靈芝發酵產物對感染PCV-2病毒斷奶仔豬生長性能和免疫功能的影響

張洪文

（西峽縣動物衛生監督所，河南西峽 474500）

長期以來，靈芝一直被用于預防和治療各種人類疾病。靈芝被列為“高等級”藥物，是神農本草經中無毒的中藥材。靈芝的生物活性成分是多糖，有研究報道，靈芝多糖可以通過促進抗原提呈細胞、單核吞噬細胞系統、體液免疫和細胞免疫的功能來調節體內和體外免疫功能（張華斌等，2016）。β-葡聚糖是一個異構群葡萄糖聚合物，目前作為酵母細胞壁結構元素及其他真菌（如靈芝）發酵產物的成分，在抑制腫瘤形成、增強防御細菌挑戰感染，提高豬生長性能方面具有重要作用（Schoenherr等，1994）。來自各種酵母細胞壁的β-葡聚糖已被證明可以刺激特異性和非特異性免疫反應，同時體外研究表明，β-葡聚糖影響巨噬細胞形態，增加細胞一氧化氮產量，并刺激腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細胞因子的釋放，它還可以抑制炎癥細胞因子的反應，將營養物質用于生長（Chen等，2003）。豬圓環病毒2型（PCV-2）是一種常見的豬病毒性傳染病，可誘導淋巴細胞凋亡、淋巴細胞耗損、白細胞介素-10（IL-10）過度表達，從而引起T細胞免疫抑制和繼發性感染（Darwich等，2003）。Liu和Li（1999）發現，香菇多糖增強了感染馬立克氏病毒肉雞的IL-2水平，提示香菇多糖可能對馬立克病和其他病毒性疾病有用，因為它具有免疫刺激活性。因此，本文研究不同水平靈芝發酵產物對斷奶仔豬生長性能、肺泡巨噬細胞功能、偽狂犬抗體滴度和血清生化指標的影響，同時也評估了其對感染PCV-2仔豬脾臟細胞因子的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗原料與動物分組 試驗選用的靈芝發酵產物由某醫藥公司提供，其工藝為深層發酵，多糖和β-葡聚糖含量分別是19.1%和7.25%。本研究共開展兩個試驗，試驗1：選擇160頭21 d斷奶的仔豬，隨機分為4組，每組4個重復，每個重復10頭豬。各組分別在基礎日糧（表1）中添加0、50、100和150 mg/kg靈芝發酵產物。試驗2：將120頭21 d斷奶的仔豬隨機分為2組（4個重復，每個重復15頭），分別飼喂基礎日糧和基礎日糧+50 mg/kg的靈芝發酵產物。兩組仔豬在試驗當天通過肌肉注射105/mL感染劑量的PCV-2病毒。

表1 基礎日糧組成及營養水平（風干基礎）

1.2 生長性能、抗體滴度和生化指標 每周統計一次飼料用量，稱量各重復豬只重量，以此計算平均日增重、平均日采食量和料重比。仔豬在斷奶時接種一劑偽狂犬病疫苗，兩周后接種加強劑。分別在第14和28天每個重復隨機選擇2頭豬進行采血。采用ELISA法測定假狂犬病抗體滴度，以log2滴度為基礎。血液離心分離血清后用試劑盒測定血清葡萄糖、甘油三酯、肌酸酐、膽固醇含量及谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶活性。參考Makimura和Suzuki（1982）的方法分析血清結合珠蛋白水平。用磷酸鹽緩沖鹽水灌洗支氣管肺泡收集巨噬細胞，參考Guy等（2017）的方法測定肺泡巨噬細胞的趨化功能。

1.3 脾臟細胞因子 參考 Darwich等（2002）的方法，用熒光定量PCR法分析IL-β、IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ和INF-α的表達水平。

1.4 統計分析 所有數據均采用SAS一般線性模型程序進行分析，采用Duncan’s法進行多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 對生長性能的影響 由表2可知，日糧添加50 mg/kg靈芝發酵產物2周和4周后顯著改善了平均日增重（P＜0.05），但隨添加水平的升高，仔豬平均日增重并無顯著改善效果（P＞0.05），同時在第4周150 mg/kg較50 mg/kg靈芝發酵產物組顯著降低了平均日增重（P＜0.05）。日糧添加50或100 mg/kg靈芝發酵產物較對照組對整個試驗期仔豬平均日采食量無顯著影響（P＞0.05），但150 mg/kg靈芝發酵產物組平均日采食量較其他組顯著降低了8.11%、6.85%和8.11%（P＜0.05）。此外，日糧添加50 mg/kg靈芝發酵產物顯著改善了斷奶仔豬料重比（P＜0.05），但隨著靈芝發酵產物添加水平的升高，料重比無進一步改善（P＜0.05）。

2.2 對肺泡巨噬細胞功能、偽狂犬抗體滴度及血清生化指標的影響 由表3可知，日糧添加50～150 mg/kg靈芝發酵產物可顯著提高肺泡巨噬細胞的趨化性指數（P＜0.05），但趨化性指數不存在劑量依賴性。各處理對對巨噬細胞的吞噬作用和吞噬能力（以每200個巨噬細胞吞噬的白色念珠菌表示）均無顯著影響（P＞0.05）。日糧添加50～150 mg/kg靈芝發酵產物較對照組顯著提高了28 d偽狂犬病抗體滴度（P＜0.05），但對14 d偽狂犬病抗體滴度無顯著影響（P＞0.05）。日糧添加靈芝發酵產物顯著降低了血糖水平（P＜0.05），但對血清肌酸酐、膽固醇、甘油三酯含量及谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶活性無顯著影響（P＞0.05）。日糧靈芝發酵產物添加水平與血清結合珠蛋白含量表現為劑量依賴效應，其中對照組最低（P＜0.05），150 mg/kg靈芝發酵產物組最高（P＜0.05）。

表2 靈芝發酵產物對斷奶仔豬生長性能的影響

表3 靈芝發酵產物對斷奶仔豬肺泡巨噬細胞功能、偽狂犬病抗體滴度和血清生化指標的影響

2.3 對脾臟細胞因子的影響 由于50 mg/kg靈芝發酵產物組飼料轉化率最佳，因此我們研究照組和該組對比靈芝發酵產物對脾臟細胞因子水平的影響。由表4可知，與對照組相比，日糧添加50 mg/kg靈芝發酵產物脾臟IL-β、IL-4和IL-10相對強度無顯著影響（P＞0.05），但靈芝發酵產物日糧組顯著提高了IL-2、INF-γ和TNF-α相對強度（P＜0.05）。

表4 靈芝發酵產物對斷奶仔豬脾臟細胞因子水平的影響

3 討論

靈芝多糖的有益作用已經在許多動物（如小鼠、大鼠、兔子）中被證明，但幾乎沒有任何數據顯示靈芝發酵產物在豬或除馬以外的其他家畜中具有促生長作用（Lai等，2004）。本研究結果顯示，靈芝發酵產物添加劑量達到150 mg/kg時，與對照組相比，采食量明顯降低，同時生長性能與其添加水平不呈正相關，這可能與其添加水平過高，導致其苦味成分水平升高，如靈芝酸和萜類化合物可能會影響豬對飼料的適口性。本研究抗體滴度結果顯示，靈芝發酵產物對偽狂犬病抗原的一度抗體滴度無顯著影響（14 d），但與對照組相比，飼喂靈芝發酵產物日糧的斷奶仔豬偽狂犬病二度抗體滴度顯著升高（28 d），這可能與靈芝發酵產物中的多糖成分可激活體液免疫和細胞免疫應答的作用有關（Lai等，2004）。

與對照組相比，補充靈芝發酵產物的斷奶仔豬血清結合珠蛋白濃度提高2倍。Hiss和Sauerwein（2003）報道，日糧添加β-葡聚糖使斷奶仔豬血清結合珠蛋白濃度和日增重成反比關系，這與本研究結果一致，即日糧添加150 mg/kg靈芝發酵產物后，結合珠蛋白的濃度明顯高于50 mg/kg組，同時該組也表現出較低的日增重和飼料轉化率。

以往研究表明，靈芝通過水提取的多糖可以加強細胞因子的分泌，包括IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α（Mao等，1999）。但本結果發現，靈芝發酵產物可以刺激感染感染PCV-2病毒斷奶仔豬脾臟IL- 2、IFN-γ和TNF-α的表達強度。靈芝發酵產物對細胞因子表達的免疫調節作用可以表現為兩種方式的調節，然而，促炎細胞因子的過度表達可能對生長性能和健康狀況產生不利影響（Darwich等，2003）。此外，細胞因子分泌的增加可導致營養物質從生長向免疫反應的再分配，從經濟學角度來看是一個缺點（Chen等，2003）。

4 結論

日糧添加50 mg/kg靈芝發酵產物可以顯著改善斷奶仔豬的生長性能，在接種偽狂犬病疫苗時可提高肺泡巨噬細胞的趨化能力和抗體滴度。此外，除了降低血糖濃度外，靈芝發酵產物對大多數生化指標均無副作用。