康艾注射液聯(lián)合同步放化療對(duì)中晚期子宮頸癌患者細(xì)胞凋亡相關(guān)因子及免疫狀態(tài)的影響

劉暢

【關(guān)鍵詞】 子宮頸癌 康艾注射液 凋亡 免疫

[Abstract] Objective： To investigate the effects of Kangai Injection combined with concurrent chemoradiotherapy on apoptosis related factors and immune status in patients with advanced cervical cancer. Method： A total of ninety six patients with advanced cervical cancer diagnosed and treated in our hospital from March 2017 to December 2020 were selected， according to the random number table method， the patients were divided into simple concurrent chemoradiotherapy group and combined group， 48 cases in each group. Simple concurrent chemoradiotherapy group was only treated with concurrent chemoradiotherapy group， and the combination group was treated with Kangai Injection on the basis of simple concurrent chemoradiotherapy group. The levels of apoptosis-related factors and immune cells in peripheral blood before and after treatment were measured respectively. Result： After treatment， the levels of apoptosis-related factors PDCD5， Bax and P53 in both groups were significantly increased， and the levels of PDCD5， Bax and P53 in the combined group were higher than those in the simple concurrent chemoradiotherapy group （P<0.05）. After treatment， CD3+， CD4+， interferon γ， interleukin-2 （IL-2） in the simple concurrent chemoradiotherapy group were lower than those before treatment， and CD8+ was higher than that before treatment （P<0.05）， while the levels of CD3+， CD4+， interferon γ and IL-2 in the combined group were higher than those before treatment， and CD8+ was lower than that before treatment （P<0.05）. After treatment， CD3+， CD4+， interferon γ and IL-2 in the combined group were higher than those in the simple concurrent chemoradiotherapy group， while CD8+ was lower than that in the simple concurrent chemoradiotherapy group （P<0.05）. Conclusion： Kangai Injection combined with concurrent chemoradiotherapy in the treatment of advanced cervical cancer can promote the apoptosis of tumor cells and improve the anti-tumor immune response.

[Key words] Cervical cancer Kangai Injection Apoptosis Immune

First-author’s address： Anshan Cancer Hospital， Anshan 114036， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.26.010

子宮頸癌是婦科最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)出現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)，高發(fā)年齡段為35～44歲，嚴(yán)重威脅女性健康，研究報(bào)道2018年全世界新發(fā)子宮頸癌病例將近57萬(wàn)例，死亡病例近31萬(wàn)例，患者總體5年生存率約為68%[1-3]。手術(shù)、放療和化療為主的綜合治療是子宮頸癌的主要治療手段，對(duì)于早期（Ⅰ～ⅡA期）的患者，首選手術(shù)切除治療，對(duì)于中晚期（ⅡB期及以上），以同步放化療為主[4-5]。但同步放化療由于放化同時(shí)進(jìn)行，治療強(qiáng)度較大，目前存在較多難以避免的不良反應(yīng)，導(dǎo)致患者出現(xiàn)骨髓造血系統(tǒng)抑制、肝腎功能障礙、惡心嘔吐以及神經(jīng)系統(tǒng)等毒副作用。尤其是對(duì)患者免疫功能的抑制，存在造成腫瘤細(xì)胞免疫逃逸，使腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，影響患者的治療效果。近年來(lái)，中醫(yī)藥在減少放化療毒副反應(yīng)方面的應(yīng)用越來(lái)越多，其效果逐漸受到關(guān)注[6-9]。多項(xiàng)研究結(jié)果表明康艾注射液可改善人體免疫功能，促進(jìn)骨髓造血系統(tǒng)恢復(fù)[10-13]。袁順平等[14]研究證實(shí)，康艾注射液具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫的作用。但其在子宮頸癌中的應(yīng)用及機(jī)制研究仍然較少，因此本研究通過(guò)康艾注射液聯(lián)合同步放化療治療中晚期子宮頸癌患者，分析治療前后患者細(xì)胞凋亡相關(guān)因子及機(jī)體免疫功能的變化情況，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻性納入2017年3月-2020年12月于本院診治的經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為中晚期宮頸鱗癌的96例患者。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床及病理檢查診斷為中晚期（ⅡB期及以上）子宮頸鱗癌的患者;②預(yù)計(jì)生存期>6個(gè)月;③一般身體狀況較好，KPS評(píng)分>70分;④對(duì)化療藥物耐受，可耐受同步放化療。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝腎功能障礙;②合并其他部位腫瘤。按隨機(jī)數(shù)字表法將患者分成單純放化療組和聯(lián)合組，每組48例。患者及其家屬均已簽署知情同意書(shū)，且該研究已經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 單純同步放化療組采用順鉑（生產(chǎn)廠(chǎng)家：齊魯制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20023461，規(guī)格：20 mg/支），40 mg/m2，靜脈滴注，聯(lián)合多西他賽（生產(chǎn)廠(chǎng)家：深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20060127，規(guī)格：40 mg/支），80 mg/m2，靜脈滴注，1次/周，4周為一療程，共治療兩個(gè)療程，同步放療采用三維適形放射治療技術(shù)，靶區(qū)包括腫瘤病灶、宮旁組織、距離腫瘤病灶足夠長(zhǎng)的陰道邊緣、骶前淋巴結(jié)及其他高危淋巴結(jié)區(qū)，處方劑量約45 Gy/25 F，5次/周。

聯(lián)合組在此基礎(chǔ)上加用康艾注射液（生產(chǎn)廠(chǎng)家：長(zhǎng)白山制藥股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z20026868，規(guī)格：10 mL/支）治療，500 mL 0.9%氯化鈉溶液+40 mL康艾注射液，1次/d，靜脈滴注，持續(xù)至化療結(jié)束。治療過(guò)程中每周復(fù)查血常規(guī)、肝腎功能、生化等，密切監(jiān)測(cè)放化療毒副反應(yīng)，如出現(xiàn)需及時(shí)對(duì)癥處理。

1.3 觀察指標(biāo) （1）比較兩組治療前后的凋亡相關(guān)因子的表達(dá)情況。分別于治療前及治療后收集患者早晨空腹肘靜脈血5 mL，2 500 r/min離心10 min，分層后，移液槍吸取上清液，采用Elisa試劑盒進(jìn)行操作，檢測(cè)PDCD5、Bax、P53的表達(dá)量。（2）比較兩組治療前后的外周血免疫細(xì)胞水平。采集患者2 mL空腹肘靜脈血，采用EDTA抗凝管，分別孵育熒光標(biāo)記的CD3、CD4、CD8抗體，最后通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定患者抗凝血中CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞數(shù)量。（3）比較兩組治療前后的免疫相關(guān)細(xì)胞因子水平。于治療前后收集患者早晨空腹肘靜脈血2 mL，離心后分離血清，通過(guò)放射免疫法檢測(cè)γ干擾素、白細(xì)胞介素-2（IL-2）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 26.0軟件，對(duì)于符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用M（P25，P75）表示，比較采用秩和檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 聯(lián)合組：年齡35～75歲，平均（50±11）歲;ⅡB期15例，Ⅲ期21例，Ⅳ期12例。單純同步放化療組：年齡36～73歲，平均（51±12）歲;ⅡB期17例，Ⅲ期18例，Ⅳ期13例。兩組年齡及病理分期比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組凋亡相關(guān)因子比較 聯(lián)合組與單純同步放化療組治療前的PDCD5、Bax、P53表達(dá)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療后，兩組PDCD5、Bax、P53的表達(dá)較治療前均升高，聯(lián)合組治療后的PDCD5、Bax、P53升高更為明顯，均高于單純同步放化療組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.218、8.435、5.574，P<0.001）。見(jiàn)表1。

2.3 兩組免疫細(xì)胞比較 聯(lián)合組與單純同步放化療組治療前的CD3+、CD4+、CD8+水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療后，聯(lián)合組CD3+、CD4+水平均較治療前升高，CD8+較治療前降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;治療后，單純同步放化療組CD3+、CD4+水平均較治療前降低，CD8+水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;治療后，聯(lián)合組CD3+、CD4+水平均高于單純同步放化療組，CD8+水平低于單純同步放化療組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.4 兩組免疫相關(guān)細(xì)胞因子比較 聯(lián)合組與單純同步放化療組治療前的γ干擾素、IL-2比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療后，聯(lián)合組γ干擾素、IL-2均較治療前升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;治療后，單純同步放化療組γ干擾素、IL-2均較治療前降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;治療后，聯(lián)合組γ干擾素、IL-2水平均較單純同步放化療組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

子宮頸癌是嚴(yán)重危害中老年女性健康的惡性腫瘤，近年來(lái)出現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)，發(fā)病率逐年上升，所有患者中約80%都需要進(jìn)行外照射治療或放化同步治療，其療效較為肯定，但其造成的骨髓造血系統(tǒng)的損傷，機(jī)體免疫功能的抑制仍然不可忽視[15-17]。康艾注射液是一種具有益氣扶正，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)患者免疫功能作用的中成藥，其主要成分為人參、黃芪和苦參。研究報(bào)道其對(duì)化療后惡心嘔吐等消化道癥狀的預(yù)防亦起作用，其在臨床放化療不良反應(yīng)預(yù)防中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，療效也得到了肯定[18]。

本研究通過(guò)將中晚期子宮頸癌患者隨機(jī)分為單純同步放化療組和聯(lián)合組，分別測(cè)定治療前后外周血中凋亡相關(guān)因子及免疫細(xì)胞水平。發(fā)現(xiàn)治療后兩組凋亡相關(guān)因子PDCD5、Bax、P53的表達(dá)量均顯著升高，但是聯(lián)合組的升高程度較單純組更為明顯，提示康艾注射液可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，提高治療效果。莫宗權(quán)等[19]通過(guò)使用生物信息學(xué)方法分析了康艾注射液殺傷腫瘤細(xì)胞的分子機(jī)制，其結(jié)果表明康艾的作用靶點(diǎn)主要為COX1/2、熱休克蛋白90等，其中的苦參堿、黃酮、人參皂苷組分可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖能力、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)等功能，從而重塑腫瘤局部微環(huán)境，發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。趙玲俊等[20]通過(guò)在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，探討了康艾注射液對(duì)乳腺癌細(xì)胞（MDA-MB-435S、MDA-MB-231、SK-BR-3、HCC-1937）的增殖、克隆形成和凋亡的影響，其結(jié)果表明康艾注射液可能通過(guò)AMPK/mTOR通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。張騰騰等[21]通過(guò)對(duì)體外結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞加入康艾注射液，研究其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡和增殖的影響，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞凋亡及Ki-67的表達(dá)情況，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞caspase-3、Bcl-2表達(dá)水平，結(jié)果顯示：加入康艾注射液的結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡的比例升高，達(dá)到57.02%，而對(duì)照組僅為7.28%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。且加入康艾注射液的結(jié)腸癌細(xì)胞Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組（65.84% vs 95.79%），提示其細(xì)胞增殖明顯受到抑制。以上研究均和本文研究結(jié)果一致，提示康艾注射液可通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制腫瘤的增殖，從而發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。

本文還發(fā)現(xiàn)單純同步放化療組中CD3+、CD4+水平降低，CD8+水平升高，γ干擾素、IL-2降低，而聯(lián)合組中CD3+、CD4+水平升高，CD8+水平降低，γ干擾素、IL-2均升高，均高于對(duì)照組。表明同步放化療會(huì)造成機(jī)體免疫系統(tǒng)的抑制，影響淋巴細(xì)胞的分化。而康艾注射液可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞的成熟，提高抗腫瘤免疫應(yīng)答。楊景景[22]納入86例非小細(xì)胞肺癌患者，對(duì)照組（43例）給予含鉑化療方案，實(shí)驗(yàn)組（43例）在對(duì)照組基礎(chǔ)上加用康艾注射液治療，結(jié)果表明，相比于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組中CD4+細(xì)胞數(shù)增多，CD8+細(xì)胞數(shù)減少。劉曉燕等[23]也通過(guò)康艾注射液聯(lián)合GP方案（順鉑+吉西他濱）治療晚期非小細(xì)胞肺癌，其結(jié)果表明，聯(lián)合組外周血中CD3+、CD4+細(xì)胞數(shù)增多，CD8+細(xì)胞數(shù)降低;對(duì)照組外周血中CD3+、CD4+細(xì)胞數(shù)降低，CD8+細(xì)胞數(shù)增多。李沅耕[24]通過(guò)細(xì)胞動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)康艾注射液可以增強(qiáng)RAW 264.7細(xì)胞的免疫活性，對(duì)抗X射線(xiàn)所致小鼠外周血白細(xì)胞和骨髓有核細(xì)胞數(shù)的減少，并升高小鼠白細(xì)胞數(shù)，其次可以明顯提高免疫功能低下小鼠血清溶血素以及TNF-α和IL-6含量。劉建[25]通過(guò)聯(lián)合康艾注射液和TP方案（順鉑+紫杉醇）治療晚期卵巢癌，結(jié)果顯示，相比于單純TP方案，聯(lián)合組外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+數(shù)目明顯較高，且聯(lián)合組患者中位生存期、無(wú)進(jìn)展生存期明顯優(yōu)于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以上研究均表明放化療對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)存在抑制作用，影響效應(yīng)免疫細(xì)胞的分化成熟，降低機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答。而康艾注射液具有保護(hù)機(jī)體免疫功能的作用，且具有良好的免疫增強(qiáng)作用，從而激活人體免疫系統(tǒng)，促進(jìn)免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷作用。

綜上所述，康艾注射液聯(lián)合同步放化療治療中晚期子宮頸癌可以促進(jìn)PDCD5、Bax、P53等凋亡相關(guān)因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而起到殺傷腫瘤的效果;其次可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的活化成熟，提高血液中γ干擾素、IL-2的水平，激活人體免疫系統(tǒng)，提高抗腫瘤免疫應(yīng)答，是治療中晚期子宮頸癌較佳的選擇。

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（收稿日期：2021-07-29） （本文編輯：張爽）