溶血卵磷脂膽堿酰基轉移酶 1與非小細胞肺癌患者臨床特征及預后的關系

楊昕，劉芳，張繼朋

1陜西中醫藥大學第二附屬醫院病理科，西安 712000

2空軍軍醫大學唐都醫院胸外科，西安 710038

非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是一種較為常見的肺癌，其病死率、復發轉移率均較高，一直是眾多研究者們關注的熱點。目前隨著腫瘤分子醫學的不斷進展，發現腫瘤的發生發展由多種分子及多種因素參與。相關研究表明，NSCLC患者中溶血卵磷脂膽堿酰基轉移 酶1（lysophosphatidylcholine acyltransferase 1，LPCAT1）表達水平升高，其可將溶血磷脂酰膽堿催化為卵磷脂，對后者的生物合成途徑產生較大影響，可參與腫瘤進展。相關研究證實，LPCATF1在結腸癌患者中存在高水平表達，能夠直接改變腫瘤細胞的脂質特征，誘導腫瘤的復發及轉移。有關研究顯示，LPCAT1能夠影響NSCLC患者腫瘤細胞的復發及轉移。但目前關于LPCAT1與NSCLC患者臨床特征及預后的相關研究較少，缺乏足量文獻加以證實。因此，本研究旨在探討LPCAT1與NSCLC患者臨床特征及預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年9月至2018年6月陜西中醫藥大學第二附屬醫院院收治的95例NSCLC患者。納入標準：①經病理學檢查確診為NSCLC；②TNM分期Ⅰ～Ⅲ期；③病歷資料完整且已完成1～3年的隨訪，至隨訪終點無失訪病例；④入院治療前行免疫治療及化療。排除標準：①合并其他部位腫瘤；②就診時存在心、肝、腎等臟器功能障礙；③合并除惡性腫瘤外其他肺部疾病如哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺部感染。根據納入與排除標準，本研究共納入95例NSCLC患者，其中男58例，女37例；腫瘤最大直徑1.5～7.1 cm，平均（3.98±0.58）cm；年齡41～74歲，平均（58.59±6.55）歲；分化程度：高分化41例，中分化19例，低分化19例，未分化16例；TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期24例，Ⅲ期58例；吸煙史47例；病理類型：鱗狀細胞癌48例，腺癌47例。本研究經醫院倫理委員會批準，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

在無菌條件下，選取NSCLC患者癌旁組織及腫瘤組織，使用剪刀剪碎上述組織在液氮中研磨后進行3000 r/min離心10 min，取上清液待檢。采用賽默飛世爾科技有限公司生產的Trizol總RNA抽取試劑盒對標本中的總RNA進行提取，采用實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測其癌旁組織及腫瘤組織中LPCAT1 mRNA的表達量。采用上海研卉生物科技有限公司生產的TAKARA反轉錄試劑盒進行反轉錄合成cDNA。PCR總反應體系為20 μl，其中含上下游引物各2 μl，焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate，DEPC）水共3.6 μl，ROX 0.4 μl，互補 DNA 2 μl，Mix 10 μl。PCR擴增反應條件：溫度95℃，反應10 min；溫度95℃，反應20 s；溫度60℃，反應20 s；溫度72℃，反應1 min，共40個循環。LPCAT1 mRNA相對表達量用2法計算。參考PrimerBank公布的基因序列，以GAPDH為內參，GAPDH上游引物：5'-AATCCCATCACCATCTTCCAG-3'，下游引物：5'-GAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3'；LPCAT1 mRNA 上游引物：5'-ACCTATTCCGAGCCATTGACC-3’，下游引物：5'-CCTAATCCAGCTTCTTGCGAAC-3'。

1.3 觀察指標

收集所有NSCLC患者的病歷資料，觀察記錄每例患者的年齡、性別、病理類型、腫瘤直徑、TNM分期、分化程度、預后情況。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 LPCAT 1 mRNA相對表達量的比較

NSCLC患者癌旁組織LPCAT1 mRNA相對表達量為（0.069±0.017），明顯低于腫瘤組織的（0.621±0.124），差異有統計學意義（t=24.254，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征NSCLC患者腫瘤組織中LPCAT 1 mRNA相對表達量的比較

TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結轉移的NSCLC患者腫瘤組織中LPCAT1 mRNA相對表達量均明顯高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移患者（P＜0.01）；不同年齡、性別、病理類型、腫瘤直徑、分化程度及是否吸煙NSCLC患者的LPCAT1 mRNA相對表達量比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征NSCLC患者腫瘤組織中LPCAT 1 mRNA相對表達量的比較（n=95）

2.3 腫瘤組織中LPCAT 1 mRNA相對表達量水平與NSCLC患者預后的關系

將LPCAT1 mRNA相對表達量≥0.651設為高水平組（n=48），LPCAT1 mRNA相對表達量＜0.651設為低水平組（n=47）。高水平組患者總生存率為37.50%（18/48），低于低水平組的68.09%（32/47），差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

NSCLC是最常見的肺癌類型之一，約占肺癌患者總數的85%，其發病率及病死率均處于較高水平。隨著治療方案的不斷更新，NSCLC患者的有多種化療方案，但目前仍以鉑類藥物為代表的方案為主。臨床研究驗表明，NSCLC患者經放療、手術治療及化療后仍有部分患者出現侵襲性轉移，且采用相同方案治療的患者預后也具有明顯差異。部分研究顯示，對NSCLC患者間的差異性進行比較，對于尋找新型治療靶點具有重要的臨床意義。

隨著分子醫學的不斷發展及關于腫瘤研究的不斷深入，相關研究顯示，LPCAT1在前列腺癌、乳腺癌、結直腸癌、肝癌等多種腫瘤患者中高表達，LPCAT1為一種重要的磷脂重構酶，位于5p15.33，該基因長度為67 498 bp，分子量59 151 Da，編碼單位由534個氨基酸組成。目前研究顯示，LPCAT1參與棕櫚酰溶血磷脂酰膽堿轉化為二棕櫚酰磷脂酰膽堿的生物學過程，其中后者為人體中重要的肺表面活性物質磷脂酰膽堿的主要成分，故認為LPCAT1在人體呼吸系統疾病病理及生理過程中發揮重要作用。部分研究證實了LPCAT1的高表達與前列腺癌患者的臨床特征相關，在轉移性前列腺癌患者中LPCAT1表達明顯升高。部分研究證實，前列腺癌患者的分期、分級與LPCAT1免疫組化評分呈正相關，局限期前列腺癌患者LPCAT1的表達水平明顯低于進展期患者。研究證實，肝癌組織中溶血磷脂膽堿酶水平升高，磷脂膽堿酶表達水平降低，其LPCAT1 mRNA相對表達量明顯升高，而對LPCAT1基因進行敲除后，可觀察到肝癌細胞的侵襲、增殖能力明顯下降。上述研究證實了LPCAT1在腫瘤細胞生長中的重要作用，其可能通過改變磷脂成分進而發揮促進腫瘤細胞增殖及侵襲的功能。本研究結果顯示，NSCLC患者癌旁組織LPCAT1 mRNA相對表達量低于腫瘤組織，NSCLC患者中TNM分期為Ⅲ期的患者相對表達量高于Ⅰ～Ⅱ期，有淋巴結轉移的患者相對表達量高于無淋巴轉移者，提示LPCAT1參與了NSCLC患者病情的進展及腫瘤細胞的轉移，表明LPCAT1能促進患者腫瘤細胞中二棕櫚酰卵磷脂及磷脂酰膽堿的合成及富集，對腫瘤細胞表面電荷產生明顯影響，改變膜電位水平，進而改變細胞膜的流動性及黏附性，促進腫瘤細胞的侵襲性轉移。本研究結果顯示，LPCAT1 mRNA高水平組NSCLC患者總生存率低于低水平組，提示LPCAT1 mRNA與NSCLC患者預后具有一定關系。國外研究顯示，磷脂酰膽堿中含有不飽和脂肪酸，在二酰基甘油酰基轉移酶的作用下，不飽和脂肪酸能夠轉化生成三酰甘油，后者作為機體細胞中脂質代謝最重要的細胞分子，可為腫瘤細胞的生長提供大量能量，進而達到促進腫瘤生長的作用。此外有研究證實，LPCAT1 mRNA的高水平表達可增強機體中血小板活化因子的合成，能夠參與腫瘤細胞的免疫逃逸過程，避免自然殺傷細胞對腫瘤細胞的殺滅作用，進而惡化患者預后。

綜上所述，NSCLC患者腫瘤組織中LPCAT1 mRNA相對表達量高于癌旁組織，且NSCLC患者臨床特征及預后與LPCAT1 mRNA相對表達量有關。