Xpert MTB/RIF 在肺結核及耐藥結核檢測中的價值

王云格

結核病實驗室檢查可為結核病的確診提供病原學證據,也是確診傳染性肺結核尤其是耐多藥結核病的重要依據,是結核病診斷,治療和防治效果評價的技術關鍵［1］。全國第五次結核病抽樣調查資料顯示,我國15 歲以上人群活動性涂陽和菌陽肺結核的患病率分別為459/10 萬、66/10 萬和119/10 萬,結核分枝桿菌耐多藥率為6.8%［2］。現今,因基層結核病防治機構實驗室的基礎設施、人力資源較為薄弱,以及研究經費也存在不足,菌陽肺結核主要采取痰涂片和痰培養等常規的方法檢測。但常規方法的檢出率相對較低,導致少數的菌陽肺結核無法及時發現。因此尋求一種結核分枝桿菌高檢出率的方法,能夠有效的確診斷肺結核以及其耐藥性,可較好的控制結核病疫情。結核病的診斷取決于痰涂片的抗酸染色和結核分枝桿菌的培養,結核分枝桿菌培養和藥物敏感性測試的條件較為苛刻,而在時效上,結核分枝桿菌培養和藥物敏感性檢測需要進行分離菌株培養,所耗時間達到2 個月,這定會對肺結核的最佳診治時間造成延誤,影響早期診斷結果［3］。耐藥結核病的出現,對結核病的預防和控制帶來了前所未有的挑戰。隨著分子生物學技術的飛速發展,Xpert MTB/RIF 技術應用在肺結核及耐藥結核診斷檢測中,從而為結核病的及時診斷起到了重要的作用。Xpert MTB/RIF 檢測技術是世界衛生組織認可的一種全新的結核病快速檢測方法,其操作簡單,只需要一步的準備工作,2 h 夠能夠得到檢測結果,具有生物安全性,并且具有很高的陽性檢出率。Xpert MTB/RIF 技術與傳統方法相比,敏感性和特異性更高,在基層結核病防治中有著重要的應用價值［2］。本次研究將150 例可疑耐藥肺結核及初篩痰結核桿菌涂片陽性自愿行Xpert MTB/RIF 及結核桿菌培養的患者,對不同檢測方法檢測出的結核桿菌和耐藥菌的情況進行研究分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將本院于 2017年1 月～2019年1 月期間收治的可疑耐藥肺結核及初篩結核桿菌涂片陽性自愿行Xpert MTB/RIF 及結核桿菌培養檢查的150 例患者作為本次研究對象,其中男84 例,女66 例；年齡43～75 歲,平均年齡(54.78±6.75)歲；58 例為臨床懷疑耐藥結核病患者,占比38.67%,其中包括初治且規律一線抗結核治療>3 個月結核桿菌涂片仍為陽性患者、復治失敗患者、在發病前與開放性耐藥肺結核有接觸史的患者；92 例為初篩結核桿菌涂片陽性自愿行相關檢測的患者,占比61.33%。以上患者均符合中華醫學會結核病學分會發布的《肺結核診斷和治療指南》中肺結核診斷標準。排除患有嚴重器官功能性障礙以及患有精神類疾病患者和近期采取抗結核治療,在呼吸道中未留存足夠標本的患者。患者及家屬均對本次研究目的知悉,且自愿參加本次研究,此次研究已通過本院倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 設備與試劑 使用珠海貝索生物技術有限公司所生產的抗酸染色液,上海申賢恒溫設備廠生產的隔水式恒溫培養箱,珠海市銀科醫學工程股份有限公司生產的酸氏羅氏培養基,美國Cepheid 公司所生產的Xpert MTB/RIF 檢測系統以及配套試劑。

1.2.2 檢查方法 150 例可疑耐藥結核病及結核桿菌涂片陽性的患者,取3 份清晨痰液樣本予以熒光顯微鏡檢查、結核菌培養和Xpert MTB/RIF 檢查。如果結核菌培養的結果是結核分枝桿菌陽性,需要進行深入藥敏試驗。采取Xpert MTB/RIF 和常規結核菌培養技術對分枝桿菌和利福平耐藥點檢測予以對比。

1.3 觀察指標 以結核桿菌培養及藥敏試驗結果為金標準,分析Xpert MTB/RIF 對疑似耐藥結核病患者及結核桿菌涂片初篩陽性患者利福平耐藥的檢測靈敏度、特異度。

2 結果

2.1 Xpert MTB/RIF 對疑似耐藥結核病患者利福平耐藥的靈敏度、特異度分析 58 例疑似耐藥結核病患者中,Xpert MTB/RIF 均檢出結核分枝桿菌感染,檢出利福平耐藥5 例,占比8.62%；結核桿菌培養檢出4 例利福平耐藥,占比6.90%,以結核桿菌培養及藥敏試驗結果為金標準,Xpert MTB/RIF 對耐藥結核病患者利福平耐藥的靈敏度為100.00%(4/4),特異度98.15%(53/54)。

2.2 Xpert MTB/RIF 對結核桿菌涂片初篩陽性患者利福平耐藥的靈敏度、特異度分析 92 例初篩結核桿菌涂片陽性患者中,Xpert MTB/RIF 均檢出結核分枝桿菌,檢出利福平耐藥4 例,占比4.35%；結核桿菌培養檢出3 例利福平耐藥,占比3.26%。以結核桿菌培養及藥敏試驗結果為金標準,Xpert MTB/RIF 對結核桿菌涂片初篩陽性患者利福平耐藥的靈敏度為100.00%(3/3),特異度98.88%(88/89)。

3 討論

我國的結核病發病率較高,根據相關結核病流調結果得知,我國活動性肺結核患者較多,結核病耐藥情況較為嚴重,因此對結核病、耐藥結核病的早期診斷以及治療格外重要［3］。結核病是一種常見的慢性傳染性疾病,對患者的健康和生活質量產生嚴重影響［4］,每年全球有大約150 萬人因結核病而導致死亡。一些結核病患者起病隱匿,早期可能沒有癥狀,因此,結核病的早期發現、早期診斷和早期治療對提高治愈率、降低感染率、死亡率具有重要的意義［5］。臨床診斷中最常用的肺結核診斷方法則有分枝桿菌培養、抗酸染色顯微鏡檢等,以上方法具有經濟、簡便等特點,但檢出率相對偏低,且培養耗時。因此,采取快速、準確的檢出方法將對提高結核病的診斷率起到重要作用。

現如今,醫療水平在不斷發展,Xpert MTB/RIF 檢測技術能夠快速特異地檢測出結核分枝桿菌及利福平耐藥,為臨床診斷和治療提供可靠的參考,具有較好的臨床價值。Xpert MTB/RIF 檢測技術是一種半巢式實時熒光PCR 體外診斷技術,可對結核分枝桿菌DNA 以及利福平耐藥突變基因進行檢測,用于診斷結核病和利福平耐藥結核病。全過程僅需約2 h,操作簡單。在進一步提高診斷符合率的同時,提高診斷的敏感性和特異性。由于其全封閉式的檢測技術,具有很高的生物學安全性。基于結核分枝桿菌DNA,可用于有效消除非結核分枝桿菌的干擾,與非結核分枝桿菌無交叉反應。在常鳳霞［6］的相關研究中得知,Xpert MTB/RIF檢測技術使用MTB DNA 作為檢測對象,可以排除非結核分枝桿菌的干擾。熒光染色與固體培養只能檢測到分枝桿菌,則會較大幾率造成誤診。如果染色或培養陽性/Xpert MTB/RIF 陰性,則可能懷疑樣品中含有非結核分枝桿菌,這需要通過菌株鑒定予以進一步確認。

在對結核桿菌涂片陽性的疑似耐藥結核病患者采取Xpert MTB/RIF 檢測后均檢出結核分枝桿菌感染,其檢測靈敏度、特異度較高。同時對耐藥菌的檢測的靈敏度和特異度也較高,充分說明了該方法在肺結核及耐藥結核檢測中有著重要的價值。在李桂杭等［7］的相關研究中得知,Xpert MTB/RIF 檢測法的靈敏度為87.50%,高于液體分枝桿菌培養管(MGIT)培養法的66.67%,差異有統計學意義(P<0.05)；Xpert MTB/RIF檢測法的特異性為91.67%,明顯高于液體MGIT 培養法的25.00%,差異有統計學意義(P<0.05)。在其結果中可以看出Xpert MTB/RIF 技術在上臨床有著較好的應用價值,能夠對肺結核的早期診斷起到很好作用。

綜上所述,Xpert MTB/RIF 是一種準確、快速的診斷肺結核及耐藥結核病的有效手段,生物安全要求較低,確具有生物安全性。并且具有很高的陽性檢出率,和較高的檢測靈敏度、特異度,該方法值得在臨床檢測上推廣應用。