深海魚油對應激性胃潰瘍的抑制作用

王鑫荃 龐澤星 吳逸釗 劉淇興 區鍶文 余印林 王桂房 許小洋,3

1.廣州醫科大學第二臨床學院，廣東廣州 511436；2.廣州醫科大學機能實驗中心，廣東廣州 511436；3.廣州醫科大學生理教研室，廣東廣州 511436

近年來，應激性胃潰瘍發病率逐漸升高，常引起出血、休克甚至死亡等嚴重后果，其發病與機體內氧自由基系統生成和清除調節機制失衡有關，抗氧化物質可調節機體內自由基生成和清除之間的平衡，利于胃潰瘍愈合[1-4]。深海魚油富含n-3 多不飽和脂肪酸（n-3 PUFAs），其中二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）可作為自由基的清除劑，具有抗炎和抗氧化作用。EPA 和DHA 可通過限制炎性細胞游走和炎癥介質、核因子κB（NF-κB）途徑和Toll 樣受體等途徑抑制炎癥[5-7]。本研究構建應激性胃潰瘍大鼠模型，并觀察深海魚油的干預效果，初步探討深海魚油抑制應激性胃潰瘍的可能機制，為應激性胃潰瘍的預防及治療方案提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

24 只成年SD 大鼠，SPF 級，雌雄各半，體重（200±10）g，購于廣東省醫學實驗動物中心（動物使用許可證號：SYXK（粵）2016-0168，生產許可證號：SCXK（粵）2018-0002）。動物實驗均遵循廣州醫科大學動物倫理委員要求進行。

1.2 藥品、試劑與儀器

1.2.1 試劑 深海魚油（美國GNC，純度：90.96%，批號：1600CR0662）；SOD 試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號：A001-1）；蘇木精-伊紅（HE）染液（南昌雨露實驗器材有限公司，貨號：YLYLSMJ-003）。

1.2.2 儀器 分光光度計（上海棱光技術有限公司，型號：722S）；臺式低速自動離心機（長沙平凡儀器儀表有限公司，型號：TDZ4-WS）；數顯三用恒溫水箱（金壇市精達儀器制造有限公司，型號：HH-420）；冰凍切片機（Leica，型號：CM1950）。

1.3 實驗方法

1.3.1 深海魚油灌胃處理 依據隨機數字表法將24 只大鼠分成對照組、模型組和魚油組，每組8 只，雌雄各半。給藥劑量參照李亞潔等[8]和前期預實驗確定。對照組和模型組處理：適宜的環境條件下養殖5 d，按0.84 mL/kg 灌胃0.9%氯化鈉溶液，2 次/d；魚油組：相同的養殖環境條件下連續5 d 按0.84 mL/kg 灌胃深海魚油，2 次/d。實驗前1 天均禁食不禁水24 h。

1.3.2 束縛水浸應激法建立大鼠胃潰瘍模型 末次灌胃1 h 后，模型組和魚油組束縛水浸法建立大鼠應激性胃潰瘍模型。束縛大鼠四肢背位固定于木板上，垂直立于水中12 h，水位與胸骨劍突齊平，水溫控制在（21±1）℃[9]。

1.3.3 實驗標本獲取 麻醉后心臟采血，解剖暴露胃，結扎幽門和賁門，經賁門端向胃內注射1～2 mL 甲醛固定液，摘下全胃，甲醛固定后取出胃，沿大彎剪開，沖洗，展平觀察。若模型組大鼠胃部出現沿血管走行分布，呈點狀或條索狀，淺表，提示造模成功[10-11]。

1.3.4 組織切片檢測 各組選取大小合適組織于4%多聚甲醛固定后包埋，切片，片厚8 μm，將切片貼附于專用載片上，行HE 染色，鏡下觀察胃黏膜表面上皮完整性、腺體排列情況。

1.3.5 胃潰瘍指數（UI）檢測 采用Guth 等[12]記分法：全胃各病灶長度之和為UI，病灶長度≤1 mm 為1 分；1 mm<糜爛長度≤2 mm 為2 分，2 mm<糜爛長度≤3 mm 為3 分，3 mm<糜爛長度≤4 mm 為4 分，若病灶長度>4 mm 則分段計數。若病灶寬度>2 mm 則將其計數加倍；若其長度與寬度均<1 mm 者記0.5 分。

1.3.6 血清超氧化物歧化酶（SOD）檢測 采用可見分光光度計（550 nm）并根據SOD 試劑盒提供的方法測定血清SOD 值。

1.4 統計學方法

采用SigmaPlot 12.5 for windows 統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P <0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠胃部黏膜損傷情況

對照組大鼠胃黏膜光滑透亮，黏膜皺襞清晰；模型組大鼠胃黏膜沉暗，黏膜皺襞斷裂，胃黏膜表面出現比較集中的潰瘍點且潰瘍寬度甚至＞1 mm；魚油組表面胃黏膜顏色相對清亮光滑，黏膜皺襞部分出現斷裂，潰瘍點散在分布，數量較少，潰瘍寬度＜1 mm。見圖1。

圖1 深海魚油對應激性胃潰瘍大鼠胃黏膜的作用

2.2 大鼠胃部黏膜病理組織HE 染色結果

對照組大鼠的胃黏膜完好無損；模型組及魚油組大鼠胃黏膜均出現缺損，但魚油組黏膜缺損僅發生在黏膜淺層，其損傷程度輕于模型組。見圖2。

圖2 大鼠胃黏膜組織切片HE 染色結果（100×）

2.3 三組UI、血清SOD 水平比較

三組UI、SOD 水平比較，差異有高度統計學意義（P ＜0.01）。模型組UI 高于對照組；魚油組UI 低于模型組，差異均有高度統計學意義（均P <0.01）。模型組SOD 水平低于對照組；魚油組SOD 水平高于模型組，差異有統計學意義（P <0.05 或P <0.01）。見表1。

表1 三組UI 指數比較（）

表1 三組UI 指數比較（）

注：與對照組比較，**P ＜0.01；與模型組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01。UI：潰瘍指數；SOD：超氧化物歧化酶

3 討論

應激性胃潰瘍的潛在發病機制尚不完全清楚，可能與體內氧自由基的生成和清除系統失衡、下丘腦垂體腎上腺功能反應和ghrelin 調控等多因素參與有關，故探究其發病機制能有效預防和治療的藥物至關重要[13-17]。深海魚油作為近年備受關注的保健品，其主要生理活性成分n-3 PUFAs，其中DHA 和EPA 是人體不能自身合成且對人體健康具有重要作用的多不飽和脂肪酸，具有調脂、抗炎等功效[18-19]。

束縛水浸應激法造模時間短、成功率高[14]。經造模后，模型組胃黏膜紋理紊亂且有多處出血點，鏡下胃黏膜缺損，提示造模成功。深海魚油能有效降低應激性大鼠UI，鏡下胃黏膜病理變化改善，提示深海魚油可能通過某種機制有效保護應激狀態下的胃黏膜。

EPA 和DHA 可作為抗氧化增強因子，調節體內氧化和抗氧化系統，抵御炎癥性損害[20]。DHA 和EPA 能下調天冬氨酸蛋白水解酶家族活性，同時抑制凋亡基因Bax 表達水平及促進Bcl-2 基因的表達而產生抗炎效應[21-23]。本實驗組認為深海魚油的抗胃潰瘍效應可能與EPA 和DHA 提高胃部SOD 活性而加快氧自由基的清除有關。本研究結果顯示，模型組SOD 水平低于對照組（P <0.01），提示氧化應激系統參與了應激性胃潰瘍的發生，這可能是機體處于應激狀態時，胃部血管收縮效應引起抗氧化酶系統活性下降，大量自由基生成，損傷胃黏膜，又促進自由基進一步生成，由此形成惡性循環[24-26]。魚油組SOD 水平高于模型組（P <0.05），提示深海魚油能夠提高SOD 的活性，顯著增強大鼠體內抗氧化酶系統，大幅度降低胃潰瘍的氧化應激，從而起到清除部分自由基，防止自由基對胃黏膜造成嚴重損傷[26]。

在深海魚油抗胃潰瘍機制探討中，本研究只涉及其對SOD 活性的影響觀察，對其詳細的分子機制尚未涉及，這是本研究不足之處。但本研究為今后深入探究深海魚油的抗胃潰瘍效應奠定了良好的前期基礎。

綜上所述，深海魚油具有顯著抗應激性潰瘍的效應，其機制可能是通過EPA 和DHA 提高胃組織的SOD 活性而加快自由基清除有關。雖然其詳細分子機制仍有待進一步深入探討，但本研究為胃潰瘍預防和治療提供有意義的實驗依據。