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基于近紅外高光譜成像鑒別不同產(chǎn)地的紅參

2021-02-18 09:56:04沈國(guó)芳黃俊航許麥成金強(qiáng)
世界中醫(yī)藥 2021年23期

沈國(guó)芳 黃俊航 許麥成 金強(qiáng)

摘要 目的:建立一種基于近紅外(NIR)高光譜成像技術(shù)融合近紅外光譜和圖像紋理特征,鑒別不同產(chǎn)地紅參藥材的方法。方法:提取紅參ROI近紅外高光譜數(shù)據(jù),采用多種預(yù)處理算法對(duì)光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行降噪處理。利用灰度共生矩陣(GLCM)和灰度游程矩陣(GLRLM)提取圖像紋理特征,實(shí)現(xiàn)NIR光譜和圖像紋理數(shù)據(jù)融合。利用偏最小二乘判別分析(PLS-DA)和支持向量機(jī)分類(lèi)(SVC)建立產(chǎn)地分類(lèi)模型。結(jié)果:全波段光譜融合GLRLM所構(gòu)建的模型性能最佳,準(zhǔn)確率分別為90.0%和91.2%。進(jìn)一步地使用混淆矩陣和ROC曲線(xiàn)對(duì)模型進(jìn)行評(píng)估。混淆矩陣中SVC模型表現(xiàn)優(yōu)異,對(duì)吉林、黑龍江和遼寧3個(gè)產(chǎn)地的分類(lèi)準(zhǔn)確率可達(dá)100%、91%和83%;經(jīng)ROC特征曲線(xiàn)評(píng)估,2個(gè)模型的最優(yōu)曲線(xiàn)下面積值分別達(dá)到了0.97和0.96。結(jié)論:本研究為快速鑒別紅參藥材不同產(chǎn)地提供了一種新方法。

關(guān)鍵詞 高光譜成像;紅參;數(shù)據(jù)融合;產(chǎn)地鑒別

Discriminant Analysis of Red Ginseng from Different Origins Based on NIR-Hyperspectral Imaging Technology

SHEN Guofang1,HUANG Junhang2,XU Maicheng3,JIN Qiang3

(1 Hangzhou Institute for Food and Drug Control,Hangzhou 310022,China; 2 College of Pharmaceutical Science,Zhejiang University,Hangzhou 310058,China; 3 Hangzhou Huqingyutang Pharmaceutical Co.,Ltd.,Hangzhou 311100,China)

Abstract Objective:To establish a method based on near-infrared(NIR) hyperspectral imaging technology which could identify red ginseng from different origins by fusing NIR spectra and image texture features.Methods:The near-infrared hyperspectral data of red ginseng ROI were extracted to be further de-noised by various pre-processing algorithm.Texture features are extracted from images using gray co-occurrence matrix(GLCM) and gray run matrix(GLRLM),and near-infrared spectroscopy and image data are fused.Partial least squares discriminant analysis(PLS-DA) and support vector machine classification(SVC) were used here to establish the origin classification model.Results:The model constructed by full-band spectral combined with GLRLM gained the best performance,with accuracy of 90.0% and 91.2%,respectively.The model was further evaluated using confusion matrix and ROC curves.The SVC model performed better in the confusion matrix,with the classification accuracy of 100%,91% and 83% for red ginseng from Jilin,Heilongjiang and Liaoning.According to ROC characteristic curve evaluation,the areas under the optimal curve of the two models are 0.97 and 0.96,respectively.Conclusion:This research provides a new method for rapid identification of red ginseng from different origins.

Keywords Hyperspectral imaging; Red ginseng; Data fusion; Origin identification

中圖分類(lèi)號(hào):R282.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2021.23.003

紅參為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的栽培品經(jīng)蒸制后的干燥根和根莖。在我國(guó)主產(chǎn)于東北3省,具有大補(bǔ)元?dú)猓瑥?fù)脈固脫,益氣攝血的功效[1]。紅參作為一種常用中藥材,在中藥制劑中應(yīng)用廣泛,隨著對(duì)人參需求量的提升,人參栽培受限于連作障礙問(wèn)題,其產(chǎn)地由吉林為主向東北各地?cái)U(kuò)展,不同產(chǎn)地的人參及其加工品紅參存在著較大的質(zhì)量差異,為確保中藥制劑質(zhì)量穩(wěn)定,加強(qiáng)紅參原料質(zhì)量控制,對(duì)紅參產(chǎn)地進(jìn)行鑒別區(qū)分具有較大意義[2-6]。

傳統(tǒng)紅參鑒別以經(jīng)驗(yàn)判斷真?zhèn)蝺?yōu)劣和大致產(chǎn)地,受檢驗(yàn)人員個(gè)人經(jīng)驗(yàn)影響大、重復(fù)性差,隨著化學(xué)分析手段的進(jìn)步,薄層色譜、液相色譜等雖然能夠準(zhǔn)確檢測(cè)出樣本之間的差異,但前處理耗時(shí)費(fèi)力且檢測(cè)成本高,無(wú)法滿(mǎn)足工業(yè)化生產(chǎn)對(duì)紅參快速在線(xiàn)分選的要求[6-7]。高光譜成像(Hyper Spectral Imaging,HSI)技術(shù)能夠同時(shí)采集對(duì)象品質(zhì)屬性的光譜信息和圖像信息,是一種快速、無(wú)損、原位成像的檢測(cè)技術(shù)[8]。近幾年在食品、農(nóng)產(chǎn)品等領(lǐng)域的應(yīng)用較多,在中藥材甄別摻假品、硫熏品、染色增重品和含量不合格等領(lǐng)域也逐步開(kāi)始應(yīng)用[9~10]。本研究以來(lái)源不同產(chǎn)地的紅參樣品為研究對(duì)象,利用高光譜成像技術(shù)、光譜預(yù)處理、數(shù)據(jù)融合方法和分類(lèi)模型算法對(duì)不同產(chǎn)地的紅參進(jìn)行判別分析,使用混淆矩陣和ROC對(duì)不同模型預(yù)測(cè)性能進(jìn)行評(píng)估,對(duì)比了不同模型的分類(lèi)結(jié)果,為實(shí)現(xiàn)在線(xiàn)快速無(wú)損識(shí)別不同產(chǎn)地的紅參提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥材 實(shí)驗(yàn)用紅參藥材選自東北3省,分別是遼寧(6批次),吉林(11批次)和黑龍江(5批次)。經(jīng)杭州市食品藥品檢驗(yàn)研究院郭怡飚主任中藥師鑒定為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的栽培品經(jīng)蒸制后的干燥根。22批次紅參藥材共收集到304個(gè)紅參樣品用于高光譜圖像分析,其中遼寧產(chǎn)地紅參58根,黑龍江產(chǎn)地紅參110根,吉林產(chǎn)地紅參136根。按照Kennard-Stone算法將樣本分成訓(xùn)練集和測(cè)試集,其中訓(xùn)練集203樣本,測(cè)試集101個(gè)樣本。

1.2 儀器設(shè)備 本研究采用的高光譜成像系統(tǒng)由高光譜成像模塊、移動(dòng)平臺(tái)、均勻光源、計(jì)算機(jī)與圖像采集軟件等部分組成。高光譜成像模塊包含近紅外光譜相機(jī)(OWL-640-mini,Raptor Photonics),可調(diào)節(jié)近紅外聚焦透鏡(OLE23,Specim),2個(gè)150 W的鹵素?zé)簦?900ER,Illumination Technologies Inc.)和成像光譜儀(ImSpector-V10E,Specim);移動(dòng)平臺(tái)(ETH14,TOYO);圖像采集軟件為Spectral Image軟件(Isuzu Optics)。

1.3 高光譜成像系統(tǒng)的參數(shù)設(shè)置 水平移動(dòng)平臺(tái)的移動(dòng)速度為2.4 mm/s,鏡頭與樣品之間的距離為25 cm,電荷耦合器件(CCD)相機(jī)的曝光時(shí)間為26 ms。獲得的高光譜數(shù)據(jù)立方體,其寬度為640像素,長(zhǎng)為1 000像素,以1.67 nm的間隔從898~1 751 nm的512個(gè)波長(zhǎng)。

1.4 高光譜圖像的黑白板校正 在采集得到高光譜圖像后,為了減小光源不均勻、CCD相機(jī)的暗電流以及儀器物理配置的差異等對(duì)所獲得的高光譜反射率圖像的影響,需要對(duì)采集的原始高光譜圖像進(jìn)行黑白板校正,校正公式為:Rcal=Rraw-RdarkRwhite-Rdark式中,Rcal為校正后的高光譜數(shù)據(jù),Rraw為采集到的原始高光譜數(shù)據(jù),Rdark為蓋上相機(jī)鏡頭采集到的數(shù)據(jù)(反射率接近0),Rwhite為對(duì)準(zhǔn)Teflon白板采集到的數(shù)據(jù)(反射率接近1)。校正步驟采用HSI Analyzer軟件進(jìn)行。

1.5 提取ROI平均光譜 為節(jié)約提取感興趣區(qū)域(Region Of Interest,ROI)的時(shí)間,本實(shí)驗(yàn)采用Python3.6自動(dòng)提取ROI。高光譜圖像經(jīng)黑白板校正后,為最大程度區(qū)分開(kāi)樣品和背景,選擇與背景差異最大波段的灰度圖。將該灰度圖進(jìn)行二值化,得到二進(jìn)制圖像。最后提取二進(jìn)制圖像中紅參的輪廓,得到ROI。對(duì)ROI中每個(gè)波段灰度圖所有像素點(diǎn)的光譜反射率求平均值,得到ROI平均光譜。

1.6 光譜預(yù)處理和特征波長(zhǎng)提取 用合適的光譜預(yù)處理方法可以降低各種非目標(biāo)因素對(duì)檢測(cè)信號(hào)信息的影響,增強(qiáng)有用信息[7]。分別采用Savitzky-Golay(SG)平滑算法,基于SG平滑的一階導(dǎo)數(shù),基于SG平滑的一階導(dǎo)數(shù)二階導(dǎo)數(shù),標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)變量變換(SNV)算法和多元散射矯正(MSC)算法等對(duì)光譜進(jìn)行處理,并對(duì)這幾種預(yù)處理算法進(jìn)行比較。連續(xù)投影算法(Successive Projections Algorithm,SPA)是一種向前循環(huán)選擇方法,可以最大限度地消除變量中存在的共線(xiàn)性信息[11]。使用SPA對(duì)波段范圍內(nèi)光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行特征波長(zhǎng)提取,作為圖像紋理特征提取時(shí)的特征波段。

1.7 圖像紋理特征提取 分別通過(guò)灰度共生矩陣(Gray-Level Co-occurrence Matrix,GLCM)和灰度游程矩陣(Gray-Level Run-Length Matrix,GLRLM)方法提取圖像紋理特征。GLCM是一種經(jīng)典的圖像紋理提取方法,其主要描述局部空間域的強(qiáng)度變化。本研究從4個(gè)方向(0°,45°,90°,135°)提取GLCM的對(duì)比度、能量、逆差矩和熵,共獲得16個(gè)參數(shù)。GLRLM描述相同像素值在特定方向的分布,游走的長(zhǎng)度為游走方向的像素值[12]。長(zhǎng)游走長(zhǎng)度提取粗糙紋理,短游走長(zhǎng)度提取細(xì)膩紋理。本研究從GLRLM提取10個(gè)特征,分別為短游程因子、長(zhǎng)游程因子、灰度不均勻度、游程比、游程長(zhǎng)不均勻度、低灰度游程因子、高灰度游程因子、低灰度短游程因子、高灰度短游程因子、高灰度長(zhǎng)游程因子。高光譜圖像有數(shù)百個(gè)波段,若對(duì)所有波段相對(duì)應(yīng)的灰度圖像計(jì)算GLCM和GLRLM紋理,存在大量的冗余信息,且增加計(jì)算復(fù)雜性。因此,本研究中僅提取通過(guò)SPA算法得到的特征波段灰度圖像中的紋理信息。

1.8 NIR光譜和圖像紋理融合 數(shù)據(jù)融合可以有效提高多分類(lèi)模型的性能,不同種類(lèi)的數(shù)據(jù)可以實(shí)現(xiàn)信息的互補(bǔ),從而提高模型的準(zhǔn)確率和魯棒性。近紅外高光譜包含豐富的近紅外光譜信息和圖像紋理信息,通過(guò)對(duì)NIR光譜與圖像紋理特征進(jìn)行融合,可以提升鑒別模型的性能[13]。

1.9 紅參產(chǎn)地分類(lèi)模型的構(gòu)建和模型評(píng)價(jià) 本研究分別采用偏最小二乘判別分析(Partial Least Squares Discriminate Analysis,PLS-DA)和支持向量機(jī)分類(lèi)(Support Vector Classification,SVC)進(jìn)行產(chǎn)地鑒別。準(zhǔn)確率常常用來(lái)評(píng)估模型的性能,但評(píng)估基于類(lèi)不平衡數(shù)據(jù)集建立的分類(lèi)模型時(shí)存在明顯缺陷[14]。因此,本研究進(jìn)一步采用混淆矩陣和受試者工作特征曲線(xiàn)(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC)對(duì)模型性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。混淆矩陣是數(shù)據(jù)分析中對(duì)分類(lèi)模型預(yù)測(cè)結(jié)果的一種評(píng)價(jià)方式,ROC是反映模型敏感性和特異性連續(xù)變量的綜合指標(biāo),一般采用ROC曲線(xiàn)下的面積(Area Under ROC Curve,AUC)作為模型評(píng)價(jià)指標(biāo),其值最大為1,值越大代表其模型的探測(cè)效果越好[7-8]。

1.10 數(shù)據(jù)分析 本研究使用的圖像校正工具為五鈴光學(xué)公司高光譜成像系統(tǒng)HSI Analyzer分析軟件,后續(xù)感興趣區(qū)域提取、預(yù)處理、特征波長(zhǎng)提取、等數(shù)據(jù)處理分析操作用到的軟件為Spyder(Python 3.6)。

2 結(jié)果

2.1 樣品的原始光譜曲線(xiàn) 高光譜成像代表性圖像見(jiàn)圖1(A),不同產(chǎn)地紅參的平均近紅外光譜見(jiàn)圖1(B)。

2.2 預(yù)處理方法的選擇 為實(shí)現(xiàn)對(duì)不同產(chǎn)地紅參的鑒別分析,使用主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)對(duì)原始光譜進(jìn)行處理,由于第一主成分(PC1)和第二主成分(PC2)的累計(jì)方差貢獻(xiàn)度在99%以上,因此使用前2個(gè)主成分繪制PCA圖。圖2為原始光譜的PCA圖。由圖可見(jiàn),不同產(chǎn)地紅參的樣本重疊交織在一起,不易區(qū)分。因此通過(guò)原始光譜無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)不同產(chǎn)地紅參的準(zhǔn)確鑒別分析。為進(jìn)一步提高鑒別準(zhǔn)確率,采用SG平滑、一階導(dǎo)數(shù)、二階導(dǎo)數(shù)、SNV、MSC對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理,并使用Kennard-Stone算法進(jìn)行樣本劃分,計(jì)算出PLS-DA、SVC 2種分類(lèi)方法的準(zhǔn)確率見(jiàn)表1。根據(jù)結(jié)果,在本研究中使用基于SG平滑的二階導(dǎo)數(shù)作為光譜預(yù)處理的方式。見(jiàn)圖3。

2.3 特征波段的提取 采用SPA法挑選出10個(gè)近紅外特征波長(zhǎng)(961 nm、1 069 nm、1 157 nm、1 323 nm、1 332 nm、1 377 nm、1 401 nm、1 457 nm、1 500 nm、1 526 nm)。見(jiàn)圖4。

2.4 NIR光譜與圖像紋理融合 通過(guò)PLS-DA和SVC模型對(duì)NIR光譜和圖像紋理信息融合前后的分類(lèi)性能進(jìn)行比較,基于全光譜、圖像紋理和光譜紋理融合后模型分類(lèi)準(zhǔn)確率見(jiàn)表2。

2.5 分類(lèi)模型的性能評(píng)估 采用混淆矩陣評(píng)估紅參產(chǎn)地分類(lèi)模型的性能。圖5展示了基于全光譜和GLRLM融合數(shù)據(jù)的PLS-DA和SVC模型預(yù)測(cè)結(jié)果的混淆矩陣:吉林產(chǎn)地的紅參表現(xiàn)最好,在PLS-DA和SVC模型中都達(dá)到了100%準(zhǔn)確率;黑龍江產(chǎn)地的紅參次之,其準(zhǔn)確率分別為86%和91%;遼寧產(chǎn)地的紅參結(jié)果最差,準(zhǔn)確率都為83%。

ROC描述的是各種不同閾值下真正率(Ture Positive Rate,TPR)相對(duì)于假正率(False Positive Rate,F(xiàn)PR)取值變化情況,本研究使用ROC曲線(xiàn)來(lái)評(píng)估融合方法的性能。圖6展示了光譜和圖像紋理信息融合前后模型的ROC,其中融合方法的ROC曲線(xiàn)均優(yōu)于未融合的方法,全光譜信息融合GLRLM特征提取圖譜紋理信息及全光譜信息融合GLCM特征提取圖譜紋理信息均達(dá)到了最優(yōu)曲線(xiàn)下面積(Area Under Curve,AUC)值0.97。

3 討論

紅參作為一種常用中藥材,在中藥制劑中應(yīng)用廣泛,由于不同產(chǎn)地紅參存在較大的質(zhì)量差異,因此其產(chǎn)地鑒別對(duì)于保障制劑穩(wěn)定性至關(guān)重要。目前紅參的產(chǎn)地鑒別主要依靠外觀性狀和一些化學(xué)分析方法,外觀形狀受限于技術(shù)人員個(gè)人經(jīng)驗(yàn)且工作量大,化學(xué)分析方法無(wú)法做到對(duì)每個(gè)藥材的無(wú)損鑒別,難于在實(shí)際中藥制劑生產(chǎn)中運(yùn)用。近紅外高光譜技術(shù)可采集紅參近紅外光譜信息和圖像紋理信息,經(jīng)信息預(yù)處理并建立合適的模型,能做到無(wú)損準(zhǔn)確鑒別。

近紅外光譜所主要反映的信息主要是分子內(nèi)含氫基團(tuán)(如C-H、O-H、N-H等)振動(dòng)時(shí)倍頻和合頻的吸收,其分析領(lǐng)域基本包括了全部的有機(jī)化合物和混合物。從不同產(chǎn)地紅參的平均近紅外光譜看,光譜有一定的差異,其中黑龍江紅參的反射強(qiáng)度最低,與其他2個(gè)產(chǎn)地的紅參區(qū)別較大,吉林和遼寧紅參的光譜曲線(xiàn)較為接近。這一現(xiàn)象可能由于吉林和遼寧產(chǎn)地的土壤環(huán)境、緯度、光照條件更接近所致。但僅僅依靠原始光譜,鑒別準(zhǔn)確率不高,需去除光譜的干擾信息。從不同預(yù)處理方法看,簡(jiǎn)單的SG平滑無(wú)法提高鑒別效果,MSC算法反而降低了鑒別準(zhǔn)確率,可能采用MSC算法丟失了部分有用信息,基于SG平滑的一階導(dǎo)數(shù)和二階導(dǎo)數(shù)以及SNV算法處理后光譜數(shù)據(jù)的模型準(zhǔn)確率有不同程度地提高,其中使用二階導(dǎo)數(shù)預(yù)處理后的光譜數(shù)據(jù)構(gòu)建的模型效果最佳,在測(cè)試集中準(zhǔn)確率接近90%。從二階導(dǎo)數(shù)預(yù)處理后的光譜曲線(xiàn)可以看出預(yù)處理后能夠減輕光譜基線(xiàn)移位、漂移等干擾。

高光譜采集得到的近紅外平均光譜只是對(duì)高光譜信息的簡(jiǎn)單信息運(yùn)用,高光譜是對(duì)樣品整個(gè)面的光譜掃描,進(jìn)一步提取樣品圖像信息是增加鑒別準(zhǔn)確率的關(guān)鍵。通過(guò)采用SPA法挑選出10個(gè)近紅外特征波長(zhǎng),其中,961 nm的波長(zhǎng)對(duì)應(yīng)多糖和樹(shù)脂類(lèi)的O-H的伸縮振動(dòng)(第二泛頻),1 069 nm和1 157 nm處的波長(zhǎng)對(duì)應(yīng)C-H伸縮振動(dòng)(第三泛頻),1 323 nm、1 332 nm、1 377 nm處的波長(zhǎng)對(duì)應(yīng)C-H的伸縮振動(dòng)(第一泛頻),1 401 nm處的波長(zhǎng)對(duì)應(yīng)O-H的伸縮振動(dòng)(第一泛頻),1 457 nm、1 500 nm、1 526 nm處的波長(zhǎng)對(duì)應(yīng)N-H的伸縮振動(dòng),反映出不同產(chǎn)地紅參在糖類(lèi)、蛋白質(zhì)和其他有機(jī)化合物有一定差異。以這10個(gè)特征波長(zhǎng)采集樣品高光譜數(shù)據(jù)的紋理特征,分別比較全光譜、GLCM和GLRLM提取的紋理特征、光譜與紋理融合這幾種提取信息建立的模型,結(jié)果可見(jiàn),僅僅基于全光譜或者圖像紋理特征提取建立的模型性能均不理想,全光譜信息和圖像紋理信息融合能夠有效提高模型的預(yù)測(cè)性能。全光譜和GLRLM提取的紋理特征融合后模型的性能最佳,在測(cè)試集中達(dá)到了91.2%的正確率。

采用混淆矩陣評(píng)估分類(lèi)模型的性能,結(jié)果表明,遼寧和黑龍江產(chǎn)地分類(lèi)準(zhǔn)確率高于遼寧產(chǎn)地,可能的原因是遼寧產(chǎn)地的紅參與其他2個(gè)產(chǎn)地差異較小。采用ROC進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果表明全光譜融合圖像紋理信息融合的結(jié)果與正確率的結(jié)果保持一致,說(shuō)明光譜與圖像紋理信息融合方法能有效提高模型分類(lèi)的準(zhǔn)確率。

本研究基于近紅外高光譜成像系統(tǒng)采集3個(gè)產(chǎn)地紅參的NIR光譜和圖像信息,對(duì)原始光譜進(jìn)行二階導(dǎo)數(shù)預(yù)處理后,融合GLRLM提取圖像紋理特征后,可有效提取不同產(chǎn)地紅參特征信息,采用PLS-DA模型,對(duì)吉林、黑龍江和遼寧產(chǎn)地樣本進(jìn)行準(zhǔn)確分類(lèi)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明基于近紅外高光譜成像技術(shù)的紅參產(chǎn)地鑒別技術(shù)有望為建立穩(wěn)健、切實(shí)可行的紅參產(chǎn)地溯源模型提供思路和方法參考。

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(2021-10-25收稿 責(zé)任編輯:王明)

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