血清人附睪蛋白4水平與宮頸癌患者臨床特征的關系

穆建玲，姚昔艷

1北京中醫藥大學孫思邈醫院（銅川市中醫醫院）婦產科，陜西 銅川 727100

2涇陽縣醫院婦產科，陜西 咸陽 713700

宮頸癌發病率居全球女性惡性腫瘤第二位，嚴重威脅女性生命健康。高危人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）持續感染是主要病因，此外，人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染、口服避孕藥、初次性行為年齡過小和性伴侶過多均是宮頸癌的高危因素。宮頸癌病因的明確也極大促進了宮頸癌篩查方法的變革。目前，宮頸癌篩查方法已由形態學向分子生物學轉變，高危型HPV檢測和液基細胞學檢查是最常見的篩查手段。研究表明，組織篩查可有效提高早期診斷宮頸癌的準確度，而簡單、精準、高效、快速、易用的篩查方法可接受程度高，更受患者歡迎。人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）是近年來新發現的腫瘤標志物，特異性表達于宮頸、卵巢等上皮，用于宮頸癌、乳腺癌的診斷效果較好。因此，本研究探討宮頸癌患者血清HE4水平，及其與患者臨床特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年6月至2016年6月在北京中醫藥大學孫思邈醫院行宮頸癌篩查的患者。納入標準：①既往未接受過手術；②病歷資料完整；③既往沒有接受放化療、靶向治療和激光治療等。排除標準：①經活檢病理學檢查判定為非宮頸癌或非宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）；②臨床分期不明確；③合并其他腫瘤；④合并慢性宮頸炎。根據納入和排除標準，本研究共納入80例宮頸癌患者和38例CIN患者。宮頸癌患者年齡30～67歲，平均（47.92±5.16）歲；絕經49例，未絕經31例；病理類型：鱗狀細胞癌31例，腺癌32例，腺鱗癌17例；腫瘤直徑：＜5 cm 59例，≥5 cm 21例。CIN患者年齡31～66歲，平均（46.89±5.31）歲；絕經25例，未絕經13例。同期選取在北京中醫藥大學孫思邈醫院進行健康體檢的36例健康者，年齡29～65歲，平均（47.43±4.92）歲；絕經 22例，未絕經14例。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

所有受試者均在非生理期抽取清晨空腹靜脈血3 ml，宮頸癌和CIN患者抽血前2 h不服用任何藥物，健康對照組者在體檢當天抽取血液標本。三組受試者抽取的血液標本于4℃恒溫箱放置過夜，3000 r/min離心10 min分離血清，置于-20℃恒溫箱中保存，所有標本均未出現黃疸、溶血現象。采用酶聯免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測HE4水平：將待測樣本放置于室溫，輕搖均勻，待結晶完全溶解后再配置洗滌液。將20 ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400 ml工作濃度的洗滌液。取出已在室溫平衡1 h的樣本，使用蒸餾水或去離子水將標準品濃度依次稀釋為15、30、60、120、240、480 pmol/L等6個梯度，設置標準品孔和樣本孔，每一標準品孔各放入稀釋倍數不等的標準品50 μl。取10 μl待測樣本置于樣本孔，無需稀釋，空白孔不加。然后在標準品孔和樣本孔中每孔分別加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的抗體100 μl，37℃恒溫箱孵育60 min。然后棄殘余液體，用吸水紙干燥三孔，使用配置好的洗滌液加滿350 μl，等待1 min后棄掉，用吸水紙干燥三個孔，重復以上操作5次。操作完畢再往孔內滴加50 μl的底物顯色劑A、顯色劑B，遮光處理后置于37℃恒溫箱15 min。溫育后向3個孔內滴入50 μl的終止液，15 min內檢測450 nm處標準品孔、樣本孔及空白孔的光密度（optical density，OD）值。宮頸癌患者術后進行為期5年的隨訪，每3個月抽取靜脈血1次，隨訪時間截至2021年6月。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件對所有數據進行統計分析，呈偏態分布且方差不齊的計量資料以M（P，P）表示，兩組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗，多組間比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗；正態分布計量資料以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HE4水平的比較

宮頸癌患者血清HE4水平為268.91（248.34，302.65）pmol/L，明 顯 高 于CIN患 者 的51.34（44.48，57.48）pmol/L和 健 康 對 照 者 的52.82（44.62，57.33）pmol/L，差異均有統計學意義（U=4.154、4.658，P＜0.01）；CIN患者與健康對照者血清HE4水平比較，差異無統計學意義（U=0.321，P=0.631）。

2.2 不同臨床特征宮頸癌患者血清HE 4水平的比較

不同病理類型、腫瘤直徑宮頸癌患者血清HE4水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。年齡≥50歲、絕經、有淋巴結轉移、分化程度低、深肌層浸潤、國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期高的宮頸癌患者血清HE4水平更高，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征宮頸癌患者血清HE 4水平的比較（n=80）

2.3 不同預后情況宮頸癌患者血清HE 4水平的比較

對宮頸癌患者術后隨訪5年，病死69例（86.25%），生存11例（13.75%），病死患者血清HE4水平為341.82（259.81，440.51）pmol/L，明顯高于生存患者的252.46（238.61，297.25）pmol/L，差異有統計學意義（U=4.381，P=0.000）。

3 討論

研究顯示，近年來浸潤性宮頸腺癌及其變異型的發病率明顯升高，尤其在年輕的女性人群中。早期治療可降低病死率，明顯改善患者的預后。早期診斷對宮頸癌患者的治療和預后尤為重要，傳統診斷如陰道鏡檢查、細胞學檢測易受組織采集部位及檢驗人員的主觀影響，漏診、誤診難以避免。

近年來，隨著臨床對腫瘤標志物研究的不斷深入，其對腫瘤篩查、早期診斷、療效評估、預后及隨訪等方面的價值不斷凸顯，從生物化學角度來看，腫瘤標志物多為腫瘤細胞或某些發生非腫瘤性病理改變的細胞所產生和釋放的特殊化學物質，通常為糖類抗炎、酶或激素等。腫瘤標志物在健康者中水平較低，而在腫瘤或非腫瘤性疾病患者中水平較高，早期宮頸癌影像學檢查多無明顯征象，但血液中的腫瘤標志物可能會出現高表達，因此，臨床應高度重視并充分利用腫瘤標志物檢測來優化宮頸癌的治療。目前，多項研究指出，腫瘤標志物在腫瘤組織及癌旁正常組織中均有表達，既存在于腫瘤患者體液內，也可出現在健康者體液中，表達程度明顯不同但又具有交叉和界限無法分辨的特點。在免疫學、分子學等學科的不斷發展，多種宮頸癌相關的腫瘤標志物已被發現。鱗狀細胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCC-Ag）反映宮頸癌治療應答情況，SCC-Ag水平升高往往先于臨床癥狀，有助于早期診斷。常規檢測SCC-Ag對臨床癥狀體征發生前和疾病復發前的早期診斷有重要意義，但對宮頸腺癌和鱗腺癌的檢測價值不高。HE4作為一種新型的卵巢腫瘤標志物，其檢測價值已被臨床廣泛認可，與傳統的卵巢癌相關腫瘤標志物糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）相比，HE4的特異度（96.0%vs 84.0%）和靈敏度（90.0%vs 82.5%）更高，但二者聯合檢測可降低誤診率，CA125和HE4聯合應用可被廣泛推崇。

HE4是附睪蛋白的一種，空間結構主要由2個乳酸蛋白圍繞4個二硫鍵組成，主要負責編碼分子量較小的蛋白，可抑制絲氨酸的翻譯過程，參與抵抗外來微生物入侵，并對細胞周期有一定調控作用。既往研究證實，HE4在正常組織中低表達，而在移行細胞癌等上皮性卵巢組織中的表達明顯上調。本研究結果顯示，宮頸癌患者血清HE4水平明顯高于CIN患者和健康對照者。有研究顯示，健康對照者血清HE4水平會隨月經周期的波動而波動，絕經后的子宮內膜癌患者血清HE4水平相對更高。表明血清HE4水平直接受性激素的影響。而在妊娠和非妊娠患者中，雌二醇等孕激素的分泌會適當激活HE4蛋白的表達翻譯，這可能是絕經患者HE4高表達的原因。血清HE4水平可能與宮頸癌患者的病理類型、組織學分級和FIGO分期有關，這可能是因為HE4可促進血管內皮因子生成，引起基質金屬蛋白酶的翻譯和表達，病灶周圍血管生成，組織基質降解，刺激腫瘤細胞生長的同時增強其異質性和侵襲能力，更易發生腫瘤細胞轉移。

近年來，中國依據HE4檢測值建立了卵巢惡性腫瘤風險參考標準，在臨床檢驗的HE4參考值范圍中，若依據電化學發光檢測法，40～49歲健康女性的血清HE4水平為0～76.2 pmol/L，50～59歲為0～74.3 pmol/L，≥60歲為 0～104.0 pmol/L。本研究結果顯示，宮頸癌患者平均年齡（47.92±5.16）歲，血清HE4水平為268.91（248.34，302.65）pmol/L，提示盆腔腫塊惡性。HE4水平能準確進行卵巢癌風險分層，識別全部患有卵巢癌盆腔包塊患者，FIGO分期為Ⅳ期的患者HE4水平最高。對于腫瘤浸潤程度更深的患者，HE4特異度更高，水平也更高，可以用于腫瘤浸潤深度的鑒別診斷，HE4＞260 pmol/L時，提示腫瘤浸潤至深肌層，能有效降低誤診率。此外，27例合并淋巴結轉移的患者血清HE4水平為268.46（210.50，289.64）pmol/L，明顯高于未發生轉移者，因此可根據HE4水平變化判斷病情程度。簡而言之，年齡越大、絕經、淋巴結轉移、分化程度越低、深肌層浸潤的宮頸癌患者血清HE4水平更高，提示HE4對于宮頸癌的早期診斷、療效評估的靈敏度均較高。

術前研究預測性生化標志物是指導制訂個性化治療方案的理想途徑，鑒于術前基于血清檢測可能是侵入性最小、資源占用最少且最具成本效益的方法，因此作為分類工具的意義重大。研究顯示，由于FIGO分期固有的不可靠性，單一依據FIGO分期制訂治療方案將會影響治療效果、生活質量和預后。尤其是年輕的女性群體中，多數患者強烈要求保留其生育能力，增加了治療和隨訪護理的難度。因此，除依據FIGO分期外，將血清HE4列為分類工具之一有助于醫師術后指導治療，降低患者的并發癥發生率和病死率，改善治療效果。本研究結果顯示，術后5年病死患者的中位HE4水平達341.82 pmol/L，明顯高于生存患者，提示在卵巢癌預后評估方面，HE4水平高的患者轉歸差，表明HE4對患者的預后同樣具有預測價值。

綜上所述，HE4在宮頸癌患者中水平較高，年齡越大、絕經、淋巴結轉移、分化程度越低、深肌層浸潤的宮頸癌患者血清HE4水平更高，且病死患者高于生存者，檢測其水平變化，可以指導診斷、判斷預后。