不同品種羊血液和肺臟中TLRs基因轉錄水平差異分析

唐沙 陳靜 岳筠 李濤 李梅 文明 張雙翔 程振濤

摘要：【目的】分析不同品種羊Toll樣受體（TLRs）基因轉錄水平的差異性，為揭示TLRs基因轉錄水平與羊疫病間的關聯性提供參考依據。【方法】選取貴州省主要飼養的貴州黑山羊、貴州白山羊、黔北麻羊、波爾山羊和湖羊為研究對象，根據GenBank已公布的TLRs基因序列設計熒光定量PCR特異性擴增引物及TaqMan探針引物，利用TaqMan探針熒光定量PCR檢測不同品種羊血液和肺臟中TLR1～TLR10基因轉錄水平差異。【結果】TLR1～TLR10基因在不同品種羊血液和肺臟中均有轉錄表達。不同品種羊血液和肺臟中的TLRs基因轉錄水平均存在差異性，在波爾山羊血液中TLR2、TLR4和TLR5基因轉錄水平均極顯著低于其他4種羊（P<0.01，下同），TLR7和TLR8基因轉錄水平則極顯著低于除黑山羊外的其他3種羊;在白山羊血液中TLR4、TLR7、TLR8和TLR9基因轉錄水平極顯著高于其他4種羊;在湖羊肺臟中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因轉錄水平極顯著低于其他4種羊，而在黔北麻羊肺臟中TLR5和TLR8基因轉錄水平極顯著高于其他4種羊。此外，在5種羊血液中TLR2、TLR4、TLR7和TLR8基因轉錄水平均極顯著高于其他TLRs基因轉錄水平;羊肺臟中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因轉錄水平相對較高，在貴州白山羊、貴州黑山羊和波爾山羊均表現為極顯著高于其他TLRs基因轉錄水平。【結論】不同品種羊血液和肺臟中TLRs基因轉錄水平具有差異性，以TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因轉錄水平相對較高，提示TLRs在不同品種羊機體中發揮著清除病原體及維持機體穩態的作用，而TLRs基因轉錄水平差異可能是造成不同品種羊對疫病易感差異的原因之一。

關鍵詞： 羊;Toll樣受體（TLRs）;血液;肺臟;轉錄水平

中圖分類號： S858.26? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）11-3130-09

Differential analysis of transcript levels of TLRs genes in the blood and lungs of different breeds of sheep

TANG Sha1， CHEN Jing1， YUE Jun2， LI Tao2， LI Mei1， WEN Ming1，3，

ZHANG Shuang-xiang2*， CHENG Zhen-tao1 ，3 *

（1College of Animal Science， Guizhou University， Guiyang? 550025， China; 2Animal Disease Prevention and Control Center in Guizhou Province， Guiyang? 550008， China; 3Key Laboratory of Animal Diseases and Veterinary

Public Health in Guizhou Province， Guiyang? 550025， China）

Abstract：【Objective】To analyze the variability of transcript levels of Toll-like receptors （TLRs） genes in different breeds of sheep， and to provide a reference basis for revealing the association between the transcript levels of TLRs genes and epidemic diseases in sheep. 【Method】In this study， Guizhou black goat， Guizhou white goat，Qianbei Ma goat，Boer goat and Hu sheep， which are the main breeding species in Guizhou Province， were selected for the study， and fluorescent quantitative PCR specific amplification primers and TaqMan probe primers were designed according to the published TLRs gene sequences in GenBank， and the differences in transcript levels of TLR1-TLR10 genes in blood and lung of different breeds of sheep were detected by using TaqMan probe fluorescent quantitative PCR.【Result】TLR1-TLR10 genes were transcriptionally expressed in the blood and lungs of different breeds of sheep. Differential transcript levels of TLRs genes were in both blood and lung of different breeds of sheep，the transcript levels of TLR2， TLR4 and TLR5 genes in the blood of Boer goats were extremely significantly lower than those of the other four species （P<0.01， the same below），the transcript levels of TLR7 and TLR8 genes were extremely significantly lower than those of the other three species of sheep except black goats. The transcript levels of TLR4， TLR7， TLR8 and TLR9 genes in the blood of white goats were extremely significantly higher than those of the other four species. The transcript levels of TLR2， TLR3， TLR4， TLR5 and TLR8 genes in the lungs of Hu sheep were extremely significantly lower than those of the other four sheep species， while the transcript levels of TLR5 and TLR8 genes were extremely highly significant higher in the lungs of Qianbei Ma sheep than in the other four species. In addition， the transcript levels of TLR2， TLR4， TLR7 and TLR8 genes in the blood of five sheep species were all extremely significantly higher than the transcript levels of other TLRs genes. Transcript levels of TLR2， TLR3， TLR4， TLR5 and TLR8 genes in sheep lungs were relatively high， in Guizhou white goat， Guizhou black goat and Boer goat all showed extremely significantly higher transcript levels than other TLRs genes. 【Conclusion】The transcript levels of TLRs genes in the blood and lungs of different breeds of sheep are different， with TLR2， TLR3， TLR4， TLR5 and TLR8 genes having relatively high transcript levels. It is suggested that TLRs play a role in the organism of different breeds of sheep in scavenging pathogens and maintaining the homeostasis of the organism， and the difference in the transcription level of TLRs genes may be one of the reasons for the difference in susceptibility of different breeds of sheep to epidemic diseases.

Key words： sheep; Toll-like receptors （TLRs）; blood; lung; transcription level

Foundation item： National Natural Science Foundation of China （31660723， 32060786）; Guizhou Provincial Scien-ce and Technology Project （Qiankehejichu〔2019〕1181， Qiankehezhicheng〔2018〕2271）

0 引言

【研究意義】貴州黑山羊、貴州白山羊和黔北麻羊具有生產性能優、適應范圍廣、抗病性強及耐粗飼等特點，是貴州省養羊業重點發展的地方種質資源（劉彬等，2014）;波爾山羊和湖羊具有適應性好、繁殖力強和耐粗飼等特點，是貴州省引進的外來品種（陳其新等，2012）。近年來，貴州省羊疫病的頻發與蔓延極大阻礙其產業的健康發展。Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs）作為一類模式識別受體，能通過識別病原微生物保守的分子相關模式而實現對外來病原體的早期識別，具有激活機體天然免疫和調節機體獲得性免疫的能力（Vidya et al.，2018;趙飛等，2019）。疫病流行病學調查顯示，在應對羊疫病發生時不同品種的易感性存在明顯差異，可能與不同品種羊的TLRs基因轉錄水平差異具有一定的相關性。因此，分析不同品種羊TLRs基因轉錄水平差異，對探究TLRs基因與羊疫病發生的關聯性具有重要意義。【前人研究進展】至今，已知TLRs家族包括TLR1～TLR10，共10個成員，針對家畜TLRs的研究多見于馬、牛和豬等物種（Wassef et al.，2004;Alvarez et al.，2006;Tirumurugaan et al.，2010）。趙一萍等（2012）對蒙古馬不同組織器官中TLR4、TLR2、TLR1和TLR6的轉錄水平進行檢測，結果發現TLRs基因mRNA在蒙古馬各組織器官的轉錄水平差異明顯，可能與其識別和抵抗病原體的能力有關。李鵬和王雅春（2019）對豬TLRs的種類、進化特點及免疫相關研究現狀進行系統分析，發現豬TLRs廣泛分布在各種組織細胞內，且在免疫相關組織或細胞上的數量較多，在抵御病原入侵的過程中發揮重要作用。唐娜等（2020）研究表明，TLRs在水牛組織中也有廣泛分布，在脾臟、肺臟和肝臟等組織中均有表達，并證實TLR1、TLR2及TLR4在牛抗病免疫方面發揮重要作用。近年來，TRL2和TLR4作為抗病原體免疫應答功能的家族成員得到廣泛關注及深入研究（Barton and Medzhitov，2003;O'Neill et al.，2013）。TLR2可調控細胞內的信號傳導，且在機體識別病原微生物方面發揮重要作用，在抗菌抗病毒過程中能直接或間接對炎癥因子的合成與釋放起促進作用，與機體的免疫作用緊密相關（楊慶利和冷靜，2021）。TLR4能介導革蘭氏陰性菌及其脂多糖（LPS）的宿主反應，還能刺激機體產生相關細胞因子以抵抗病毒侵入，對機體識別病原體和增強抗病性能具有重要意義（趙明明等，2016）。劉潔等（2020）對支原體肺炎小鼠的TLR2/TLR4、MYD88和NF-κB20P65表達水平及其相關性進行分析，結果發現TLR2和TLR4表達水平在支原體肺炎小鼠中升高，且參與支原體感染的免疫損傷修復。【本研究切入點】目前，關于羊TLRs基因轉錄水平的研究尚無詳細報道，針對不同品種羊TLRs基因轉錄水平與其疫病易感性差異的研究更是鮮見報道。【擬解決的關鍵問題】選取貴州省主要飼養的5種羊為研究對象，基于TaqMan探針熒光定量PCR分析不同品種羊TLR1～TLR10基因轉錄水平的差異性，為揭示TLRs基因轉錄水平與羊疫病間的關聯性提供參考依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

每個品種羊10份抗凝血液及10份肺臟組織，分別采自健康無病的貴州黑山羊、貴州白山羊、黔北麻羊、波爾山羊和湖羊;各品種羊樣本則由貴州省各品種羊規模養殖場提供，3月齡，未注射任何疫苗，且利用PCR和血清學診斷方法（趙萍等，2010;馮杰等，2016）對25只羊進行山羊支原體山羊肺炎亞種（Mccp）、絲狀支原體山羊亞種（Mmc）、綿羊肺炎支原體（MO）、布氏桿菌（Brucella）、口蹄疫（FAM）、小反芻獸疫（PPR）、山羊痘（GP）的病原學和血清抗體檢測，結果均呈陰性。RNAprep Pure血液總RNA提取試劑盒購自天根生化科技（北京）有限公司;RNAiso Plus組織總RNA提取試劑和PrimeScript? RT Master Mix購自TaKaRa公司。

1. 2 引物設計與合成

參考GenBank已公布的TLRs基因序列，選擇5種羊TLRs基因保守區域序列，使用Primer Premier 5.0分別設計TLR1～TLR10基因特異性擴增引物和TaqMan探針引物（表1），并委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1. 3 RNA提取及cDNA合成

參照RNAprep Pure血液總RNA提取試劑盒說明提取5種羊50份血液樣本總RNA，同時采用TRIzol法提取5種羊50份肺臟組織總RNA，以PrimeScriptTM RT Master Mix試劑盒制備cDNA。反轉錄過程：0.1～2.0 μg總RNA加RNase-free ddH2O至8.0 μL，再加入5×PrimeScriptTM RT Master Mix 2.0 μL，混勻。37 ℃反轉錄15 min，然后85 ℃滅活5 s，-20 ℃保存備用。

1. 4 不同品種羊血液及肺臟組織中TLRs基因轉錄水平檢測

將已制作好的TLR1～TLR10標準質粒稀釋成整數倍，再按10倍梯度進行稀釋，選取其中5個梯度（107～103）繪制標準曲線，并擬合回歸方程。采用TaqMan探針熒光定量PCR對不同品種羊的10份血液和肺臟樣本cDNA進行TLR1～TLR10基因檢測，根據回歸方程與樣品檢測得到的Ct，計算出待測樣品中的基因拷貝數，分別記錄5種羊血液及肺臟組織中TLR1～TLR10基因的拷貝數。

1. 5 TLRs基因轉錄水平差異顯著性分析

運用SPSS 20.0對TLR1～TLR10基因在不同品種羊血液及肺臟組織中的轉錄水平進行差異顯著性分析，并以Graphpad Prism 6.4進行繪圖。

2 結果與分析

2. 1 TaqMan探針熒光定量PCR標準曲線

TLR1～TLR10基因TaqMan探針熒光定量PCR標準曲線見圖1，對應的回歸方程分別為：yTLR1=-3.359x+41.996（R2=0.9990）;yTLR2=-3.404x+44.028（R2=0.9982）;yTLR3=-3.292x+42.556（R2=0.9998）;yTLR4=-3.227x+46.483（R2=0.9988）;yTLR5=-3.370x+46.124（R2=0.9995）;yTLR6=-3.220x+41.190（R2=0.9930）;yTLR7=-3.277x+43.399（R2=0.9985）;yTLR8=-3.233x+43.393（R2=0.9908）;yTLR9=-3.159x+43.389（R2=0.9996）;yTLR10=-3.411x+43.059（R2=0.9992）。

2. 2 不同品種羊血液中TLRs基因轉錄水平差異

對5種羊血液中的TLR1～TLR10基因轉錄水平差異進行分析，結果（圖2）顯示，不同品種羊血液中TLR1基因轉錄水平排序為貴州白山羊<貴州黑山羊<波爾山羊<黔北麻羊<湖羊，TLR2基因轉錄水平排序為波爾山羊<貴州黑山羊<湖羊<貴州白山羊<黔北麻羊，TLR3基因轉錄水平排序為貴州黑山羊<波爾山羊<黔北麻羊<貴州白山羊<湖羊，TLR4基因轉錄水平排序為波爾山羊<黔北麻羊<貴州黑山羊<湖羊<貴州白山羊，TLR5基因轉錄水平排序為波爾山羊<湖羊<貴州黑山羊<黔北麻羊<貴州白山羊，TLR6基因轉錄水平排序為黔北麻羊<湖羊<貴州黑山羊<波爾山羊<貴州白山羊，TLR7基因轉錄水平排序為波爾山羊<貴州黑山羊<黔北麻羊<湖羊<貴州白山羊，TLR8基因轉錄水平排序為波爾山羊<貴州黑山羊<黔北麻羊<湖羊<貴州白山羊，TLR9基因轉錄水平排序為貴州黑山羊<波爾山羊<黔北麻羊<湖羊<貴州白山羊，TLR10基因轉錄水平排序為黔北麻羊<貴州黑山羊<湖羊<貴州白山羊<波爾山羊。在波爾山羊血液中TLR2、TLR4和TLR5基因轉錄水平均極顯著低于其他4種羊（P<0.01，下同），TLR7和TLR8基因轉錄水平則極顯著低于除黑山羊外的其他3種羊;在白山羊血液中TLR4、TLR7、TLR8和TLR9基因轉錄水平極顯著高于其他4種羊。

2. 3 不同品種羊肺臟中TLRs基因轉錄水平差異

對5種羊肺臟中的TLR1～TLR10基因轉錄水平差異進行分析，結果（圖3）顯示，不同品種羊肺臟中TLR1基因轉錄水平排序為貴州黑山羊<湖羊<黔北麻羊<波爾山羊<貴州白山羊，TLR2基因轉錄水平排序為湖羊<波爾山羊<貴州白山羊<黔北麻羊<貴州黑山羊，TLR3基因轉錄水平排序為湖羊<黔北麻羊<波爾山羊<貴州白山羊<貴州黑山羊，TLR4基因轉錄水平排序為湖羊<貴州白山羊<貴州黑山羊<波爾山羊<黔北麻羊，TLR5基因轉錄水平排序為湖羊<貴州黑山羊<波爾山羊<貴州白山羊<黔北麻羊，TLR6基因轉錄水平排序為湖羊<貴州白山羊<波爾山羊<貴州黑山羊<黔北麻羊，TLR7基因轉錄水平排序為黔北麻羊<貴州白山羊<湖羊<貴州黑山羊<波爾山羊，TLR8基因轉錄水平排序為湖羊<貴州黑山羊<波爾山羊<貴州白山羊<黔北麻羊，TLR9基因轉錄水平排序為湖羊<貴州白山羊<貴州黑山羊<波爾山羊<黔北麻羊，TLR10基因轉錄水平排序為黔北麻羊<貴州白山羊<湖羊<貴州黑山羊<波爾山羊。在湖羊肺臟中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8和TLR9基因轉錄水平均低于其他4種羊，其中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因轉錄水平極顯著低于其他4種羊;而在黔北麻羊肺臟中TLR5和TLR8基因轉錄水平極顯著高于其他4種羊。

2. 4 同一品種羊血液中TLRs基因轉錄水平差異

對同一品種羊血液中的TLR1～TLR10基因轉錄水平差異進行分析，結果（圖4）顯示，在波爾山羊血液中TLR2、TLR4、TLR7、TLR8和TLR10基因轉錄水平較高，均極顯著高于其他TLRs基因轉錄水平;在其他4種羊血液中TLR2、TLR4、TLR7和TLR8基因轉錄水平也極顯著高于其他TLRs基因轉錄水平。TLR2、TLR4、TLR7和TLR8基因轉錄水平在貴州白山羊、貴州黑山羊和湖羊血液中均表現為TLR2基因<TLR7基因<TLR8基因<TLR4基因，在黔北麻羊血液中表現為TLR7基因<TLR2基因<TLR4基因<TLR8基因，在波爾山羊血液中表現為TLR2基因<TLR8基因<TLR7基因<TLR4基因。可見，在黔北麻羊血液中TLR8基因具有相對較高的轉錄水平，而其他4種羊均以TLR4基因具有相對較高的轉錄水平。

2. 5 同一品種羊肺臟中TLRs基因轉錄水平差異

對同一品種羊肺臟中的TLR1～TLR10基因轉錄水平差異進行分析，結果（圖5）顯示，羊肺臟中TLR1基因轉錄水平相對較低，而TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因轉錄水平相對較高，在貴州白山羊、貴州黑山羊和波爾山羊均極顯著高于其他TLRs基因。TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因轉錄水平在貴州白山羊肺臟中表現為TLR2基因<TLR3基因<TLR8基因<TLR4基因<TLR5基因，在貴州黑山羊肺臟中表現為TLR8基因<TLR3基因<TLR2基因<TLR5基因<TLR4基因，在黔北麻羊肺臟中表現為TLR3基因<TLR2基因<TLR4基因<TLR8基因<TLR5基因，在波爾山羊肺臟中表現為TLR3基因<TLR2基因<TLR8基因<TLR4基因<TLR5基因，在湖羊肺臟中表現為TLR8基因<TLR2基因<TLR3基因<TLR4基因<TLR5基因。可見，TLR4基因在貴州黑山羊肺臟中具有相對較高的轉錄水平，但在其他4種羊肺臟中均表現為TLR5基因具有相對較高的轉錄水平。

3 討論

TLRs可激活機體免疫應答并對其免疫功能進行調節，在機體的炎癥反應及相關信號傳導過程中發揮重要作用（趙飛等，2019）。TLRs在哺乳動物各組織中廣泛表達，已證實TLRs可減少和清除機體的細菌性病原感染（Albiger et al.，2010）。TLRs家族對不同組織病原體的識別作用直接受其在該組織中轉錄水平的影響，即TLRs轉錄水平決定了動物個體或組織器官應對外源微生物侵染的能力（Menzies and Ingham，2006;Tirumurugaan et al.，2010）。趙一萍等（2012）對蒙古馬不同組織器官的TLR3、TLR7、TLR8和TLR9基因轉錄水平進行研究，結果發現TLRs基因轉錄水平在蒙古馬各組織器官中存在明顯差異，可能與其對病原體的識別和抵抗能力有關;陳亞冰等（2014）對牦牛不同組織TLR3和TLR5基因轉錄水平進行研究，發現TLRs基因在不同組織器官的轉錄水平差異明顯，推測其與病原體識別有關。本研究采用TaqMan探針熒光定量PCR檢測TLR1～TLR10基因在貴州黑山羊、貴州白山羊、黔北麻羊、波爾山羊及湖羊等5種羊血液和肺臟組織中的轉錄水平差，與程曉薇等（2017）檢測家禽β-連環蛋白基因在不同臟器表達水平應用的絕對熒光定量PCR相同，但與陸珂靜等（2019）檢測小鼠TLRs mRNA表達量的相對熒光定量PCR不同。與相對熒光定量PCR相比，絕對熒光定量PCR更準確，且特異性更好（朱振洪等，2011）。

病原致病性存在種間和種內差異，即不同物種或同物種不同品種對同一病原的感染存在易感差異性，如Mmc在自然狀態下只感染山羊，一般不感染綿羊（樊慶德等，2011）。陶岳等（2006）對新疆石河子地區湖羊流行病學進行調查，結果發現傳染性胸膜肺炎對不同品種羊的感染性存在明顯差異。本研究結果表明，不同品種羊血液和肺臟中的TLRs基因轉錄水平均存在差異，其中，波爾山羊血液中TLR2、TLR4和TLR5基因轉錄水平均極顯著低于其他4種羊，TLR7和TLR8基因轉錄水平則極顯著低于除黑山羊外的其他3種羊。這與本課題組前期對貴州省山羊支原體肺炎易感性調查發現波爾山羊較其他品種山羊具有更高發病率的結論相吻合，提示波爾山羊對羊支原體肺炎易感性可能受TLRs基因轉錄水平差異的影響。

越來越多研究證實，同一TLRs基因在同科不同屬，甚至同種動物間也存在微小的差異（曾爽等，2015）。TLRs基因在不同品種羊中的轉錄水平具有一定差異性，可能是造成不同品種羊對疫病易感差異的原因之一。本研究發現，在貴州黑山羊、貴州白山羊、黔北麻羊、波爾山羊及湖羊等5種羊血液中TLR2、TLR4、TLR7和TLR8基因具有較高的轉錄水平，均極顯著高于其他TLRs基因轉錄水平;肺臟中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因轉錄水平相對較高，在貴州白山羊、貴州黑山羊和波爾山羊均極顯著高于其他TLRs基因轉錄水平。TLR3具有識別病原雙鏈RNA的能力，云云和黃升海（2007）從轉錄水平證實TLR3基因顯著上調表達受呼吸道合胞病毒感染的影響;TLR5是細菌鞭毛蛋白受體，家禽各組織中TLR5基因表達能促進機體針對病原菌的免疫反應（王琨等，2020）;TLR7和TLR8能促進樹突狀細胞的分化與遷移，進而產生TNF-α、IFN-α和IL-2等炎性細胞因子（Crespo et al.，2013）。在黔北麻羊肺臟中TLR5和TLR8基因轉錄水平極顯著高于其他4種羊，是否與黔北麻羊在抵抗細菌及產生炎性細胞因子方面具有優勢尚有待進一步探究。

血液作為檢測TLRs基因轉錄水平的樣本具有易獲得且對動物個體傷害小等優點，而肺臟是羊感染MO和Mmc后發生病變的主要器官。本研究以不同品種羊血液及肺臟為樣本進行TLR1～TLR10基因轉錄水平差異檢測，結果發現TLR2和TLR4基因在不同品種羊血液及肺臟中均有較高的轉錄水平，與Lanki等（2018）、石安惠和牟杰（2020）的研究結果一致，進一步證實TLR2和TLR4是免疫應答的重要調控因子，有助于機體抵抗病原菌侵染。可見，TLRs在不同品種羊機體中發揮著清除病原體及維持機體穩態的作用，為探究不同品種羊TLRs基因轉錄水平與羊疫病的相關性提供了重要的參考依據。

4 結論

不同品種羊血液和肺臟中TLRs基因轉錄水平具有差異性，以TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因轉錄水平相對較高，提示TLRs在不同品種羊機體中發揮著清除病原體及維持機體穩態的作用，而TLRs基因轉錄水平差異可能是造成不同品種羊對疫病易感差異的原因之一。

參考文獻：

陳其新，張建紅，宋彥軍，董濟福. 2012. 我國主要肉羊品種肉用性能的初步評價[J]. 中國草食動物科學，（S1）：357-362. [Chen Q X，Zhang J H，Song Y J，Dong J F. 2012. Preliminary evaluation of meat performance of main mutton sheep breeds in China[J]. China Herbivore Science，（S1）：357-362.] doi：10.3969/j.issn.2095-3887.2012.z1. 132.

陳亞冰，蘭道亮，林寶山，黃偲，黃勇，李鍵. 2014. 牦牛不同組織TLR3、TLR5 mRNA轉錄水平相對定量研究[J]. 生物技術通報，（8）：89-93. [Chen Y B，Lan D L，Lin B S，Huang C，Huang Y，Li J. 2014. Relative quantification of mRNA transcription of TLR3 and TLR5 in different tissues of yak[J]. Biotechnology Bulletin，（8）：89-93.] doi：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.08.009.

程曉薇，張丹陽，張杰，邵紅霞，秦愛建，錢琨. 2017. 家禽beta-連環蛋白基因絕對定量PCR方法的建立及應用[J]. 中國獸醫學報，37（10）：1904-1909. [Cheng X W，Zhang D Y，Zhang J，Shao H X，Qin A J，Qian K. 2017. Establishment and application of an absolute quantification real-time PCR assay for detecting avain beta-catenin gene[J]. Chinese Journal of Veterinary Science，37（10）：1904-1909.] doi：10.16303/j.cnki.1005-4545.2017.10.17.

樊慶德，徐春光，高明華. 2011. 綿羊三種支原體病免疫預防研究進展[J]. 動物醫學進展，32（6）：156-159. [Fan Q D，Xu C G，Gao M H. 2011. Progress on immunoprevention in three sheep mycoplasmosis[J]. Progress in Veterinary Medicine，32（6）：156-159.] doi：10.3969/j.issn.1007-5038. 2011.06.037.

馮杰，崔燕，余四九，杜春林，夏先林，主性，王健. 2016. 貴州高海拔山區羊疫病血清學調查[J]. 貴州農業科學，44（6）：103-107. [Feng J，Cui Y，Yu S J，Du C L，Xia X L，Zhu X，Wang J. 2016. Serological test of main goat epidemic diseases in high-elevation mountainous area in Guizhou[J]. Guizhou Agricultural Sciences，44（6）：103-107.] doi：10.3969/j.issn.1001-3601.2016.06.028.

李鵬，王雅春. 2019. 豬Toll樣受體研究進展[J]. 福建畜牧獸醫，41（6）：31-35. [Li P，Wang Y C. 2019. Research progress in porcine Toll-like receptors[J]. Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine Fujian，41（6）：31-35.] doi：10.3969/j.issn.1003-4331.2019.06.011.

劉彬，蔡惠芬，張依裕，劉若余，羅衛星. 2014. 貴州山羊品種DQA1基因第3外顯子遺傳變異分析[J]. 生物技術，24（4）：13-16. [Liu B，Cai H F，Zhang Y Y，Liu R Y，Luo W X. 2014. Genetic variation in the second exon of DQA1 gene in the breeds of Guizhou local goats[J]. Biotechnology，24（4）：13-16.] doi：10.3969/j.issn.1004-311X. 2014.04.0078.

劉潔，劉英，楊維民. 2020. TLR2/4、MYD88和NF-κB P65在支原體肺炎小鼠中的表達及其相關性[J]. 解剖學研究，42（5）：442-445. [Liu J，Liu Y，Yang W M. 2020. Expression and correlation of TLR2/4，MYD88 and NF-kappa B P65 in mice with mycoplasma pneumonia[J]. Anatomy Research，42（5）：442-445.] doi：10.3969/j.issn.1671-0770.2020.05.011.

陸珂靜，侯林靜，朱彬，施維，梁藝穎，黃維義，張為宇. 2019. 大片形吸蟲感染及其分泌排泄產物對小鼠Toll樣受體mRNA表達量的影響[J]. 中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志，37（3）：272-278. [Lu K J，Hou L J，Zhu B，Shi W，Liang Y Y，Huang W Y，Zhang W Y. 2019. Effects of Fasciola gigantica infection and released excretorysecretory products on the mRNA expression of Toll-like receptors in mice[J]. Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases，37（3）：272-278.] doi：10.12140/j.issn. 1000-7423.2019.03.006.

石安惠，牟杰. 2020. 重癥肺炎患者外周血TLR2、TLR4表達情況及與炎癥因子的關系[J]. 熱帶醫學雜志，20（7）：933-936. [Shi A H，Mou J. 2020. Analysis of expressions of TLR2 and TLR4 in peripheral blood of patients with severe pneumonia and their relationship with inflammatory factors[J]. Journal of Tropical Medicine，20（7）：933-936.] doi：10.3969/j.issn.1672-3619.2020.07.017.

唐娜，孫政，高清龍，李衛真，楊忠. 2020. 牛Toll樣受體的研究進展[J]. 上海畜牧獸醫通訊，（6）：14-16. [Tang N，Sun Z，Gao Q L，Li W Z，Yang Z. 2020. Progress of bovine Toll-like receptor[J]. Shanghai Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，（6）：14-16.] doi：10.14170/ j.cnki.cn31-1278/s.2020.06.005.

陶岳，李新萍，剡根強，張孝恩，林為民. 2006. 新疆石河子地區湖羊傳染性胸膜肺炎流行病學調查研究及預防控制效果的初步研究[J]. 中國畜牧獸醫，33（2）：62-65. [Tao Y，Li X P，Kui G Q，Zhang X E，Lin W M. 2006. Preli-minary study on epidemiological investigation and prevention and control effect of infectious pleuropneumonia in Hu sheep in Shihezi Area of Xinjiang[J]. China Animal Husbandry and Veterinary Medicine，33（2）：62-65.] doi：10.3969/j.issn.1671-7236.2006.02.025.

王琨，季星妤，楊潔，姜森，朱建中. 2020. 家禽TLR5的研究進展[J]. 中國家禽，42（7）：76-81. [Wang K，Ji X Y，Yang J，Jiang S，Zhu J Z. 2020. Research progress on poultry TLR5[J]. Chinese Poultry，42（7）：76-81.] doi：10.16372/j.issn.1004- 6364.2020.07.015.

楊慶利，冷靜. 2021. TLR2和TLR4信號在腫瘤發生和發展中的作用及機制的研究進展[J]. 中國免疫學雜志，37（3）：382-384. [Yang Q L，Leng J. 2021. Research progress of TLR2 and TLR4 signaling in oncogenesis and development of tumors[J]. Chinese Journal of Immunology，37（3）：382-384.] doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2021.03. 022.

云云，黃升海. 2007. Toll樣受體3介導呼吸道合胞病毒感染人肺上皮細胞的炎性反應及其信號轉導通路[J]. 中國組織工程研究與臨床康復，11（21）：4119-4122. [Yun Y，Huang S H. 2007. Toll-like receptor 3 mediated respiratory syncytial virus inflammatory response on human lung epithelial cells and its signal transduction[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research，11（21）：4119-4122.] doi：10.3321/j.issn：1673-8225.2007. 21.030.

趙飛，譚愛萍，孔璐璐，劉付翠，鄧玉婷，潘厚軍，張瑞泉，姜蘭. 2019. 多子小瓜蟲感染后草魚TLR信號通路基因的表達動態[J]. 南方農業學報，50（9）：1885-1892. [Zhao F，Tan A P，Kong L L，Liu F C，Deng Y T，Pan H J，Zhang R Q，Jiang L. 2019. The dynamics of gene expression profiles in toll-like receptor（TLR） signaling pathway of grass carp （Ctenopharyngodon idella） after infection with Ichthyophthirius multifiliis[J]. Journal of Sou-thern Agriculture，50（9）：1885-1892.] doi：10.3969/j.issn. 2095-1191.2019.09.01.

趙明明，師清博，秦峻嶺，王春鳳，錢愛東. 2016. TLR4及其通路在結核感染免疫中的作用[J]. 中國獸醫學報，36（10）：1803-1808. [Zhao M M，Shi Q B，Qin J L，Wang C F，Qian A D. 2016. The role of TLR4 signaling pathway in anti-infection immunity to Mycobacterium tuberculosis[J]. Chinese Journal of Veterinary Science，36（10）：1803-1808.] doi：10.16303/j.cnki.1005-4545.2016.10.30.

趙萍，賀英，儲岳峰，高鵬程，張念章，趙海燕，逯忠新. 2010. 青海省山羊支原體山羊肺炎亞種抗體檢測[J]. 安徽農業科學，38（35）：20096. [Zhao P，He Y，Chu Y F，Gao P C，Zhang N Z，Zhao H Y，Lu Z X. 2010. Antibody detection on Mycoplasma capricolum subsp. Capripneumoniae in Qinghai Province[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences，38（35）：20096.] doi：10.13989/j.cnki.0517-6611. 2010.35.154.

趙一萍，黃金龍，白東義，陳建興，趙啟南，芒來. 2012. 蒙古馬不同組織器官TLR1、TLR2、TLR4和TLR6 mRNA轉錄水平研究[J]. 中國獸醫學報，32（10）：1542-1546. [Zhao Y P，Huang J L，Bai D Y，Chen J X，Zhao Q N，Mang L. 2012. mRNA expression of Toll-like receptors 1，2，4 and 6 in different tissues of Mongolia horse[J]. Chinese Journal of Veterinary Science，32（10）：1542-1546.] doi：10. 16303/j.cnki.1005-4545.2012.10.025.

曾爽，景志忠，楊孝樸. 2015. 家畜Toll樣受體的表達及在相關疾病發生中的作用[J]. 動物醫學進展，36（4）：104-108. [Zeng S，Jing Z Z，Yang X P. 2015. Expression of Toll-like receptors in domestic animals and effects in occurence of associated diseases[J]. Progress in Veterinary Medicine，36（4）：104-108.] doi：10.16437/j.cnki.1007-5038.2015.04.024.

朱振洪，李金輝，萬海同. 2011. 不同熒光定量PCR分析方法檢測大鼠腦缺血再灌注損傷中Caspase-3基因的表達研究[J]. 激光生物學報，20（3）：388-393. [Zhu Z H，Li J H，Wan H T. 2011. Studies on expression of Caspase-3 gene in rat cerebral ischemia-reperfusion injury by two different quantitation methods of real-time PCR[J]. Acta Laser Biology Sinica，20（3）：388-393.] doi：10.3969/j.issn.1007-7146.2011.03.021.

Albiger B，Dahlberg S，Henriques-Normark B，Normark S. 2010. Role of the innate immune system in host defence against bacterial infections：Focus on the Toll-like receptors[J]. Journal of Internal Medicine，261（6）：511-528. doi：10.1111/j.1365-2796.2007.01821.x.

Alvarez B，Revilla C，Chamorro S，López-Fraga M，Alonso F，Domíngguez J，Ezquerra A. 2006. Molecular cloning，characterization and tissue expression of porcine Toll-like receptor 4[J]. Developmental and Comparative Immuno-logy，30（4）：345-355. doi：10.1016/j.dci.2005.06.020.

Barton G M，Medzhitov R. 2003. Toll-like receptor signaling pathways[J]. Science，300（5625）：1524-1525. doi：10.1126/ science.1085536.

Crespo M I，Zacca E R，Núnez N G，Ranocchia R P，Maccioni M，Maletto B A，Pistoresi-Palencia M C，Morón G. 2013. TLR7 triggering with polyuridylic acid promotes cross-presentation in CD8α+ conventional dendritic cells by enhancing antigen preservation and MHC class I antigen permanence on the dendritic cell surface[J]. Journal of Immunology， 190（3）：948-960. doi：10.4049/jimmunol.1102725.

Lanki M A，Sepp?nen H E，Mustonen H K，B?ckelman C，Juuti A T，Hagstr?m J K，Haglund C H. 2018. Toll-like receptor 2 and Toll-like receptor 4 predict favorable prognosis in local pancreatic cancer[J]. Tumor Biology，40（9）：1010428318801188. doi：10.1177/1010428318801188.

Menzies M，Ingham A. 2006. Identification and expression of Toll-like receptors 1-10 in selected bovine and ovine tissues[J]. Veterinary Immunology and Immunopathology，109（1-2）：23-30. doi：10.1016/j.vetimm.2005.06.014.

O'Neill L A J，Golenbock D，Bowie A G. 2013. The history of Toll-like receptors-redefining innate immunity[J]. Nature Reviews. Immunology，13（6）：453-460. doi：10.1038/nri 3446.

Tirumurugaan K G，Dhanasekaran S，Raj G D，Raja A，Kumanan K，Ramaswamy V. 2010. Differential expression of Toll-like receptor mRNA in selected tissues of goat （Capra hircus）[J]. Veterinary Immunology and Immunopathology，133（2-4）：296-301. doi：10.1016/j.vetimm.2009. 08.015.

Vidya M K，Kumar V G，Sejian V，Bagath M，Krishnan G，Bhatta R. 2018. Toll-like receptors：Significance，ligands，signaling pathways，and functions in mammals[J]. International Reviews of Immunology，37（1）：20-36. doi：10. 1080/08830185. 2017.1380200.

Wassef A，Janardhan K，Pearce J W，Singh B. 2004. Toll-like receptor 4 in normal and inflamed lungs and other organs of pig，dog and cattle[J]. Histology and Histopathology，19（4）：1201-1208. doi：10.14670/HH-19.1201.

收稿日期：2021-03-04

基金項目：國家自然科學基金項目（31660723，32060786）;貴州省科技計劃項目（黔科合基礎〔2019〕1181號，黔科合支撐〔2018〕2271號）

通訊作者：張雙翔（1987-），https：//orcid.org/0000-0002-9117-9960，高級獸醫師，主要從事動物疫病防控研究工作，E-mail：51379577@ qq.com;程振濤（1979-），https：//orcid.org/0000-0002-6723-5344，博士，教授，主要從事動物病原學研究工作，E-mail：chengzhentao@sohu.com

第一作者：唐沙（1992-），https：//orcid.org/0000-0001-7723-0574，研究方向為動物疫病防控，E-mail：670836771@qq.com

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