雞SPOP和MyD88基因分子特征及其組織表達特性分析

王燕碧 趙采芹 唐宏 周磊 韓一帆 張福平 段志強

摘要：【目的】掌握SPOP和MyD88基因分子特征及其在雞不同組織發育過程中的表達特征，為后續研究其調控雞組織生長發育機理及開展抗病育種提供參考依據。【方法】通過RT-PCR克隆雞SPOP和MyD88基因編碼區（CDS）序列，運用ExPASy、SOPMA、SWISS-MODEL及PSORT II Prediction等在線軟件進行生物信息學分析，并以實時熒光定量PCR檢測這2個基因在雞胚14胚齡（E14 d）及出殼后1 d（H1 d）、7 d（H7 d）和14 d（H14 d）各組織中的表達情況。【結果】雞SPOP、MyD88基因CDS序列長為1125和900 bp，分別編碼374和299個氨基酸殘基。SPOP蛋白分子式為C1866H2926N496O559S28，相對分子量為42 kD，理論等電點（pI）為5.58，為相對不穩定蛋白;MyD88蛋白分子式為C1502H2394N410O438S18，相對分子量為33 kD，pI為5.93，為相對不穩定蛋白。雞SPOP和MyD88蛋白二級結構以α-螺旋和無規則卷曲為主，主要定位于細胞質（占60.9%）。與人類和哺乳動物相比，雞SPOP蛋白的3個功能結構域（MATH、BTB-POZ和BACK）較保守，而MyD88蛋白的2個功能結構域（Death和TIR）存在多處氨基酸位點變異。SPOP和MyD88基因在雞不同發育階段各組織中均有表達，但以肺臟中的相對表達量最高，且二者間的表達差異極顯著（P<0.01，下同）。從E14 d發育至H14 d，SPOP基因在眼球和肺臟中的表達整體上呈上升趨勢，且至H14 d時肺臟中的表達趨于穩定，在腦組織、心臟和肌胃中的表達呈先上升后下降的變化趨勢，在肝臟中的表達呈先下降后上升再下降的變化趨勢;MyD88基因在眼球、肝臟和肺臟中的表達均呈先上升后下降再上升的變化趨勢，在肌胃和胸肌中的表達呈下降趨勢，至H14 d時降至最低值。【結論】SPOP和MyD88基因在雞胚不同發育階段肺臟、眼球和肌胃中的表達相對較高，SPOP基因的表達水平均極顯著高于MyD88基因，且二者的相對表達量呈負相關，即SPOP基因負調控MyD88基因的表達。

關鍵詞： 雞;SPOP基因;MyD88基因;分子特征;組織表達

中圖分類號：S831.2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）11-3111-10

Molecular characteristics and tissue expression analysis of the chicken genes SPOP and MyD88

WANG Yan-bi， ZHAO Cai-qin， TANG Hong， ZHOU Lei， HAN Yi-fan，

ZHANG Fu-ping， DUAN Zhi-qiang*

（College of Animal Sciences，Guizhou University/Key Laboratory of Animal Genetics， Breeding and Reproduction in the Plateau Mountains Region， Ministry of Education/Key Laboratory of Animal Genetics， Breeding and

Reproduction in Guizhou， Guiyang? 550025， China）

Abstract：【Objective】To describe the molecular characteristics of SPOP and MyD88 genes and their expression in different tissue during chicken development， and lay the basis for the subsequent study of their regulation of tissue growth and development in chickens and the development of disease-resistance breeding. 【Method】The coding regions （CDS） of chicken SPOP and MyD88 genes were cloned by RT-PCR. ExPASy， SOPMA， SWISS-MODEL and PSORT II Prediction were used for bioinformatics analysis. Real-time quantitative PCR（qRT-PCR） technology was used to detect the expression of SPOP and MyD88 genes in various tissues at 14 embryonic days （E14 d） in chick embryos and at 1-day-old （H1 d）， 7-day-old （H7 d）， and 14-day-old （H14 d） after shelling. 【Result】The CDS sequences of chicken SPOP and MyD88 genes were 1125 and 900 bp， encoding 374 and 299 amino acid residues， respectively. The molecular formula of the SPOP protein was C1866H2926N496O559S28， and was predicted to have a molecular weight of 42 kD and a isoelectric point （pI） of 5.58. The molecular formula of the MyD88 protein was C1502H2394N410O438S18 and was predicted to have a molecular weight of 33 kD and a pI of 5.93. Both SPOP and MyD88 were relatively unstable proteins. The chicken SPOP and MyD88 proteins， were mainly located in the cytoplasm （60.9%） and their secondary structures mainly consisted of α -helixes and random loops. Compared with humans and mammals， the three functional domains of chicken SPOP （MATH， BTB-POz and BACK） were conserved， while the two functional domains of MyD88 （Death and TIR） had multiple amino acid site variations. SPOP and MyD88 genes were expressed in all tissues of chicken at different developmental stages， but their expression in the lung was relatively the highest. The differences in expression of SPOP and MyD88 was extremely significant（P<0.01， the same below）. From E14 d to H14 d， the expression of SPOP gene in the eyeball and lung showed an overall upward trend， but the lung expression of SPOP stabilized before H14 d. The expression of SPOP gene in the brain， heart， stomach muscle and liver showed an upward trend followed by a downward trend. The expression of MyD88 gene in the eyeball， liver and lung was first increased， followed by a decrease and a further increase. The expression of MyD88 gene in stomach and chest muscles decreased and reached the lowest value at H14 d. 【Conclusion】The expression levels of SPOP and MyD88 genes are relatively high in lung， eyeball and stomach muscle of chicken embryo at different developmental stages. The expression levels of SPOP are extremely significantly higher than MyD88 and the relative expression levels of SPOP gene and MyD88 gene are negatively correlated， indicating that SPOP gene regulates the expression of MyD88 gene.

Key words： chicken; SPOP gene; MyD88 gene; molecular characteristics; tissue expression

Foundation item： National Natural Science Foundation of China（31960698，31760732）;Science and Technology Foundation of Guizhou （Qiankehejichu〔2020〕1Y134）;Joint Project of Local Poultry Industry in Guizhou （Qiancainong〔2020〕175）

0 引言

【研究意義】斑點型鋅指結構蛋白（Speckle-type POZ protein，SPOP）最早發現于硬皮病患者血清中，因其在細胞核內呈斑點狀分布且含有1個POZ結構域，因此也被稱為斑點型POZ蛋白（Boysen et al.，2015）。髓系分化因子88（Myeloid differentiation factor 88，MyD88）是髓樣分化蛋白家族中的重要成員之一，其主要生物學功能需通過其介導的信號傳導途徑來實現（Wheaton et al.，2007;趙飛等，2019;王菲，2020）。目前，關于SPOP和MyD88的非降解途徑修飾調節分子機制已有研究報道（王菲，2020），并證實SPOP通過泛素化非降解途徑修飾MyD88表達以抑制NF-κB信號通路，進而導致促炎性細胞因子產生。因此，開展SPOP和MyD88基因的分子特征及組織表達特性分析，可為后續研究SPOP和MyD88基因調控機體組織發育的作用機制打下基礎。【前人研究進展】SPOP是一種表達于多種組織的E3泛素連接酶銜接蛋白，可影響底物蛋白生物學功能的發揮，直接或間接參與多種生物學過程（Hernández-Mu?oz et al.，2005），包括X染色體失活（Takahashi et al.，2002）、細胞信號轉導（Geng et al.，2014）、骨骼和神經系統發育（Cai and Liu，2016;Nabais Sá et al.，2020）、基因轉錄和表達調控（Zhu et al.，2017）及DNA修復（Hjorth-Jensen et al.，2018）等。可見，SPOP在機體發育、信號轉導及維持細胞穩態等過程中發揮重要作用。MyD88不僅在信號通路上起核心作用，還參與多種疾病的發生和發展過程，包括炎癥和自身免疫性疾病（Casanova et al.，2011）、神經性疾病（Rocca et al.，2017）及代謝類疾病（Mahmassani et al.，2020）等。MyD88作為通用的信號銜接蛋白，調節大多數Toll樣受體（TLR）和白細胞介素1受體（IL-1R）級聯的信號轉導，在機體先天免疫及獲得性免疫的調節中發揮關鍵作用（Li et al.，2017）。因此，MyD88在先天免疫中介導許多生物學上重要的信號轉導途徑。已有研究發現，SPOP能泛素化修飾MyD88，促進MyD88進入蛋白酶體途徑降解，從而調控緊急造血程序向穩態造血程序的轉換，限制全身炎癥反應;而SPOP突變后，MyD88無法正常降解，導致IRAK4激酶過多，異常激活MyD88-IRAK4下游的炎癥反應因子NF-κB和AP-1，促進腫瘤細胞的侵襲與轉移（Guillamot et al.，2019）。SPOP還充當TLR觸發炎癥的負調節因子，通過泛素化非降解途徑修飾MyD88以調節其下游信號通路，觸發天然免疫反應并啟動下游信號通路，促進促炎細胞因子和I型干擾素的產生（Hu et al.，2020）。此外，SPOP過表達能破壞MyD88自我聚合，減少MyD88聚集及其下游IRAK激酶的募集，抑制NF-κB通路，降低TLR激活時炎癥細胞因子的表達;SPOP缺失則促進MyD88聚集及其下游IRAK激酶的募集，增強TLR激活時炎癥細胞因子的表達（林婷等，2021）。【本研究切入點】SPOP可負調控MyD88表達，且二者間的相互作用在機體先天性免疫方面發揮重要作用，但至今有關SPOP和MyD88基因在不同組織中的表達特性尚未清楚。【擬解決的關鍵問題】通過RT-PCR克隆雞SPOP和MyD88基因，運用在線軟件進行生物信息學分析，并以實時熒光定量PCR檢測這2個基因在雞生長發育過程不同組織中的表達情況，掌握其在雞不同組織發育過程中的表達特征，為后續研究SPOP和MyD88基因調控雞組織生長發育機理及開展抗病育種提供參考依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

大腸桿菌（Escherichia coli）DH5α感受態細胞和雞胚成纖維細胞系（DF-1）由高原山地動物遺傳育種與繁殖教育部重點實驗室保存提供。在相同孵化和飼養條件下，分別采集貴州黃雞雞胚（14胚齡）及出殼后1、7和14 d的眼球、腦組織、心臟、肝臟、肺臟、肌胃、胸肌及腿肌等組織樣品，置于裝有RNA保存液的EP管中，-80 ℃保存備用。Total RNA Kit II 200試劑盒及膠回收試劑盒購自OMEGA公司，Star-Script Ⅱ逆轉錄試劑盒購自GenStar公司，QuantiFast SYBR Green PCR Kit購自APE×BIO公司，DL5000 DNA Marker購自Thermo Fisher公司，2×Es Taq MasterMix購自北京康為世紀生物科技有限公司，pMD19-T載體及氨芐青霉素購自TaKaRa公司;其他試劑均為國產分析純。

1. 2 引物設計與合成

根據GenBank已發布的雞SPOP基因序列（XM_015299467.2）和MyD88基因序列（NM_001030962.4），利用Primer Premier 5.0分別設計擴增雞SPOP和MyD88基因編碼區（CDS）的引物（表1），并委托擎科生物技術有限公司合成。

1. 3 雞SPOP和MyD88基因克隆與測序

利用Total RNA Kit II 200試劑盒提取DF-1細胞總RNA，以超微量紫外分光光度計測定其濃度及OD，然后取5 μg總RNA反轉錄合成cDNA第一鏈。以cDNA第一鏈為模板，PCR擴增目的基因（SPOP和MyD88）的CDS序列。擴增程序：94 ℃預變性5 min;94 ℃ 40 s，退火50 s，72 ℃ 1 min，進行25個循環;72 ℃延伸10 min。PCR擴增產物經1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測后采用膠回收試劑盒回收瓊脂糖凝膠上的目的條帶，與pMD19-T載體連接（金屬浴16 ℃，12 h）并轉化DH5α感受態細胞，挑取白斑接種至含氨芐青霉素的LB液體培養基中，37 ℃下搖床（200 r/min）培養12～16 h，渾濁后進行菌液PCR鑒定，1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測正確的陽性菌液送至擎科生物技術有限公司測序。

1. 4 雞SPOP和MyD88基因分子特征分析

利用NCBI分析雞SPOP和MyD88基因開放閱讀框（ORF），應用ExPASy（https：//web.expasy.org/protparam/）預測雞SPOP和MyD88基因編碼蛋白理化性質，運用SOPMA（https：//npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/ npsa_automat.pl？page=npsa_sopma.html）和SWISS-MODEL（https：//swissmodel.expasy.org/interactive）分別預測蛋白的二、三級結構，利用PSORT II Prediction（https：//psort.hgc.jp/form2.html）對SPOP和MyD88蛋白進行亞細胞定位，以CDART預測雞SPOP和MyD88蛋白功能結構域，同時比對分析不同物種間功能結構域的保守性。

1. 5 實時熒光定量PCR檢測

在熒光定量PCR儀上采用SYBR Green熒光染料法進行實時熒光定量PCR檢測。反應體系20.0 μL：2×SYBR Green qPCR MasterMix 10.0 μL，上、下游引物各0.5 μL，DNA模板0.5 μL，ddH2O 8.1 μL。擴增程序：95 ℃預變性2 min;95 ℃ 15 s，退火30 s，經39個循環后進行融解曲線分析，以5 s增加0.5 ℃擴增至95 ℃，每個樣品檢測設3個重復。

1. 6 統計分析

采用Excel 2016對試驗數據進行整理，通過2-ΔΔCt法換算目的基因相對表達量，并以SPSS 19.0進行配對樣本 t 檢驗。

2 結果與分析

2. 1 雞SPOP和MyD88基因擴增結果

以反轉錄合成的cDNA第一鏈為模板，對雞SPOP和MyD88基因CDS序列進行PCR擴增，經1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，擴增獲得的目的基因條帶清晰單一，其中，SPOP基因條帶（圖1-A）為1145 bp，MyD88基因條帶（圖1-B）為919 bp，與預期結果相符。

2. 2 雞SPOP和MyD88基因測序分析結果

經DNAStar序列拼接分析，結果顯示擴增獲得的SPOP基因（圖2-A）和MyD88基因（圖2-B）CDS序列與GenBank已公布的相應基因序列一致，尚未發生核苷酸序列突變，表明雞SPOP和MyD88基因的重組質粒pMD19-T-SPOP和pMD19-T-MyD88構建成功。

2. 3 雞SPOP和MyD88基因生物信息學分析結果

2. 3. 1 編碼蛋白理化性質 雞SPOP基因CDS序列長1125 bp，共編碼374個氨基酸殘基;EsPASy預測結果顯示，SPOP蛋白分子式為C1866H2926N496O559S28，相對分子量為42 kD，理論等電點（pI）為5.58;該蛋白中亮氨酸（Leu）含量最高，占9.4%，色氨酸（Trp）和組氨酸（His）含量最低，均占1.6%;SPOP蛋白不穩定性指數為41.66，提示其可能為相對不穩定蛋白。MyD88基因CDS序列長900 bp，共編碼299個氨基酸殘基，其分子式為C1502H2394N410O438S18，相對分子量為33 kD，pI為5.93;該蛋白中也是以Leu含量最高，占13.0%，而天冬氨酸（Asn）和His含量最低，各占1.3%;MyD88蛋白不穩定性指數為50.55，推測其為相對不穩定蛋白。

2. 3. 2 蛋白二、三級結構預測結果 運用SOMPA和SWISS-MODEL分別對雞SPOP和MyD88蛋白進行二、三級結構預測，結果顯示：SPOP蛋白二級結構中α-螺旋占45.99%、無規卷曲占36.90%、延伸鏈占13.10%、β-轉角占4.01%;MyD88蛋白二級結構中無規卷曲占43.81%、α-螺旋占41.14%、延伸鏈占12.04%、β-轉角占3.01%。可見，雞SPOP和MyD88蛋白二級結構主要是α-螺旋和無規卷曲，β-轉角所占比例最低。雞SPOP蛋白三級結構（圖3-A）和MyD88蛋白三級結構（圖3-B）與其二級結構預測結果相符，均以無規卷曲和α-螺旋為主。

2. 3. 3 亞細胞定位分析結果 采用PSORT II Prediction對雞SPOP和MyD88蛋白進行亞細胞定位分析，結果表明，SPOP蛋白主要定位于細胞質，占60.9%，定位于細胞核、線粒體的分別占13.0%和8.7%;MyD88蛋白也主要定位于細胞質（占60.9%），其次是細胞核（占13.0%），定位于液泡、線粒體和高爾基體的各占4.3%。

2. 3. 4 蛋白功能結構域預測結果 采用CDART對雞SPOP和MyD88蛋白功能結構域進行預測，結果發現，SPOP蛋白存在MATH、BTB-POZ和BACK結構域，分別位于第28～166位、第182～301位和第297～367位氨基酸處（圖4-A）;而MyD88蛋白主要存在Death和TIR結構域，分別位于第31～110位和第163～296位氨基酸處（圖4-B）。

通過MegAlign比對雞、人類、小鼠和豬4個物種的SPOP和MyD88氨基酸序列，結果（圖5）發現，雞SPOP蛋白3個功能結構域中僅BACK結構域出現1個氨基酸突變位點（333L→M），說明SPOP蛋白在不同物種中高度保守;而雞MyD88蛋白的2個功能結構域中存在多處氨基酸突變，其保守性遠低于SPOP蛋白。

2. 4 雞SPOP和MyD88基因的組織表達特征

以實時熒光定量PCR檢測SPOP和MyD88基因在雞不同發育階段各組織中的表達規律，結果（圖6）顯示，以腿肌為目標對照，在雞胚14胚齡（E14 d）及出殼后1 d（H1 d）、7 d（H7 d）和14 d（H14 d）各組織中均能檢測到SPOP和MyD88基因表達，且以在肺臟中的相對表達量最高，二者間的表達差異極顯著（P<0.01，下同）。在E14 d各組織中，SPOP和MyD88基因在腦組織中的相對表達量最低，二者差異顯著（P<0.05，下同）;SPOP基因組織相對表達量排序為：肺臟>肌胃>眼球>胸肌>肝臟>腿肌>心臟>腦組織，MyD88基因組織相對表達量排序為：肺臟>心臟>肌胃>腿肌>胸肌>肝臟>眼球>腦組織。在H1 d各組織中，也是以腦組織中的SPOP和MyD88基因相對表達量最低，其次是眼球和肌胃;SPOP基因組織相對表達量排序為：肺臟>肌胃>眼球>心臟>腿肌>胸肌>肝臟>腦組織，MyD88基因組織相對表達量排序為：肺臟>眼球>肌胃>肝臟>腿肌>心臟>胸肌>腦組織。在H7 d各組織中，SPOP和MyD88基因在胸肌中的相對表達量最低，二者差異不顯著（P>0.05，下同）;SPOP基因組織相對表達量排序為：肺臟>肌胃>眼球>腦組織>肝臟>心臟>腿肌>胸肌，MyD88基因組織相對表達量排序為：肺臟>腿肌>眼球>肌胃>心臟>肝臟>腦組織>胸肌。在H14 d各組織中，SPOP基因組織相對表達量排序為：肺臟>眼球>腦組織>肌胃>胸肌>腿肌>心臟>肝臟，MyD88基因組織相對表達量排序為：肺臟>心臟>眼球>肝臟>腿肌>肌胃>腦組織>胸肌。

對SPOP和MyD88基因在雞不同發育階段各組織中的表達規律進行分析，結果（圖7）表明，從E14 d發育到H14 d，SPOP基因在眼球和肺臟中的表達整體上呈上升趨勢，且至H14 d肺臟中的表達趨于穩定;在腦組織、心臟和肌胃中的表達呈先上升后下降的變化趨勢;在肝臟中的表達呈先下降后上升再下降的變化趨勢，至H14 d時降至最低值。MyD88基因在眼球、肝臟和肺臟中的表達均呈先上升后下降再上升的變化趨勢，整體上呈N形表達模式;在肌胃和胸肌中的表達呈下降趨勢，至H14 d時降至最低值。

3 討論

最先在以雞為模式動物中發現SPOP與先天免疫通路接頭蛋白MyD88存在蛋白互作關系，隨后進一步拓展至人類和小鼠等模式動物細胞，發現SPOP和MyD88互作在物種間高度保守，并證實SPOP基因在雞等多個物種中通過蛋白酶體途徑負調控TLRs先天免疫通路活性及白細胞介素-1β等炎性細胞因子產生（Li et al.，2020）。Jin等（2020）通過研究SPOP與MyD88的互作機制，發現在淋巴瘤中SPOP通過非降解型泛素化修飾MyD88。近年來，關于MyD88介導的MyD88/NF-κB信號通路研究報道越來越多，包括TLR4/MyD88/NF-κB、Nrf2/TLR4/MyD88、TLR4/MyD88/MEK/ERK/mTORC1等（Ma et al.，2020;Wu et al.，2020;Yang et al.，2020）。此外，SPOP通過抑制MyD88/NF-κB信號，進而抑制DLBCL細胞體外生長及體內腫瘤異種移植（Jin et al.，2020）。Hu等（2020）研究報道，SPOP參與TLR介導的信號轉導，通過泛素化非降解途徑修飾MyD88調節其下游信號通路，進而對TLR引發的炎癥起負調節作用。值得注意的是，SPOP在這些信號通路的上游發揮作用，通過k48介導的泛素化特異性靶向MyD88關閉炎癥反應。

目前，針對SPOP的研究主要集中在與癌癥發生間的關系方面，尤其是前列腺癌和腎癌。最近有研究報道，SPOP的MATH結構域介導其與MyD88互作，通過互作關系促進MyD88泛素化和降解，且這種調控機制在鳥類和哺乳動物中高度保守（王菲，2020）。本研究通過對SPOP和MyD88蛋白的功能結構域進行預測，結果發現SPOP蛋白存在MATH、BTB-POZ和BACK等3個功能結構域，MyD88蛋白存在Death和TIR結構域。其中，MATH結構域含有結合12個底物氨基酸的卡槽，可結合不同蛋白的SPOP結合保守結構域（SPOP-binding consensus motif，SBC motif），從而決定其與底物的親和力及特異性（Zhuang et al.，2009）;SPOP通過高度保守的BTB-POZ結構域與Cullin 3-RING連接酶復合物結合，還能促進SPOP二聚體的形成（El-Gebali et al.，2019）;TIR結構域則介導MyD88與含該結構域的其他蛋白互作。SPOP和MyD88蛋白氨基酸位點變異分析結果表明，SPOP蛋白在不同物種中高度保守;而MyD88蛋白存在一定程度的變異，其保守性遠低于SPOP蛋白，但在這些序列中存在符合SBC的特點序列，且位于MyD88蛋白的INT結構域。Li等（2020）研究發現，雞MyD88通過其INT結構域與SPOP互作，故推測是這些變異位點介導了二者的互作關系，與Reiling等（2008）的研究結論相吻合。

基因組織表達譜分析對開展基因表達、蛋白分泌、基因作用靶組織、受體表達及功能部位研究具有重要意義。已有研究表明，SPOP基因在人體腎癌、子宮及子宮內膜癌及睪丸癌組織中具有較高的陽性表達率（陳碩，2018）;MyD88基因的表達分布非常廣泛，在肝臟、肺臟和脾臟中的表達量較高，在腦、骨骼肌、腎臟、心臟、腸道、皮膚和睪丸等組織均有表達，但表達量相對較低（匡文華，2012;王榮華等，2016）。本研究結果表明，SPOP和MyD88基因在雞不同發育階段各組織中均有不同程度的表達，但其相對表達量存在明顯差異，與Hardiman等（1997）、李強等（2009）、匡文華（2012）的研究結果相同，在不同發育階段組織中均以肺臟中的相對表達量最高，且2個基因的表達差異極顯著，提示SPOP和MyD88基因可能主要由雞肺臟合成，與羅潔（2018）、趙陸璐等（2020）的研究結果一致。此外，有新的研究表明SPOP基因在不同肺癌細胞系中廣泛表達。在肺癌細胞中，由shRNA敲除SPOP基因能導致DNA損傷修復缺陷，增加細胞凋亡和在DNA損傷條件下對輻射的敏感性（Song et al.，2020）。在本研究中，從E14 d發育至H14 d，雞SPOP和MyD88基因在眼球、肺臟及肌胃中的相對表達量差異均達極顯著水平，SPOP基因在各組織中高表達，而MyD88基因呈低表達，二者的相對表達量呈負相關，即SPOP基因負調控MyD88基因的表達。王菲（2020）研究表明，SPOP通過與MyD88互作可促進后者的降解，從而負調控MyD88基因表達，當SPOP基因高表達時，免疫因子的表達和載菌量較低，說明SPOP對機體免疫保護起負調控作用。白細胞介素-1β和白細胞介素-8是MyD88下游的2種促炎細胞因子，與SPOP基因表達呈負相關（Lee et al.，2011），故推測SPOP參與免疫反應調節。SPOP基因在不同組織中廣泛表達，且在不同組織中的表達水平存在一定差異（Zhang et al.，2019）。在外源病原微生物的刺激下，MyD88基因表達上調，且在先天免疫中發揮重要作用（Yao et al.，2009）。說明SPOP通過阻斷MyD88組裝及抑制NF-κB信號通路而干擾免疫反應（Li et al.，2020）。因此，本研究結論為揭示SPOP和MyD88基因參與雞肺臟發育機制及其抵抗呼吸道微生物感染作用打下了理論基礎。

4 結論

SPOP和MyD88基因在雞胚不同發育階段肺臟、眼球和肌胃中的表達相對較高，SPOP基因的表達水平均極顯著高于MyD88基因，且二者的相對表達量呈負相關，即SPOP基因負調控MyD88基因的表達。

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收稿日期：2020-12-29

基金項目：國家自然科學基金項目（31960698，31760732）;貴州省科學技術基金項目（黔科合基礎〔2020〕1Y134號）;貴州省地方家禽產業聯合攻關項目（黔財農〔2020〕175號）

通訊作者：段志強（1985-），https：//orcid.org/0000-0002-0033-3919，博士，副教授，主要從事家禽抗病育種與疫病防控研究工作，E-mail：zqduan@gzu.edu.cn

第一作者：王燕碧（1994-），https：//orcid.org/0000-0002-1172-2311，研究方向為動物遺傳育種與繁殖，E-mail：1194591651@qq.com