%＜陽性染色細胞率≤50%為2 分，50%＜陽性染色細胞率≤75%為3 分，陽性染色細胞率＞75%為4 分。染色程度評分：1 分為淡黃色，2 分為棕黃色，3 分為棕褐色。將陽性染色細胞率與染色程度的乘積作為最終染色結果評分，其中0 分為表達陰性，≥1 分為表達陽性，計算正常對照組和GDM 組產婦胎盤組織中HGF 陽性表達率。

1.4 細胞培養和HTR-8/Svneo-IR 模型建立及鑒定HTR-8/Svneo 細胞常規復蘇后用含10%FBS RPMI 1640 的常規培養基于37℃、5%CO2培養箱中進行培養。取處于對數生長期的HTR-8/Svneo細胞，調整細胞密度至2.5×104mL－1，接種于96 孔細胞培養板，待細胞生長融合至80%～90%時，使用不含FBS 的RPMI 1640 培養基饑餓細胞8 h 后進行實驗，并將細胞分為正常培養的滋養細胞組（HTR-8/Svneo 組） 和模型組（HTR-8/Svneo-IR組），每組設定5 個復孔。根據參考文獻［7］中的方法建立滋養細胞的IR 模型：在HTR-8/Svneo-IR組細胞不含FBS 的RPMI 1640 培 養 基 中 加 入1×107mmol·L－1的胰島素進行處理；而HTR-8/Svneo 組細胞僅應用不含FBS 的RPMI 1640 培養基的進行培養，并設置空白對照組（即不含細胞、FBS 及胰島素的RPMI 1640 培養基），置于37 ℃、5%CO2培養箱中培養36 h 后，應用葡萄糖-己糖激酶法葡萄糖檢測試劑盒，在酶標儀450 nm 波長處檢測培養液中葡萄糖含量，計算葡萄糖消耗量以鑒定HTR-8/Svneo-IR 模型。計算公式：葡萄糖消耗量=模型組（或正常對照組）細胞上清液葡萄糖含量—空白對照組上清液葡萄糖含量。

1.5 HTR-8/Svneo 細胞轉染和分組取處于對數生長期的HTR-8/Svneo 細胞，用0.25%含EDTA胰蛋白酶常規消化后，常規培養基調整細胞密度至6×105mL－1，取2 mL 細胞懸液接種于6 孔細胞培養板中，待第2天細胞貼壁生長并融合至50%～70%時，更換為Opti-MEM培養基并根據LipofectamineTM2000說明書進行轉染，將miR-508-3p inhibitor 或對應的陰性對照序列（miR-NC） 轉染入HTR-8/Svneo-IR 細胞內。細胞分組：正常對照組 （HTR-8/Svneo 組），即無任何處理的HTR-8/Svneo 細胞；IR 組（HTR-8/Svneo-IR 組），即方法“1.4”中建立的IR 細胞模型；miR-508-3p 抑制組（miR-508-3p-inhibitor-IR 組），即轉染了miR-508-3p inhibitor的HTR-8/Svneo-IR 細胞；miR-NC-IR 組，即轉染了miR-NC 的HTR-8/Svneo-IR 細胞。收集轉染48 h 后的細胞進行后續實驗。

1.6 實時定量PCR（RT-PCR）法檢測胎盤組織和HTR-8/Svneo 細胞中miR-508-3p 表達水平Trizol法提取胎盤組織及“1.5”中各組細胞中的總RNA，檢測RNA 濃度及純度后，根據逆轉錄試劑盒進行逆轉錄，合成cDNA。在按照RT-PCR 配置體系加樣后，依照試劑說明書與預實驗設定的溫度與時間將cDNA 在實時PCR 儀上進行定量。反應條件：95 ℃預變性30 s；95 ℃變性6 s，60 ℃退火，延伸35 s，40 個循環。引物序列：miR-508-3p，上游引物5′-ACACTCCAGCTGGGTA-3′，下游 引 物 5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′；GAPDH，上 游 引 物 5′-GGAGAAACCTGCCAAGTATG-3′，下 游 引 物 5′-TTACTCCTTGGAGGCCATGTAG-3′。以GAPDH 為內參，采用2－ΔΔCt法 計 算 胎 盤 組 織 和HRT8/Svneo 細 胞 中miR-508-3p 表達水平。實驗重復3 次。

1.7 雙熒光素酶報告基因實驗應用miRNA 靶基因在線數據庫Targetscan 對miR-508-3p 目標靶基因進行預測，篩選HGF 進行實驗。取處于對數生長期的HTR-8/Svneo 細胞，調整細胞密度至3×105個/孔，接種至6 孔細胞培養板中，常規培養24 h 后，將細胞分為pmirGLO-HGF-WT+miR-508-3p mimic組、pmirGLO-HGF-WT+miR-NC組、pmirGLO-HGF-MUT+miR-508-3p mimic 組 和pmirGLO-HGF-MUT+miR-NC 組，進行細胞共轉染，每組設5 個復孔。轉染48 h 后，按照雙熒光素酶檢測試劑盒說明書進行操作，檢測HGF 啟動子的熒光強度，即為細胞中熒光素酶活性。

1.8 免疫印跡法檢測胎盤組織和HTR-8/Svneo 細胞中HGF、p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達水平將于液氮中碾碎的胎盤組織或各組HTR-8/Svneo 細胞置于冰上，加入RIPA 裂解液冰上裂解30 min，12 000 r·min－1、4 ℃離心15 min后取上清液，BCA法進行蛋白定量，按1∶4 比例向上清液中加入5×蛋白上樣緩沖液，并于沸水中加熱變性10 min。SDS分離膠及濃縮膠配置完成后，加入30 μg 蛋白樣品及3 μL 蛋白Marker 進行聚丙烯酰胺凝膠（SDSPAGE） 電泳以分離蛋白條帶。待電泳結束后，300 mA 電流90 min 進行轉膜，5%脫脂牛奶于室溫下封閉2 h 后，TBST 洗膜3 次，每次5 min。加入稀釋后的一抗HGF（1∶800）、p-PI3K（1∶500）、p-AKT（1∶500）和β-actin（1∶2 000），4 ℃搖床孵育過夜。次日TBST 溶液清洗3 次，每次5 min，置于HRP 標記的山羊抗鼠二抗（1∶5 000） 室溫振蕩1 h，再次TBST 溶液清洗3 次，每次5 min。最后均勻滴加ECL 發光液后于凝膠成像儀進行曝光拍照。Image J 軟件測定條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與內參β-actin 條帶灰度值的比值表示目的蛋白的相對表達水平。實驗重復3 次。

1.9 統計學分析采用SPSS 19.0 和GraphPad Prism 5.0 統計軟件進行統計學分析及繪制相關圖表。2 組孕產婦年齡、孕周、體質量指數（body mass index，BMI）、新生兒體質量和胎盤質量，胎盤組織中miR-508-3p 表達水平和HGF 蛋白表達水平，滋養細胞培養上清液中葡萄糖含量，各組細 胞 中 miR-508-3p、 HGF、 p-PI3K 和p-AKT蛋白表達水平，經正態性檢驗均符合正態分布，均以表示，多組間樣本均數比較采用單因素方差分析，2 組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；2 組產婦胎盤組織中HGF 陽性表達率比較采用χ2檢驗；GDM 患者胎盤組織中miR-508-3p 表達水平與HGF蛋白表達水平相關性采用Pearson相關性分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 正常對照組和GDM組孕產婦一般資料與正常對照組比較，GDM 組產婦年齡、孕周和BMI差異均無統計學意義（P＞0.05），而新生兒體質量和胎盤質量均明顯增加（P＜0.05）。見表1。

2.2 2 組產婦胎盤組織中miR-508-3p 表達水平與正常對照組（1.21±0.54）比較，GDM 組產婦胎盤組織中miR-508-3p 表達水平（3.69±0.41）明顯升高（P＜0.05）。

表1 正常對照組和GDM 組孕產婦一般資料Tab. 1 General informations of pregnant women in normal control group and GDM group

表1 正常對照組和GDM 組孕產婦一般資料Tab. 1 General informations of pregnant women in normal control group and GDM group

*P＜0.05 vs normal control group.

Group Placental weight(m/g)550±223 569±287*Age(year)Gestational week Normal control GDM 30.55±2.98 30.17±3.80 37.17±3.13 37.63±2.52 BMI(kg·m－2)21.13±3.31 22.47±2.43 Birthweight(m/kg)3.42±0.36 3.71±0.59*

2.3 2 組產婦胎盤組織中HGF 蛋白表達水平及其與miR-508-3p 表達水平的相關性免疫組織化學染色結果顯示：HGF 多表達于胎盤組織的滋養細胞胞質中，與正常對照組（85.7%）比較，GDM組產婦胎盤組織中HGF 陽性表達率（44.1%）明顯降低（P＜0.05）（圖1）。免疫印跡法檢測結果：GDM 組產婦胎盤組織中HGF 蛋白表達水平（0.23±0.06）明顯低于正常對照組（0.84±0.09）（P＜0.05）（圖2）。Pearson 相關性分析顯示：15 例GDM 組產婦胎盤組織中HGF 蛋白表達水平與 miR-508-3p 表達水平呈負相關關系（r=－0.542，P＜0.05）（圖3）。

圖1 正常對照組（A）和GDM 組（B）產婦胎盤組織中HGF 陽性表達（免疫組織化學，×400）Fig. 1 Positive expressions of HGF in maternal placental tissue in normal control group(A) and GDM group(B)(Immunohistochemistry,×400)

圖2 免疫印跡法檢測2 組產婦胎盤組織中HGF 蛋白表達電泳圖Fig. 2 Electrophoregram of expressions of HGF protein in maternal placental tissue in two groups detected by Western blotting method

圖3 GDM 組產婦胎盤組織中HGF 蛋白表達水平與miR-508-3p 表達水平的相關性Fig. 3 Relationship between HGF protein expression level and miR-508-3p expression level in placenta tissue of pregnant women in GDM group

2.4 雙熒光素酶報告基因實驗檢測HTR-8/Svneo細 胞 中 miR-508-3p 與 HGF 的 靶 向 關 系TargetScan 預 測 結 果 顯 示： HGF mRNA 的3′-UTR 與miR-508-3p 具有結合位點（圖4A）。雙熒光素酶報告基因實驗結果顯示： pmirGLOHGF-WT+miR-508-3p mimic 組細胞熒光素酶活性明 顯 低 于pmirGLO-HGF-WT+miR-NC 組（P＜0.05），而pmirGLO-HGF-MUT+miR-508-3p mimic組與pmirGLO-HGF-MUT+miR-NC 組細胞熒光素酶活性比較差異無統計學意義（P＞0.05）（圖4B）。

圖4 雙熒光素酶報告基因實驗中各組HTR-8/Svneo細胞中熒光素酶活性Fig. 4 Luciferase activities in HTR-8/Svneo cells in various groups in double-luciferase reporter gene assay

2.5 HTR-8/Svneo-IR 模型鑒定1×107mol·L－1胰島素處理HTR-8/SVneo 36 h后，HTR-8/SVneo-IR組細胞葡萄糖消耗量［（1.96±0.31）mmol·L－1］與HTR-8/SVneo 組［（5.73±0.42） mmol·L－1］比較明顯降低（P＜0.01），提示HTR-8/Svneo-IR模型成功建立。

2.6 各組細胞中miR-508-3p 表達水平與HTR-8/Svneo 組 比 較，HTR-8/Svneo-IR 組 和miR-NC-IR 組細胞中miR-508-3p 表達水平明顯升 高（P＜0.05），miR-508-3p-inhibitor-IR 組細胞中miR-508-3p 表達水平差異無統計學意義（P＞0.05）；與HTR-8/Svneo-IR 組 比 較，miR-508-3pinhibitor-IR 組細胞中miR-508-3p 表達水平明顯降低（P＜0.05），miR-NC-IR 組細胞中miR-508-3p 表達水平差異無統計學意義（P＞0.05）。見圖5。

圖5 各組細胞中miR-508-3p 表達水平Fig.5 Expression levels of miR-508-3p in cells in various groups

2.7 各組細胞中HGF、p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達水平與HTR-8/Svneo 組比較，HTR-8/Svneo-IR組和miR-NC-IR 組細胞中HGF、p-PI3K 和p-AKT蛋白水平表達明顯降低（P＜0.05），miR-508-3pinhibitor-IR 組細胞中HGF、p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達水平差異無統計學意義（P＞0.05）；與HTR-8/Svneo-IR 組比較，miR-508-3p-inhibitor-IR組細胞中HGF、p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05），miR-NC-IR 組細胞中上述蛋白表達水平差異均無統計學意義（P＞0.05）。見 圖6 和表2。

圖6 各組細胞中HGF、p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達電泳圖Fig. 6 Electrophoregram of HGF, p-PI3K, and p-AKT proteins in cells in various groups

3 討 論

GDM 是妊娠期常見并發癥，嚴重影響母嬰健康。GDM 除可造成巨大兒、胎兒發育異常、新生兒低血糖和妊娠期高血壓等不良妊娠結局外，GDM 患者及其子代發生代謝性疾病的遠期風險也明顯增加［8］。迄今為止，GDM 的發病機制尚存在爭議，但國內外多數學者認為IR 是GDM 發生的主要病理生理機制。IR 是指在機體內，胰島素作用的靶器官或組織對其生物學效應的敏感性出現降低或者喪失的一種狀態，主要表現為體內胰島素介導的葡萄糖利用率降低［9］。因此，積極尋找IR 相關治療靶點，對于全面認識GDM 的發病機制和更好地改善臨床治療及預后均具有十分重要的意義。

表2 各組細胞中HGF、p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達水平Tab.2 Expression levels of HGF, p-PI3K, and p-AKT proteins in cells in various groups

表2 各組細胞中HGF、p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達水平Tab.2 Expression levels of HGF, p-PI3K, and p-AKT proteins in cells in various groups

*P＜0.05 vs HTR-8/Svneo group；ΔP＜0.05 vs HTR-8/Svneo-IR group.

Group HTR-8/Svneo HTR-8/Svneo-IR miR-NC-IR miR-508-3p-inhibitor-IR HGF 0.54±0.11 0.21±0.02*0.19±0.05*0.81±0.07Δ p-PI3K 0.34±0.09 0.11±0.02*0.09±0.01*0.77±0.10Δ p-AKT 0.13±0.01 0.06±0.02*0.04±0.01*0.51±0.04Δ

miRNA 是一類小非編碼RNA，占基因組1%的miRNA 可參與調控近30%的生物學活動［10-11］。在GDM 患者胎盤組織中有多種miRNA 存在差異性表達，miR-508-3p 是其中之一。LI 等［3］分別對15 例GDM 患者和正常健康產婦的胎盤組織進行miRNA 表達譜進行芯片分析后結果顯示：miR-508-3p 在GDM 患者胎盤組織中表達水平明顯升高。進一步體外實驗［3］結果顯示：miR-508-3p 可能通過表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）/PI3K/AKT 信號通路調節滋養細胞功能，參與GDM 的發生發展。

HGF 是在1986 年首次從大鼠血漿和血小板中分離純化得到的一種多功能生長因子，既往研究［12］顯示：HGF 主要由成纖維細胞及其他基質細胞分泌合成，并通過與其受體—間質表皮轉化因子 （c-mesenchymal-epithelia transition，c-MET）相互作用，在多種疾病中發揮重要作用。近年來研究［13-14］表明：HGF 在胎盤組織中表達豐富，其主要由胎盤絨毛間質細胞分泌，通過旁分泌的形式與滋養細胞及絨毛血管內皮細胞表面的HGF 受體相結合進行調控。UEHARA 等［15］報道：特異性敲除HGF 基因的小鼠在妊娠后，胎盤組織中的正常形態滋養細胞的數量明顯下降，進而影響胎盤組織的正常功能，最終導致胚胎生長受限甚至胎死宮內，提示HGF 對滋養細胞功能、胎盤形成及妊娠的維持具有十分重要的作用。國內多數學者研究［16-17］證實：HGF 在GDM 患者胎盤組織中的表達較正常妊娠產婦明顯降低，推測其可能參與GDM 的發生發展。HGF 是IR 病理生理過程中的關鍵作用蛋白，參與多種胰島素敏感細胞類型的葡萄糖轉運及代謝途徑。在小鼠胰腺β 細胞中過表達HGF 能明顯促進葡萄糖轉運蛋白2 （glucose transporter-2，GLUT-2） 及葡萄糖激酶的表達，進而促進β 細胞對葡萄糖的攝取和利用［18］；敲除HGF 在成年小鼠體內表達，能夠導致小鼠葡萄糖耐量受損并降低胰島素的敏感性［19］。上述研究結果提示：HGF 在IR 中起關鍵作用。滋養細胞作為胎盤組織中的主要功能細胞，有研究［20］證實：在GDM 患者中滋養細胞對胰島素的敏感性明顯降低，即出現IR 現象。PI3K 是一種細胞內磷脂酰肌醇激酶，當細胞受到生長因子、血管內皮因子和胰島素等刺激后，可發生磷酸化而激活，而活化的PI3K可誘導下游的AKT 蛋白與細胞膜表面相應受體進行結合，并使AKT 發生磷酸化，隨后使其從細胞膜釋放進入細胞質內傳遞信號。研究［21-23］證實：胰島素主要通過PI3K/AKT 信號通路進行代謝，與葡萄糖轉運及IR 等多種活動有密切關聯。

本研究結果顯示：GDM 組患者胎盤組織中miR-508-3p 表達水平明顯高于正常對照組，而HGF 在胎盤中的表達水平與之相反，即HGF 在GDM 患者胎盤組織中的表達較對照組明顯降低；進一步通過相關性分析顯示：兩者在胎盤組織中的表達水平呈負相關關系，結合本課題組前期利用生物 信 息 學 技 術 分 析 結 果（HGF 的3′UTR 存 在miR-508-3p 的結合位點），在GDM 中miR-508-3p可能參與調控HGF 的表達，且兩者均參與GDM的發生發展過程。本研究體外實驗結果顯示：通過人滋養細胞系HTR-8/Sneo 驗證了miR-508-3p 對HGF 具有靶向調控作用。本研究成功建立HTR-8/Sneo-IR 模型，采用脂質體瞬時轉染技術對其進行miR-508-3p-inhibitor 轉 染，RT-PCR 檢 測 結 果 顯示：HTR-8/Sneo-IR 模型細胞中miR-508-3p 表達水平明顯升高，而轉染miR-508-3p inhibitor 后其表達水平明顯降低；利用免疫印跡法檢測上述細胞中PI3K/AKT 信號通路相關蛋白的表達情況，HTR-8/Sneo-IR 細胞中p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達水平均明顯降低，而miR-508-3p-inhibitor-IR 組細胞中p-PI3K 和p-AKT 蛋白表達水平下調趨勢被明顯削弱。

綜上所述，GDM 患者胎盤組織中miR-508-3p表達水平明顯升高，其能夠靶向抑制HGF 表達水平，進而通過PI3K/AKT 信號通路促進滋養細胞的IR，參與GDM 的發生發展過程。本研究結果可為探究miR-508-3p 在GDM 中的作用提供新的理論依據，然而上述機制僅為miR-508-3p 的一個作用方面，關于其在GDM 中的其他作用機制仍有待進一步研究。