國產與進口尼莫地平片溶出曲線相似性分析*

孔彬，劉曉霞

(新疆生產建設兵團醫院藥學部，烏魯木齊 830002)

尼莫地平是1，4-二氫吡啶類鈣離子拮抗劑，其主要作用為抑制血管平滑肌細胞外鈣離子內流，臨床上主要用于缺血性腦血管疾病、蛛網膜下腔出血、突發性耳聾及輕、中度高血壓等[1]。溶出度是口服藥品固體制劑的重要質量指標[2]，《中華人民共和國藥典》2015年版規定，尼莫地平片溶出度測定采用普通溶出儀，按照溶出度釋放度測定法(通則0931第二法)[3]。該藥物生產廠家較多，當前我國國家藥品監督部門開展的“國家仿制藥質量一致性評價”工作[4-5]，要求國產與原研藥品生物等效，因此在模擬的胃腸道環境下，在各種溶出介質中均具有相似的溶出度曲線[6-8]，這對于控制藥品工藝將起到重要作用。筆者在本研究采用光纖藥物溶出度實時測定儀(fiber-optic medicine dissolution process monitoring system-601，FODT-601)測定[9]，以德國拜耳公司原研生產尼莫地平片為對照，隨機選取國內6個廠家生產的尼莫地平片，按一致性評價原則采用水、pH值6.8磷酸鹽緩沖液、pH值1.2鹽酸、pH值4.5醋酸鹽緩沖液4種溶出介質模擬胃腸道環境，雙波長法扣除輔料，無需濾過，通過FODT-601直接測定該藥物的吸光度，不用稀釋溶出液，減少人工環節和誤差，并通過儀器自動測定，實現原位、實時、直接獲得完整的溶出度曲線，計算f2因子，對相似性進行評價[10]，為仿制藥質量一致性評價考察藥物溶出度提供檢測手段。

1 材料

1.1藥品與試劑 尼莫地平對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100270-200002，含量：100%)；尼莫地平片(A廠，拜耳醫藥保健有限公司，規格：每片30 mg，批號：BJ18197；B廠，產地：山西，規格：每片20 mg，批號：131245；C廠，產地：西安，規格：每片20 mg，批號：E1406009；D廠，產地：杭州，規格：每片20 mg，批號：140311；E廠，產地：河北，規格：每片20 mg，批號：023140204；F廠，產地：天津，規格：每片20 mg，批號：140403；G廠，產地：鄭州，規格：每片20 mg，批號：140402)。磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、冰醋酸、醋酸鈉、濃鹽酸均為分析純，水為純化水。

1.2儀器與設備 光纖藥物溶出度實時測定儀(型號：FODT-601，上海富科思生物技術發展有限公司)、電子分析天平(型號：AB135-S，梅特勒-托利多儀器公司，感量為0.01 mg)、真空脫氣儀(型號：ZKT-18，天大天發儀器有限公司)。

2 方法與結果

2.1溶液的制備

2.1.1溶出介質 ①水[含0.3%十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate，SDS)]；②pH值 1.2鹽酸溶液(含0.3%SDS)③pH值4.5醋酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)④pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)。

2.1.2對照品溶液 精密稱取尼莫地平對照品6.81，6.62，6.74，6.81 mg，分別置于100 mL量瓶中，使用4種溶出介質分別溶解、稀釋至刻度，制成對照品溶液。精密量取濃度為68.1，66.2，67.4，68.1 μg·mL-1的尼莫地平對照品溶液5.0，10.0，15.0，20.0，28.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，作為系列濃度溶液。

2.2專屬性考察 取濃度為34.2 μg·mL-1尼莫地平對照溶液在FODT-601的6個通道上在220～550 nm波長范圍內掃描光譜。結果238 nm波長處吸光度符合測定要求，確定該測定波長，采用550 nm為參比波長，用雙波長法消除輔料干擾。

2.3線性關系考察 分別精密量取“2.1.2”項系列溶液，進樣測定，以相對百分濃度(C)為縱坐標，吸光度(A)為橫坐標，進行溶出度實驗。相對百分濃度(C)范圍，水：20.43%～114.32%；pH值1.2鹽酸溶液：19.86%～111.23%；pH值 4.5醋酸鹽緩沖液20.22%～113.24%；pH值6.8磷酸鹽緩沖液20.43%～114.42%。線性曲線的回歸方程見表1～4。

表1 溶出介質為水(含0.3%SDS)時的回歸方程

表2 溶出介質為pH值1.2鹽酸溶液(含0.3%SDS)的回歸方程

表3 溶出介質為pH值4.5醋酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)的回歸方程

2.4精密度實驗 取“2.1.2”項的對照品溶液，在FODT-601上24 h內連續測定6次A值，結果A值RSD=0.68%(n=6)；連續測定6 d，結果A值RSD=1.13%(n=6)，說明該方法日內精密度及日間精密度均為良好。

表4 溶出介質為pH值6.8磷酸鹽緩沖液(含0.3%SDS)的回歸方程

2.5回收率實驗 精密稱取尼莫地平藥粉適量(相當于尼莫地平5 mg)，置100 mL量瓶中，用溶媒溶解稀釋至刻度，分別加入尼莫地平對照品約12.0，18.0，22.0 mg，配制成低、中、高濃度供試品溶液各3份，用溶媒稀釋至刻度，搖勻。同法制備其他3種溶媒的供試品溶液。分別在FODT-601上測定A值，代入標準方程，計算方法回收率。結果4種低、中、高濃度供試品溶液平均回收率為95.4%～102.3%，RSD為2.12%～3.52%(n=3)，說明該方法的準確度較好。見表5。

2.6穩定性實驗 量取溶出實驗過程中30 min時溶出液適量，分別于室溫放置0，4，8，12，24 h，在FODT-601上238 nm波長處掃描測定A值，24 h內連續測定5次，測得吸光度的RSD=2.60%，表明該供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.7溶出曲線測定 采用FODT-601，轉籃法，2 mm的測定探頭，溶媒900 mL，轉速：100 r·min-1，溫度：(37±0.5)℃，打開溶出儀監測系統輸入溶出度測定參數，掃描空白溶液之后，在經脫氣處理的溶媒中投入藥片，開始監測：時間30 min。在4種溶媒里測定7個不同廠家的溶出曲線結果：原位在線監測，每分鐘采樣1次，將7個廠家每個廠家12片藥片平均值匯總后，得到30 min內平均溶出曲線，對4種不同溶媒中不同廠家藥片平均曲線比較，見圖1。同一廠家在不同溶媒中的平均溶出曲線比較見圖2。

結果表明：參比制劑A廠在4種溶媒中的實時溶出曲線及溶出百分率均>80%，但是在pH值6.8磷酸鹽緩沖液中溶出速度較快。B、C廠在4種溶出介質中溶出百分率均小于<65%。D廠在4種不同溶媒中溶出曲線顯示：在pH值1.2鹽酸和水中溶出百分率<60%，pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液中溶出百分率均>60%，在pH值6.8磷酸鹽緩沖液中溶出速度較慢。E廠在4種溶媒中溶出曲線趨勢較一致，在水中溶出速度較快，溶出百分率均<80%。F廠在4種溶媒中溶出曲線趨勢不一致，溶出百分率均<70%。G廠在4種溶媒中溶出曲線趨勢較一致，但溶出百分率均<70%。綜合以上得出：在4種溶媒中，6個廠家藥品終點溶出百分率均<80%，只有原研藥廠A廠的終點溶出百分率>80%。

表5 尼莫地平回收率實驗結果

A：水溶液；B.pH值6.8磷酸鹽緩沖液；C.pH值4.5醋酸鹽緩沖液；D.pH值1.2鹽酸溶液。

本研究用A廠作為參比制劑，將A廠溶出85%時間為Ta，取樣時間為1/4Ta，2/4Ta，3/4Ta，Ta，且溶出量超過85%取樣點不超過一個，第一個取樣時間點溶出量的(n=12)不超過20%，其余取樣點的RSD不超過10%。f2值見表6。

表6顯示，只有在水中，E、F與原研藥(參比制劑)比較后f2值大于50，與參比制劑A廠溶出曲線具有相似性，其余藥廠在4種溶出介質中相似因子比較f2值均低于50，曲線與參比制劑無相似性。

圖2 不同廠家產品在不同溶媒的溶出曲線

表6 6個廠家與參比制劑比較的f2值

3 討論

描繪完整的溶出曲線可以反映藥物體外溶出行為，進一步判斷生產工藝是否符合規定。人體消化道體液的pH值全范圍(pH值1.2～6.8)差異較大，在不同pH值條件下藥物溶出不同會導致吸收效果有較大差異，仿制藥與原研藥多條特征溶出曲線對比后，盡可能一致，才能確?？诜腆w制劑對于不同患者均有較高的生物利用度[10]。本研究參照日本橙皮書及國家“仿制藥質量一致性評價工作方案”指導原則中規定，在4種不同pH值模擬胃腸液中測定尼莫地平片的溶出曲線，用f2法進行相似性比較，在水中只有E、F兩廠f2值>50，與A廠溶出曲線相似，其余均無相似性。從結果可以看出，本研究實驗7個廠家藥品在4種溶出介質中4溶出曲線的一致性較差，受試制劑與A廠參比制劑比較，在模擬人體各種胃腸液環境中體外溶出曲線相似性較低，還需引起注意，改善制劑工藝水平。

《中華人民共和國藥典》2015年版中規定[3]，在尼莫地平片測定溶出度時，普通溶出儀測定過程中，手工取液后濾過并稀釋，紫外分光光度計測定吸光度后再計算累積溶出百分率，當終點結果符合要求后，還需手動擬合曲線。步驟復雜，并產生較多不必要人為實驗誤差。本研究采用“光纖藥物溶出度實時測定方法”測定溶出曲線[9]，采用雙波長法自動扣除輔料對測定的干擾，調節光程探頭測定吸光度，不需要稀釋，節省人工時間，減少人為誤差，實現原位、實時、測定獲得溶出曲線，軟件進行f2計算，獲得曲線相似性結果。數據來源真實、方便、準確。

目前《中華人民共和國藥典》溶出度標準是單一介質、測定終點溶出度及溶出限度來質控藥品溶出度，很難全面評價一種劑型的仿制藥品的溶出曲線。為使患者服用不同廠家藥物的臨床療效一致，仿制藥必須與原研藥進行質量對比和生物等效性研究[4]。仿制藥一致性評價不僅包括體內生物等效性評價，也包括系統的藥學質量評價[5]，多種溶出介質下的溶出曲線測定能夠模擬口服制劑的體內藥動學過程，是藥學質量評價的重要過程。我國正在開展“仿制藥質量一致性評價”工作，并規定指導原則及實施細則與方案，溶出度實驗的重要性已深入人心，且國家藥品審評中心也已制定強制性要求，目的就在于提升藥品的質量與品質。本研究采用的實驗方法以仿制藥一致性評價指導原則為根據，對仿制藥溶出曲線進行全面的研究，為提高我國藥品制劑水平提供新的技術方法。