PTEN和KDR及Beclin1在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床病理意義

李昱，葛陽(yáng)清

（湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬岳陽(yáng)醫(yī)院，岳陽(yáng)市二醫(yī)院婦科，湖南 岳陽(yáng) 414000）

宮頸癌是一種十分常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，在全世界女性惡性腫瘤中位于第2 位，且近年來(lái)，宮頸的發(fā)病年齡呈年輕化趨勢(shì)，發(fā)病率和死亡率也有逐漸升高趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅女性身體健康[1]。由正常的宮頸組織發(fā)展為宮頸上皮內(nèi)瘤變至為宮頸癌的過(guò)程中，多基因、多因素起協(xié)同作用。為給診療宮頸癌提供臨床依據(jù)，本研究收集宮頸癌標(biāo)本85份、正常宮頸組織標(biāo)本30份，并采用免疫組化法分別對(duì)癌變標(biāo)本、正常組織標(biāo)本中的PTEN、KDR、Beclin1 表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，分析與宮頸癌臨床病理的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集2013年6月至2015年6月本院住院手術(shù)或者門(mén)診活檢的病理標(biāo)本共115份，其中宮頸癌標(biāo)本85份、正常宮頸組織30 份。宮頸癌患者年齡23～73 歲，平均（43.18±7.93）歲；宮頸組織正常者年齡24～75 歲，平均（45.23±8.12）歲。宮頸癌中鱗癌63例，腺癌22例。臨床分期按照FIGO分期，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為17例、43例、19 例、6 例。30 例宮頸組織正常者經(jīng)病理檢查確診為子宮肌瘤。

1.2 檢測(cè)方法 兔抗人PTEN單抗、鼠抗人KDP單抗、兔抗人Beclin1 多抗，試劑采購(gòu)于武漢金開(kāi)瑞生物工程有限公司，于4 ℃冰箱保存，工作濃度為1∶75。使用免疫組化SP法，離體組織保存于10%福爾馬林，石蠟包埋，組織薄層切片，使用二甲苯進(jìn)行脫蠟，再進(jìn)行梯度乙醇脫水，免疫組化染色過(guò)程參照說(shuō)明書(shū)，DAB顯色，使用蘇木精再次染色，使用中性樹(shù)膠封片，PBS 代替一抗當(dāng)作陰性對(duì)照，生物公司提供的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 免疫組化結(jié)果判定 使用半定量積分法對(duì)表達(dá)情況進(jìn)行判定，從染色強(qiáng)度、陽(yáng)性細(xì)胞占比進(jìn)行計(jì)分判定：①染色強(qiáng)度：未著色、淺著色、重度著色、深著色分別計(jì)為0 分、1 分、2分、3分；②陽(yáng)性細(xì)胞百分比：隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡（400×）視野，在每個(gè)視野內(nèi)計(jì)數(shù)細(xì)胞100個(gè)，計(jì)算平均陽(yáng)性百分比，陽(yáng)性細(xì)胞占比＜5%、5%～24%、25%～49%、≥50%分別計(jì)為0 分、1分、2分、3分。依據(jù)以上兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)之和將PTEN、KDR、Beclin1的檢測(cè)結(jié)果劃分為4 級(jí)：陰性（-）為0 分，弱陽(yáng)性（+）為1～2分，陽(yáng)性（++）為3～4分，強(qiáng)陽(yáng)性（+++）為5～6分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN、KDR、Beclin1的表達(dá) PTEN在癌變組織、正常宮頸組織的陽(yáng)性表達(dá)率分別為37.65%（32/85）、100%（30/30），KDR在癌變組織、正常宮頸組織的陽(yáng)性表達(dá)率分別為68.24%（58/85）、10.00%（3/30），Beclin1 在癌變組織、正常宮頸組織的陽(yáng)性表達(dá)率分別為29.41%（25/85）、73.33%（22/30）；PTEN、Beclin1在癌變組織的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常宮頸組織（P＜0.05），KDR 癌變組織的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常宮頸組織（P＜0.05）。

2.2 PTEN、KDR、Beclin1 在宮頸癌中的表達(dá)和臨床病理的關(guān)系 PTEN、KDR、Beclin1 的表達(dá)水平與癌變組織的分化程度、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與年齡、臨床分期、組織學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)，見(jiàn)表1～3。

表1 PTEN的表達(dá)水平和臨床病理的關(guān)系Table 1 The expression of PTEN and its relationship with clinicopathology

表2 KDR的表達(dá)水平和臨床病理的關(guān)系Table 2 The expression of KDR and its relationship with clinicopathology

表3 Beclin1的表達(dá)水平和臨床病理的關(guān)系Table 3 The expression of Beclin1 and its relationship with clinicopathology

3 討論

PTEN是人類(lèi)最早發(fā)現(xiàn)的既有脂質(zhì)磷酸酶活性又有蛋白磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN 廣泛表達(dá)于人體的正常組織，該基因的缺失、突變、低表達(dá)和惡性腫瘤的預(yù)后、發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Sharad Purohit 等[2]對(duì)宮頸癌的臨床病理和PTEN的關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)宮頸癌是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌變浸潤(rùn)程度、組織分化程度和PTEN蛋白的表達(dá)關(guān)系密切，表明PTEN 在宮頸癌病變的進(jìn)展中發(fā)揮一定的作用，判定腫瘤的進(jìn)展情況及惡性程度的作用。李海平等[3]也進(jìn)行類(lèi)似的研究，結(jié)果顯示，不同臨床分期的宮頸癌和PTEN 的異常甲基化、失活有相關(guān)性。本研究中，免疫組化法檢測(cè)的PTEN陽(yáng)性呈棕黃色顆粒狀，主要存在于細(xì)胞膜或者細(xì)胞漿；其在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為37.65%（32/85）、100%（30/30），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在臨床病理中，組織分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移和PTEN的陽(yáng)性表達(dá)有關(guān)（P＜0.05）。表明PTEN 蛋白表達(dá)水平的降低和發(fā)生宮頸癌密切相關(guān)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸癌的分化過(guò)程中發(fā)揮一定的作用。

KDR是血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體家族中的其中之一，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子發(fā)揮其生物活性促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖主要通過(guò)與KDR的結(jié)合實(shí)現(xiàn)[4]。KDR的控制基因位點(diǎn)在人染色體4q31.2～q32，全長(zhǎng)含有氨基酸1 356 個(gè)[5]，能誘導(dǎo)血管的生成、提高血管的通透性[6]。近年來(lái)，多項(xiàng)研究[7-9]顯示子宮內(nèi)膜癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤的病程進(jìn)展、預(yù)后和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其相應(yīng)受體密切相關(guān)。有報(bào)道[10-11]顯示在部分女性生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤、甲狀腺癌的細(xì)胞內(nèi)均能檢測(cè)出KDR的表達(dá)。在宮頸癌中也能檢測(cè)出KDR 的表達(dá)，但是其表達(dá)意義仍無(wú)一致結(jié)論[12]。本研究中，KDR在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為68.24%（58/85）、10.00%（3/30），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在臨床病理中，組織分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移和KDR的陽(yáng)性表達(dá)有關(guān)（P＜0.05）。表明PTEN蛋白表達(dá)水平的升高會(huì)增加淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移、宮頸癌低分化的發(fā)生率。

Beclin1是一種正向調(diào)控自噬的基因，能調(diào)節(jié)細(xì)胞的自噬過(guò)程，作為一種抑癌基因在腫瘤的病情進(jìn)展中發(fā)揮重要的作用[13]。Beclin1抑制腫瘤主要通過(guò)如下途徑：防止和癌相關(guān)的基因發(fā)生突變；對(duì)腫瘤細(xì)胞有誘導(dǎo)作用，使其發(fā)生自噬性凋亡；對(duì)腫瘤組織的血管生成有抑制作用[14]。David等[15]使用宮頸癌細(xì)胞在體外進(jìn)行腸轉(zhuǎn)移培養(yǎng)，結(jié)果顯示Beclin1能抑制轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Caski 細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及入侵，這和Beclin1對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用相關(guān)。另有研究[16]顯示，子宮頸癌的病情進(jìn)展和Beclin1 的表達(dá)水平降低有關(guān)。本研究中，Beclin1 在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為29.41%（25/85）、73.33%（22/30），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在臨床病理中，組織分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移和Beclin1 的陽(yáng)性表達(dá)有關(guān)（P＜0.05）。表明Beclin1 蛋白表達(dá)水平的降低使淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移、宮頸癌出現(xiàn)低分化的的概率增大。

綜上所述，在宮頸癌組織中PTEN、Beclin1 的表達(dá)水平明顯低于正常宮頸組織（P＜0.05），而KDR 的表達(dá)水平則明顯高于正常宮頸組織（P＜0.05）。在低、中分化的癌細(xì)胞中，PTEN、Beclin1 的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于高分化的癌細(xì)胞，而KDR 的陽(yáng)性表達(dá)率則明顯高于高分化的癌細(xì)胞（P＜0.05），表明PTEN、Beclin1的低表達(dá)、KDR的高表達(dá)會(huì)對(duì)腫瘤的惡性程度升高有促進(jìn)作用；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞中PTEN、Beclin1的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于沒(méi)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞，而KDR 的陽(yáng)性表達(dá)率則明顯高于沒(méi)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞（P＜0.05），表明PTEN、Beclin1的低表達(dá)、KDR的高表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。