血清DCP、CHI3L1聯合AFP檢測在肝細胞癌早期診斷中的意義研究

呂桂芳 張春 林建源 林楓 張代場

【關鍵詞】 脫-γ-羧基凝血酶原 殼多糖酶3樣蛋白1 甲胎蛋白 肝細胞癌

[Abstract] Objective： To investigate the significance of the combined detection of serum dec-γ-carboxylic prothrombin （DCP）， chitosan enzyme 3-like protein 1 （CHI3L1） and alpha-fetoprotein （AFP） on improving the early diagnosis of hepatocellular carcinoma. Method： A total of 30 patients with early hepatocellular carcinoma admitted to our hospital from June 2014 to May 2016 were selected as hepatocellular carcinoma group， and 30 patients with hepatitis B cirrhosis were selected as cirrhosis group. During the same period， 30 healthy subjects who came to our hospital for physical examination were selected as healthy control group. AFP content was detected by electrochemiluminescence assay， DCP and CHI3L1 content were detected by enzyme linked immunosorbent assay， the above indicators among three groups were compared. Result： Serum DCP， CHI3L1 and AFP levels in hepatocellular carcinoma group were significantly higher than those in cirrhosis group and healthy control group， the differences were statistically significant （P<0.01）. The positive rates of along and three combined tests of serum DCP， CHI3L1 and AFP in hepatocellular carcinoma group were higher than those in cirrhosis group and healthy control group （P<0.01）. The positive rate of the three combined tests was the highest in hepatocellular carcinoma group. Conclusion： Combined detection of DCP， CHI3L1 and AFP can be used as an important indicator for the diagnosis of early hepatocellular carcinoma， and provide a basis for the discovery and treatment of early hepatocellular carcinoma.

[Key words] Dec-γ-carboxylic prothrombin Chitosan enzyme 3-like protein 1 Alpha-fetoprotein Hepatocellular carcinoma

First-author’s address： Mindong Hospital Affiliated to Fujian Medical University， Fu’an 350000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.18.038

肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma， HCC）是全世界第六位常見的癌癥，同時也是癌癥死亡的第二大常見原因[1]。大約每年有50萬新增診斷的肝細胞癌患者，其中超過50%在中國。大部分患者由于其早期無明顯癥狀，往往到醫院就診時已經處于肝細胞癌中晚期，失去進一步手術機會，其5年生存率不足5%。數據顯示，早期肝癌的病人在應用外科手術、肝移植或射頻消融等綜合治療后，5年生存率可達70%，而進展的肝細胞癌患者，中位生存率少于1年[2]。如何早期發現和診斷肝細胞癌是提高患者療效和延長生存率的重要研究課題。血清生物標志物由于其采樣及檢查簡便，被認為是理想的早期診斷指標[3]。迄今為止，AFP仍然是診斷HCC最主要的標志物，其在診斷、判斷療效、估計預后、預防復發中有一定的作用。但是單靠AFP不能診斷所有的HCC，易造成假陰性和假陽性。這就給醫務工作者提出了更高的要求，需要將現有的腫瘤標志物更加合理地運用于肝細胞癌的早期診斷，或是探究更高靈敏度、特異性、實用性的檢驗手段來提高HCC的早期診斷率，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年6月-2016年5月在本院住院的早期肝細胞癌患者30例為肝細胞癌組，納入標準：HBsAg均為陽性，初次檢查發現肝腫瘤、腫瘤直徑<3 cm，入組前未進行任何治療（包括外科手術、介入治療及其他綜合治療）;均符合2009年我國《原發性肝癌規范化診治的專家共識》診斷標準[4]。排除標準：基礎情況較差，合并心腦肺疾病，無法耐受手術治療。選取同期在本院治療的30例乙肝肝硬化患者為肝硬化組。納入標準：均符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》中的相關診斷標準。排除標準：酒精性肝硬化或其他病因導致的肝硬化。同期選擇來本院體檢的30名健康者為健康對照組。該項研究經醫院倫理委員會批準，并取得患者及家屬知情同意。

1.2 方法 三組患者檢測均采集清晨空腹靜脈血5 mL，室溫放置1 h，3 500 r/min離心10 min，分離后的血清于-70 ℃冰箱保存待測，所有檢測標本無溶血現象。AFP檢測采用貝克曼DXI800化學發光儀及配套試劑，記錄測定值，并與參考值比較;DCP、CHI3L1檢測均采用ELISA法，往預先包被人DCP、CHI3L1捕獲抗體的包被微孔中，一次加入標本，標準品，HRP標記的檢測抗體，經過溫浴并徹底洗滌，用底物TMB顯示，TMB在過氧化物酶催化下轉化為藍色，并在酸的作用下轉化為最終黃色，顏色深淺和樣品中的DCP、CHI3L1正相關，用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。對待檢測受試者血清進行檢測，記錄測定值，并與參考值比較：分別以AFP>20 ng/mL、DCP>40 mAU/mL、CHI3L1>79 pg/mL為陽性結果;當三者同時檢測，若其中出現一項陽性時就被認為聯合檢測陽性。ELISA試劑盒均購買于上海生工生物工程有限公司，所有操作均按說明書嚴格執行。

1.3 觀察指標 比較三組血清DCP、CHI3L1、AFP含量;觀察單項標志物檢測及三項聯合檢測在各組中的陽性檢出率。

1.4 統計學處理 采用SPSS 16.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，兩組數據比較采用t檢驗，多組數據比較采用單因素方差分析;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組的一般資料比較 肝細胞癌組男19例，女11例;年齡31～72歲，平均（53.4±6.2）歲。肝硬化組男20例，女10例;28～69歲，平均（52.6±5.8）歲。健康對照組男18名，女12名;年齡21～74歲，平均（51.5±6.1）歲。三組性別、年齡比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組血清中DCP、CHI3L1、AFP含量檢測結果比較 肝細胞癌組患者血清DCP、CHI3L1、AFP水平均明顯高于肝硬化組和對照組，差異均有統計學意義（P<0.01），見表1。

2.3 單項標志物檢測及三項聯合檢測在各組中的陽性檢出率比較 肝細胞癌組患者血清DCP、CHI3L1、AFP單項檢測陽性率及三項聯合檢測陽性率均高于肝硬化組和健康對照組（P<0.01）。肝細胞癌組中三項聯合檢測陽性檢出率最高。見表2。

3 討論

在肝硬化患者中肝細胞癌是其主要的死亡原因，肝細胞癌是我國常見腫瘤之一，也是世界上第三大主要和癌癥相關死亡原因[5-6]，其具有發病率高、腫瘤惡性程度高、侵襲力強、早期無明顯癥狀，發現困難等特點，多數患者被診斷出時已處于中晚期，預后不佳，嚴重影響我國人民健康和生命[7]。目前，臨床工作中以篩查HCC主要使用血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP），但發現AFP在診斷HCC時敏感性和特異性不足，郝銳等[8]報道顯示，AFP敏感度和特異度分別為56.9%和 83.3%;易造成假陰性和假陽性，需結合超聲、CT、MRI等影像技術才可以達到早期診斷。因此對HCC進行準確、靈敏的早期診斷是提高患者遠期療效及存活率的關鍵。脫-γ-異常凝血酶原（Des-gamma-carboxyprothrombin，DCP），又稱為維生素K缺乏或拮抗劑Ⅱ誘導的蛋白（PIVKA Ⅱ），是一種異常的凝血酶原，多種腫瘤中，特別是在 HCC 的惡性增殖過程中起著重要作用[9]。它在肝細胞癌患者的血清中明顯升高，在早期肝癌中也有一定升高，而在健康受試者的血清中幾乎檢測不到[10]。一項Ⅱ期臨床研究顯示，在肝炎、肝硬化和HCC人群中，診斷HCC的敏感性和特異性分別為89%和95%，可作為AFP的診斷補充。在該項研究中發現，肝細胞癌組患者血清中DCP的陽性率達86.7%，明顯高于肝硬化組26.7%及健康對照組0[11]。

殼多糖酶3樣蛋白1（chitinase 3-like 1，CHI3L1），又名幾丁質酶3樣蛋白1，編碼 CHI3L1的基因位于小鼠和人類的1號染色體上[12]。CHI3L1 是最近發現的一種由中性粒細胞、巨噬細胞、平滑肌細胞、軟骨細胞和腫瘤細胞等分泌。既往研究表明，CHI3L1蛋白水平與肝癌、肺癌、胃癌和乳腺癌等多種腫瘤相關[13]。至今為止，CHI3L1參與HCC的腫瘤惡性生物學行為的詳細機制尚未完全闡明[14]。有研究報道CHI3L1在HCC患者腫瘤組織中異常增高[15]，并且與腫瘤組織中血管內皮生成正相關[16]，并與多種腫瘤的預后相關，尤其同HCC預后評估有關。

目前對選擇兩種或兩種以上腫瘤標志物同步進行聯合檢測是提高相關腫瘤診斷的方法，特別是對于肝細胞癌診斷陽性率有著重要意義[17-18]。本研究選擇通過AFP聯合DCP、CHI3L1三個標志物進行檢測，結果表明，肝細胞癌組各項檢測指標均高于肝硬化組及健康對照組，與各標記物單獨檢測比較，AFP聯合CHI3L1及DCP三項標志物進行檢測可以明顯提高肝細胞癌的診斷陽性率，有效降低了早期肝細胞癌漏診的可能。

綜上所述，DCP、CHI3L1及AFP三項聯合檢測，具有靈敏度高、特異性好，同時由于它采血量少，操作簡便，便于廣大基層醫院展開檢測，有利于肝細胞癌的早期篩查。因此，DCP、CHI3L1及AFP三項聯合檢測，對提高肝細胞癌早期診斷率具有重要意義，但要最終確診肝癌，仍需要結合影像學及病理學檢查等相關資料，避免誤診。

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（收稿日期：2020-09-03） （本文編輯：姬思雨）