脂聯素基因多態性與浙江漢族人群原發性高血壓的相關性

范宏彥 鄭文文 翟昌林

高血壓是血管性疾病的主要危險因素，也是全球健康負擔的主要來源[1]。雖然原發性高血壓（essential hypertension，EH）的病因學尚未完全闡明，但基因與環境因素的相互作用在EH 的病理生理過程中發揮了重要作用[2]。脂聯素是一種脂肪細胞因子，既往研究發現在心血管疾病、EH、肥胖和2 型糖尿病等疾病中均有血漿脂聯素水平的降低[3-5]，提示脂聯素可能在高血壓的發病機制中起著重要作用。國內外關于脂聯素基因單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphisms，SNP）與EH 關聯研究的結果并不一致。本研究旨在探討浙江地區漢族人群脂聯素基因rs1501299 和rs2241766 位點多態性與EH之間的相關性，為EH 機制的研究提供一定依據。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2018 年1 月至2019 年6 月嘉興市第一醫院收治的EH 患者236 例為觀察組，其中男118 例，女118 例，均為漢族；另擇同期在本院進行健康體檢的265 例為對照組，其中男134 例，女131 例。本研究根據《中國高血壓防治指南（2018 年修訂版）》標準，高血壓定義為收縮壓≥140 mmHg和（或）舒張壓≥90 mmHg[6]。排除標準：繼發性高血壓、糖尿病、癌癥、冠心病、腦梗死等嚴重心腦血管疾病及其他引起高血壓的疾病。本研究經過醫院醫學倫理委員會批準（批準文號：LS2018-071）及所有受試者的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 實驗室指標檢測 收集患者性別、年齡，身高、體重，并計算體重指數（body mass index，BMI）。抽取空腹外周靜脈血5 mL，測定甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）及低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）。

1.2.2 基因組DNA 提取及分型 采用DNeasy 血液/組織基因組DNA 提取試劑盒（德國Qiagen 公司）提取外周血全基因組DNA。采用競爭性等位基因 特 異 性PCR （kompetitive allele specific PCR，KASP）檢測所有受試者的脂聯素基因rs1501299 和rs2241766 位點的基因型，引物序列見表1（引物由北京一道生物科技有限公司提供）。具體步驟：首先檢測所有DNA 樣本，將質檢合格的DNA 進行稀釋，最終濃度為5 ng/μL。取2 μLDNA 樣本，在55 ℃45 min 烘干，再配置混合物（mix），3 μL 體系[包括2X KASP master mix（北京梓熙生物科技有限公司）及引物mix]，然后在ABI 7900 儀器上進行預讀，再在ABI 9700 PCR 儀上進行PCR 反應，94 ℃5 min，94℃20 s，61 ℃1 min，共10 個循環；94 ℃20 s，55 ℃1 min，共26 個循環；最后72 ℃1 min。完成后，在ABI 7900 儀器上讀出，通過SDS2.4 進行基因分型和判讀。

1.3 統計學處理 采用SPSS 20.0 統計軟件，符合正態分布的計量資料以表示，不符合正態分布的計量資料以M（P25，P75）表示，組間比較采用獨立樣本t 檢驗；計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。基因型分布采用Hardy-Weinberg 平衡檢驗，采用χ2檢驗分析兩組等位基因頻率和基因型頻率，并計算OR 值和95%CI；采用非條件logistic 回歸分析EH 的危險因素。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 見表2。

由表2 可見，觀察組年齡、BMI、TC 水平均高于對照組，差異均有統計學意義（均P＜0.01），其余指標差異均無統計學意義（均P ＞0.05）。

2.2 脂聯素基因各位點Hardy-Weinberg 平衡檢驗本研究選取了脂聯素基因2 個SNP 位點（rs1501299、rs2241766），均符合Hardy-Weinberg 平衡（均P ＞0.05），表明樣本具有群體代表性。

2.3 脂聯素基因各位點基因型和等位基因頻率分布 見表3、4。

由表3、4 可見，脂聯素基因rs1501299 基因型頻率在觀察組和對照組間分布差異有統計學意義（P ＜0.05）；在顯性模型中，觀察組rs1501299 CC+CA 基因型頻率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.4 脂聯素基因rs1501299 基因型各臨床指標比較見表5。

由表5 可見，在顯性模型下，按總研究人群以及不同性別分類，男性BMI 在脂聯素基因rs1501299的不同基因型中差異有統計學意義，CC+CA 基因型BMI 高于AA 基因型（P＜0.01）。

2.5 EH 危險因素的logistic 回歸分析 見表6。

由表6 可見，以是否發生EH 作為因變量，選擇年齡、TC、BMI、rs1501299 基因型作為自變量，logistic回歸分析顯示，年齡、TC、BMI≥25 kg/m2、rs1501299 CC 及CA 基因型是EH 的危險因素（均P＜0.05）。

表2 兩組一般資料比較

表3 脂聯素基因各位點基因型和等位基因頻率分布

表4 脂聯素基因各位點兩種遺傳模型基因頻率分布

表5 脂聯素基因rs1501299 基因型各臨床指標比較

3 討論

EH 是心腦血管疾病的主要危險因素之一，影響著全球近27%的人口，預計到2025 年，患病人數將增加約60%，總數達到15.6 億[7]。在中國，患有EH的成年人占總人口的27.9%[8]。目前認為脂肪細胞通過分泌大量生物活性因子參與體內多種生物功能調節[9]。脂聯素是一種脂肪細胞分泌激素，是目前唯一發現的對人體有保護作用的脂肪細胞因子[10]。有體外研究表明脂聯素可以刺激一氧化氮的產生并且改善內皮功能，同時還具有調節機體新陳代謝和免疫反應的作用[11-14]。循環中相對較高的脂聯素濃度（5～30 μg/mL）與血壓值以及未來發生高血壓的風險呈反比[15-17]。值得注意的是，人類脂聯素的濃度主要受遺傳因素影響，估計遺傳力為40%～70%[18]。脂聯素基因由ADIPOQ 編碼，位于染色體3q27 區域，包含3 個外顯子，跨度約17 kb，該基因編碼的蛋白含有244 個氨基酸，包含4 個結構域：N 端信號序列、膠原型結構域、可變區域、C 端球狀結構域[19]。目前，大量研究均有發現脂聯素基因存在EH、2 型糖尿病、代謝綜合征的易感位點。

表6 EH 危險因素的logistic 回歸分析

大多數已發表的研究探討了脂聯素基因rs2241766、rs1501299 多態性與發生EH 風險的關系[20-25]，但結果是不一致的。Mousavinasab 等[22]關于芬蘭人群的研究發現脂聯素基因rs2241766 和rs1501299 的多態性與EH 風險明顯相關。Ronconi等[23]研究也顯示rs2241766 及rs1501299 與意大利人群EH 相關。但Yan 等[24]在中國人群中的研究發現，rs2241766 和rs1501299 與EH 無明顯相關性。康莊等[25]關于大理白族人群的研究則發現rs2241766與EH 發生有關，而rs1501299 與EH 無關。本研究發現中國浙江漢族人群脂聯素基因rs1501299 多態性與EH 的發病風險明顯相關，而rs2241766 與EH無關，且經過調整了混雜因素的logistic 回歸分析進一步證明rs1501299 CC、CA 基因型是浙江地區EH的危險因素。本研究結果與既往研究存在差異，考慮原因有以下幾點：（1）因不同地區、不同種族的遺傳背景、生活環境及生活習慣有很大差距，將導致結果的差異性；（2）本研究將性別、年齡、BMI 等影響EH 的危險因素均納入了回歸分析，而其他一些研究則忽略了混雜因素的影響，因而可能導致結果的差異性；（3）本研究樣本含量較小，且只選擇了浙江單地區的研究人群，缺乏更大樣本量的抽樣調查，從而可能導致結果的差異性。

眾所周知，超重和肥胖是EH 的一個獨立危險因素。研究發現BMI 與血壓水平呈正比，BMI 每增加3 kg/m2，4 年內EH 的發生風險，女性增加57%，男性增加50%[6]。而脂聯素基因作為脂肪細胞因子，參與調節機體胰島素、血糖、脂質代謝，具有胰島素增敏、抗炎以及抗動脈粥樣硬化的功能，在肥胖、2 型糖尿病、EH 等代謝性疾病中發揮重要作用[26]。本研究結果提示TC、BMI≥25 kg/m2是EH 的危險因素，這與既往研究相符。本研究還發現在男性研究人群中攜帶脂聯素基因rs1501299 CC+CA 基因型者具有更高的BMI 水平，這表明脂聯素基因變異可能與肥胖密切相關，而肥胖作為EH 的重要危險因素，進一步表明脂聯素基因可能通過脂質代謝等途徑參與EH 的發生、發展。

綜上所述，本研究初步探討了脂聯素基因與EH 之間的相關性，發現脂聯素基因rs1501299 與浙江漢族人群EH 的風險相關。但本研究樣本量小、為橫斷面研究，且缺乏血清脂聯素等更具相關性的生化指標，因此尚需更多關于脂聯素基因與EH 發生發展的機制研究。