血清DJ-1、Dickkopf-2蛋白表達(dá)在卵巢癌的表達(dá)及其意義

陸志紅，孔靈利，蔡衛(wèi)梅，康小紅

（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤科，河南 衛(wèi)輝453100）

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)腫瘤死亡率最高的惡性腫瘤，其中以上皮性卵巢癌最為常見(jiàn)，約占所有卵巢癌的90%以上[1-19]。卵巢癌起病隱匿且發(fā)展迅速，臨床確診時(shí)已多為晚期，錯(cuò)失了最佳治療時(shí)機(jī)。故而，探尋卵巢癌早期診斷及相關(guān)靶點(diǎn)，對(duì)提高治療效果和改善預(yù)后均具有重要意義。Dickkopf-2屬于DKKs家族，可特異性識(shí)別LDLR跨膜區(qū)結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，進(jìn)而促進(jìn)蛋白質(zhì)間的相互作用。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)DKK-2在腫瘤細(xì)胞中具有多重作用，可作為Wnt蛋白拮抗劑于腫瘤中表達(dá)缺失，可能與腫瘤血管生成和腫瘤細(xì)胞的侵襲具有密切相關(guān)性。DJ-1作為腫瘤特異性蛋白,已被證實(shí)與多種腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及發(fā)展可能存在密切相關(guān)性，但關(guān)于卵巢癌的表達(dá)和相關(guān)意義研究資料較少。故而，本研究探討了血清DJ-1蛋白、Dickkopf-2蛋白在卵巢癌患者中的表達(dá)及其意義，報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選取2015年3月-2018年5月我院經(jīng)病理學(xué)檢查確診的卵巢癌患者82例（卵巢癌組）、60例健康志愿者作為對(duì)照組。卵巢癌組，年齡37～63歲，平均53.0±8.6歲；國(guó)際婦產(chǎn)聯(lián)盟（FIGO）分期：Ⅰ期22例、Ⅱ期25例、Ⅲ期29例、Ⅳ期6例；組織學(xué)分化：高分化21例、中分化33例、低分化28例；病理學(xué)類(lèi)型：漿液性癌43例、黏液性癌39例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例。對(duì)照組,年齡35～65歲，平均51.8±10.0歲。兩組研究對(duì)象的年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) 診斷標(biāo)準(zhǔn)：卵巢癌患者的診斷參考的《卵巢惡性腫瘤診斷與治療指南》中的標(biāo)準(zhǔn)；納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)；⑵獲取組織學(xué)標(biāo)本前患者未接受放化療或者免疫學(xué)治療；⑶經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為上皮性卵巢癌；⑷本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理規(guī)定。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并其他部位的惡性腫瘤；⑵病理診斷不明確。⑶放化療病史；⑷合并嚴(yán)重的其他系統(tǒng)疾病。

1.3 血清DJ-1蛋白、Dickkopf-2蛋白檢測(cè) 取所有患者空腹靜脈血，3000r/min離心10min后分離血清，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清DJ-1蛋白、Dickkopf-2蛋白水平,相關(guān)試劑盒均購(gòu)于南京建成生物研究所,實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本研究中所有數(shù)據(jù)的分析均采用SPSS21.0版本,年齡、血清DJ-1蛋白、Dickkopf-2蛋白采用±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌組和對(duì)照組的血清DJ-1蛋白、Dickkopf-2蛋白對(duì)比 卵巢癌組患者的血清DJ-1蛋白高于對(duì)照組（P<0.05），卵巢癌組患者的血清Dickkopf-2蛋白低于對(duì)照組（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 卵巢癌組和對(duì)照組的血清DJ-1蛋白、Dickkopf-2蛋白對(duì)比（±s）

表1 卵巢癌組和對(duì)照組的血清DJ-1蛋白、Dickkopf-2蛋白對(duì)比（±s）

組別 n卵巢癌組對(duì)照組t值P值82 60 DJ-1蛋白（μg/L）Dickkopf-2蛋白（pg/ml）12.33±4.18 4.39±1.40 14.133 0.000 433.9±155.8 1732.6±549.8-20.327 0.000

2.2 卵巢癌組和對(duì)照組的血清DJ-1蛋白在不同病理學(xué)特征患者中的表達(dá)差異 不同F(xiàn)IGO分期、不同組織學(xué)分化程度、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組患者的血清DJ-1蛋白組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 卵巢癌組和對(duì)照組的血清DJ-1蛋白在不同病理學(xué)特征患者中的表達(dá)差異（±s）

表2 卵巢癌組和對(duì)照組的血清DJ-1蛋白在不同病理學(xué)特征患者中的表達(dá)差異（±s）

因素 n DJ-1蛋白（μg/L） t值P值FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期組織學(xué)分化高+中低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是 否-5.880 0.000 47 35 10.28±3.74 15.39±4.09-4.610 0.000 54 28 11.41±4.11 15.73±3.85 4.614 0.000 43 39 15.52±3.95 11.60±3.72病理學(xué)類(lèi)型漿液性黏液性0.441 0.660 64 18 12.52±4.00 12.05±3.98

不同組織學(xué)分化程度的的卵巢癌組患者的血清Dickkopf-2蛋白組間比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

卵巢腫瘤屬于女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤，5年生存率僅為20%~30%左右，死亡率高居?jì)D科腫瘤第1位,已成為影響婦女健康和威脅生命的主要瘤種。卵巢癌臨床癥狀隱匿且缺少早期特異性診斷方法,絕大部分患者在化療和手術(shù)后仍可出現(xiàn)疾病復(fù)發(fā)甚至進(jìn)展,因而卵巢癌的早期診斷和預(yù)后評(píng)估一直是臨床關(guān)注的重點(diǎn)。

表3 卵巢癌組和對(duì)照組的血清Dickkopf-2蛋白在不同病理學(xué)特征患者中的表達(dá)差異（±s）

表3 卵巢癌組和對(duì)照組的血清Dickkopf-2蛋白在不同病理學(xué)特征患者中的表達(dá)差異（±s）

因素 n FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期組織學(xué)分化高+中低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是 否Dickkopf-2蛋白（pg/ml） t值-0.502 P值0.617 47 35 427.0±145.6 443.1±140.8-2.407 0.018 54 28 404.1±151.2 485.7±133.8 0.810 0.420 43 39 441.8±129.8 417.0±147.5病理學(xué)類(lèi)型漿液性黏液性0.855 0.395 64 18 445.9±152.7 411.7±139.6

腫瘤標(biāo)志物屬于腫瘤組織生成的化學(xué)類(lèi)物質(zhì)，能夠在一定程度上反映腫瘤的性質(zhì)和存在，一個(gè)優(yōu)良的腫瘤標(biāo)志物需要具有靈敏性高、特異性好及濃度水平可反映腫瘤分期、大小及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示卵巢癌組患者的血清DJ-1蛋白高于對(duì)照組,卵巢癌組患者的血清Dickkopf-2蛋白低于對(duì)照組。上述結(jié)果說(shuō)明卵巢癌患者存在血清DJ-1蛋白的高表達(dá)及Dickkopf-2蛋白的低表達(dá)。DJ-1基因?qū)儆谛滦徒z裂原依賴性癌基因，廣泛表達(dá)于機(jī)體各組織，研究發(fā)現(xiàn)DJ-1基因可作用于Akt-mediated細(xì)胞而促進(jìn)腫瘤形成，其它文獻(xiàn)亦提示乳腺癌及膽管癌等惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了DJ-1蛋白的高表達(dá),乳腺癌患者外周血中并檢測(cè)出了DJ-1抗體，提示DJ-1蛋白屬于潛在的腫瘤抗原標(biāo)記物并認(rèn)為DJ-1蛋白可能是多種惡性腫瘤的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Wnt信號(hào)通路具有介導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，可促進(jìn)正常胚胎細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)育。最新的研究發(fā)現(xiàn)DKK家族能夠通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖及分化，進(jìn)而介導(dǎo)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。相關(guān)文獻(xiàn)提示DKK-2蛋白在卵巢癌組織中存在表達(dá)缺失現(xiàn)象，但具體的作用機(jī)制和功能尚不完全明確，還有待進(jìn)一步研究探討。

DJ-1是PARK7基因編碼的屬于肽酶C56的蛋白質(zhì)家族的一個(gè)成員,可以作為一個(gè)積極的雄激素受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子,也可以用作氧化還原敏感的分子伴侶，氧化應(yīng)激傳感器。進(jìn)一步對(duì)卵巢癌組和對(duì)照組的血清DJ-1蛋白在不同病理學(xué)特征患者中的表達(dá)差異比較發(fā)現(xiàn)不同F(xiàn)IGO分期、不同組織學(xué)分化程度、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組患者的血清DJ-1蛋白組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該結(jié)果提示DJ-1不僅可參與卵巢癌的發(fā)展過(guò)程，與卵巢癌的轉(zhuǎn)移及侵襲也存在密切相關(guān)性。相關(guān)研究已發(fā)現(xiàn)DJ-1有助神經(jīng)元在氧化應(yīng)激下存活下來(lái)且具有分子伴侶的作用，阻止蛋白（如作為對(duì)細(xì)胞應(yīng)激產(chǎn)生的α-突觸核蛋白），但DJ-1基礎(chǔ)分子功能及在腫瘤的尚不明晰。

不同組織學(xué)分化程度的的卵巢癌組患者的血清Dickkopf-2蛋白組間比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果說(shuō)明Dickkopf-2蛋白在卵巢癌患者中低表達(dá)可能與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。現(xiàn)階段關(guān)于DKK-2蛋白在卵巢癌的具體作用機(jī)制尚不明晰,文獻(xiàn)提示DKK家族成員(Dickkopf-2蛋白等)能夠通過(guò)Kremen受體及Wnt信號(hào)通路受體結(jié)合LRP受體,進(jìn)而抑制Wnt蛋白活性；另一方面,Dickkopf-2蛋白可阻斷TCF/LCF轉(zhuǎn)錄因子與β-連環(huán)蛋白結(jié)合，促進(jìn)β-連環(huán)蛋白水解及磷酸化，進(jìn)而抑制Wnt信號(hào)通路。

綜上所述，血清DJ-1蛋白在卵巢癌患者中高表達(dá)，Dickkopf-2蛋白在卵巢癌患者中低表達(dá)，可能與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。