胃癌組織中Gadd45a、Id2表達水平變化的相關性及其意義

劉亞娟

（濟源市人民醫院，河南 濟源459000）

胃癌的病情進展,能夠導致患者病死率及生存預后指標的惡化[1]。長期的臨床觀察研究發現,胃癌患者的5年生存率不足45%,不同措施治療后胃癌患者的中位生存時間不足28個月[2]。

基礎生物學方面的理論認為,分子機制的改變在促進胃癌的病情進展過程中發揮了重要的作用。DNA損傷、DNA錯配修復能力的改變或者DNA轉錄復制活性的異常,均能夠促進消化系統惡性腫瘤的發生。生長抑制DNA損傷基因（Cadd4 5a）能夠通過促進DNA的損傷，加劇DNA基因突變的風險，提高癌基因突變及癌基因轉錄的風險，進而促進惡性腫瘤早期的發生[3]；DNA結合抑制因子2（Id2）能夠通過提高DNA結合蛋白的輔助速度，促進染色體組蛋白的擴增及分裂，進而促進腫瘤細胞的持續性自我增殖過程[4]。部分研究者探討了Gadd45a、Id2的表達及其與婦科惡性腫瘤或者鼻咽惡性腫瘤的關系，認為Gadd45a、Id2d的表達上升可以顯著促進相關惡性腫瘤的病情進展[5]，但在胃癌患者中的分析研究不足。為了揭示Gadd4 5a、Id2的表達及其與胃癌的關系,從而為臨床上胃癌的診療提供一定的參考，本次研究選取2015年6月至2018年6月我院收集的80例胃癌組織標本及其對應的癌旁組標本80例，探討了Gadd45a、Id2的表達及其與胃癌的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年6月至2018年6月我院收集的80例胃癌組織標本及其對應的癌旁組標本80例。

患者年齡44～75歲,平均56.2±9.6歲,男47例、女33例，TNM分期標準：Ⅰ期10例、Ⅱ期28例、Ⅲ期35例、Ⅳ期7例；腫瘤分化程度：高分化20例、中分化20例、低分化40例；發生淋巴結轉移46例；病灶最大徑≥3cm41例。

納入標準：⑴患者年齡18～75歲；⑵術前超聲胃鏡及病理學活組織檢測初步診斷；⑶病理標本均來源于手術后組織、經病理學檢查確診；⑷獲取患者病理學標本前,患者未接受放化療、免疫治療；⑸本研究獲得醫學倫理委員會的批準,納入對象的各種資料完整。

排除標準：⑴轉移性胃癌；⑵伴有其他部位惡性腫瘤；⑶患者的病歷資料、病理學檢查結果缺失。

1.2 采用免疫酶細胞化學技術進行Gadd45a、Id2的檢測 石蠟包埋,連續性切片厚度3um，60℃烤片60min,常規脫水后,采用EDTA進行抗原修復,加入10ul蒸餾水，加入10%過氧化氫5ul，室溫下孵育30min,磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次*3min，加入Gadd45a、Id2的單克隆抗體（1：1000購自羅氏檢測公司），37℃孵育60min，PBS洗滌3次*3min，加入HRP標記的Gadd45a、Id2二抗（1：2000購自羅氏公司）,37℃孵育20min，PBS洗滌3次*3min，加入DAB后，PBS沖洗和復染，脫水后在顯微鏡下進行觀察。

1.3 判斷標準 免疫組化結果判定：Gadd45a蛋白的陽性著色表達于細胞核及細胞漿、Id2蛋白主要表達與細胞核及細胞質，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數51%～75%為3分、陽性細胞數所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≧3分為陽性。

2 結果

2.1 兩組標本的Gadd45a、Id2蛋白表達的陽性表達率比較 胃癌組織中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表達陽性表達率分別為63.75%、67.50%均顯著的高于癌旁組織的13.75%、16.25%,組間比較差異均具有統計學意義（P＜0.05）；見表1。

2.2 胃癌組織中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表達相關性 胃癌組織中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表達呈顯著的相關性（Spearman系相關系數=0.754，P＜0.05）；見表2。

表2 相關性分析

2.3 胃癌組織中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表達與病理學特征的關系 在不同TNM分期、不同分化程度、是否具有淋巴結轉移的胃癌組織中的Gadd4 5a蛋白表達差異具有統計學意義(P＜0.05)；見表3。在不同TNM分期、不同分化程度、不同病灶直徑大小、是否具有淋巴結轉移的胃癌組織中的Id2蛋白表達差異具有統計學意義(P＜0.05)；見表4。

3 討論

在具有相關家族性腫瘤病史或者長期精神應激、不良飲食習慣的人群中，胃癌的發生風險均明顯上升。長期不同的病理性因素，能夠通過調控胃黏膜上皮細胞的核DNA轉錄，提高癌細胞的早期增殖及分化障礙，進而促進胃癌整體發病率的上升[6]。現階段臨床上缺乏對于胃癌患者篩查的血清學指標，雖然癌胚抗原（CEA）或者糖鏈125抗原（CA125）等能夠在消化道惡性腫瘤的發生過程中發揮一定的評估作用，但其評估的靈敏度較低，特異度不足45%[7,8]。而本次研究對于胃癌患者病灶組織中Gadd45a、Id2的表達分析研究，能夠在揭示胃癌患者臨床病理特征進展機理的同時,為臨床上胃癌的血清學診斷或者病情評估提供預后參考指標。

表4 胃癌組織中的Id2蛋白表達與病理學特征的關系

基因水平或者分子水平的改變,是促進惡性腫瘤發生的重要環節，其能夠通過影響到DNA的轉錄、翻譯及下游信號通路調控，進而促進惡性腫瘤的發生。Gadd45a是DNA損傷相關因子，其能夠通過泛素化的修飾作用，促進DNA堿基及嘧啶結構的破壞，提高基因點突變及位移突變的發生風險。基礎方面的研究認為，Gadd45a的表達上升,還能夠通過對于基因的異常甲基化的修飾,進而導致基因表達產物特性的改變,從而影響到胃癌細胞的生物學特征；Id2是染色體組蛋白的結合抑制因子，其對于組蛋白的分裂作用,能夠提高癌細胞核結構的復制速度,促進癌細胞持續性分裂和自我增殖過程[9]。部分研究者探討了Gadd45a的表達與胃癌的關系,認為在中晚期胃癌患者中,Gadd45a的表達濃度明顯上升[10]，但缺乏對于Id2的表達與胃癌的關系研究。

通過免疫組化技術探討了Gadd45a、Id2蛋白的表達與胃癌的關系,發現在胃癌病灶組織中,Gad d45a、Id2蛋白的表達陽性率均明顯上升,高于癌旁組織，統計學差異較為明顯，提示了Gadd45a、Id2蛋白的高表達均能夠影響到胃癌的發生發展過程。分析其基礎方面的原因,考慮由于Gadd45a、Id2的下列幾個方面的病理性作用有關[11-13]：⑴Gadd4 5a的表達上升,不僅能夠導致癌基因突變風險的上升，同時還能夠增加基因調控穩定性，導致癌細胞凋亡-增殖平衡的打破，影響到癌細胞周期的調控平衡；⑵Id2的表達，不僅能夠影響到癌細胞DNA的組蛋白的復制,同時還能夠提高癌細胞內染色體的分裂速度，提高癌基因的轉錄活性，進而促進胃癌的發生。李亞卓等[14]研究者也發現，在胃癌病灶組織中，Id2蛋白的表達陽性率可平均上升40%以上,同時在具有明顯的惡病質或者腫瘤晚期表現的患者中,Id2蛋白的表達水平可進一步上升。在探討Gadd45a、Id2的內在關系過程中,發現Gadd45a、Id2的表達具有一定的相關關系，推測二者在促進胃癌的病情進展過程中可能發揮了一定的協同刺激作用,但具體的機制仍然需要后續研究的進一步探討。Gadd45a在臨床分期較高、發生了淋巴結轉移或者癌細胞分化程度較低的患者中表達陽性率較高，明顯高于對應的臨床病理分期較早組，統計學差異顯著,提示了Gadd45a的表達能夠顯著影響到胃癌的臨床病理特征的進展,這主要考慮由于Gadd45a的表達,能夠提高癌細胞的浸潤深度,提高癌細胞對于淋巴結組織的粘附能力,進而促進胃癌臨床病理特征的進展；在不同TNM分期較晚、分化程度差、病灶直徑較大、具有淋巴結轉移的患者中,Id2的表達陽性率較高,提示Id2的表達與胃癌的臨床病理特征同樣相關,分析其原因，主要由于Id2在影響胃癌細胞生物學特征的同時,還能夠提高癌細胞的持續性擴增能力,從而導致腫瘤病灶直徑的增大。

在胃癌病灶組織中，Gadd45a、Id2蛋白的表達陽性率均明顯上升,二者的表達具有一定內在關系。同時Gadd45a、Id2的表達還與胃癌患者臨床病理特征密切相關。