基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接技術(shù)的清瘟護(hù)肺顆粒防治新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)的潛在藥效物質(zhì)研究

劉琪琪，李 純，周 潔，孫婷婷，狄志彪，李 曄,，劉 洋*，張 紅*

1陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，咸陽(yáng) 712046；2陜西省中醫(yī)藥研究院，西安 710003

2019年12月以來(lái)，由新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)感染引起的急性肺炎在全世界相繼爆發(fā)，截止2020年10月22日，新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)累計(jì)確診人數(shù)達(dá)1 288萬(wàn)余人，死亡率在某些國(guó)家已超過(guò)10%，目前尚未發(fā)現(xiàn)特效藥[1]。中醫(yī)藥抗擊瘟疫已有千年的歷史，并在抗擊COVID-19中取得了矚目的療效，COVID-19初起表現(xiàn)為發(fā)熱、干咳、乏力，與溫病上焦衛(wèi)氣同病證相似；出現(xiàn)昏迷、甚至死亡與“逆?zhèn)餍陌C”相吻合；恢復(fù)期乏力的表現(xiàn)與肺胃陰傷的溫病學(xué)證候特點(diǎn)相似[2]，據(jù)患者不同體質(zhì)對(duì)癥下藥，標(biāo)本兼治，可以有效改善患者的癥狀。國(guó)家衛(wèi)健委及國(guó)家中醫(yī)藥管理局頒發(fā)的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》中推薦不同的復(fù)方和中成藥對(duì)癥治療[3]。從療效、安全性、經(jīng)濟(jì)性等方面分析，中醫(yī)藥在防治COVID-19 都具有很大的優(yōu)勢(shì)。因此研究防治新冠肺炎的中藥復(fù)方及其作用機(jī)理，具有重要意義。

清瘟護(hù)肺顆粒是陜西省中醫(yī)藥研究院針對(duì)本次新冠疫情研發(fā)的防治COVID-19的院內(nèi)制劑，已通過(guò)了省藥品監(jiān)督管理局的審批(陜藥監(jiān)函[2020]60號(hào))，于2月17日生產(chǎn)上市，銷(xiāo)量良好[4]。該復(fù)方是在銀翹散、玄麥甘桔湯和四君子湯基礎(chǔ)上進(jìn)行加減而成，由金銀花、連翹、大青葉、玄參、杏仁、浙貝母、桔梗、蘇葉、防風(fēng)、炒白術(shù)、茯苓、茵陳、黨參、竹葉、麥冬、生甘草十六味藥組成[5]。清瘟護(hù)肺顆粒具有疏風(fēng)解熱，清肺止咳的功效，主治瘟病初起，見(jiàn)有發(fā)熱、干咳、咽痛、食少等癥狀，適用于新型冠狀病毒感染疑似及新型冠狀病毒感染的輕癥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明本方中多味中藥可通過(guò)抑制機(jī)體固有免疫的激活，抗炎解熱，減輕肺臟等組織損傷[6]。

2007年，英國(guó)藥理學(xué)家Hopkins在Nature Biotechnology雜志中首次提出“網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)(network pharmacology)”的概念，其對(duì)藥物-藥物、藥物-疾病網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行了分析，闡釋了中藥治療疾病的機(jī)理，不再局限于單個(gè)成分、單個(gè)靶標(biāo)、單一疾病的研究思想，為中醫(yī)藥的研究與發(fā)展提供了新的思路[7]?；趲缀纹ヅ浜湍芰科ヅ涞摹版i-鑰原理”的分子對(duì)接技術(shù)，可用來(lái)分析蛋白質(zhì)-配體識(shí)別，已經(jīng)成為中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的有力工具。分子對(duì)接的可靠性取決于所采用的評(píng)分函數(shù)的準(zhǔn)確性，計(jì)分功能可用于確定配體的結(jié)合模式和位點(diǎn)，預(yù)測(cè)結(jié)合親和力，并識(shí)別給定蛋白靶標(biāo)的潛在藥物先導(dǎo)[8]。研究已證實(shí)COVID-19病毒有效靶點(diǎn)SARS-CoV-2 3CL水解酶在病毒多蛋白的蛋白水解過(guò)程中起關(guān)鍵作用，是病毒復(fù)制和功能所必需的蛋白，被認(rèn)為是關(guān)鍵的藥物靶點(diǎn)。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶II(ACE2)在介導(dǎo)SARS-CoV-2入侵細(xì)胞、促進(jìn)病毒復(fù)制、加重急性肺損傷方面發(fā)揮重要作用，也是潛在的藥物篩選靶點(diǎn)可以作為一種新型的生物療法來(lái)攔截病毒，可抑制感染的進(jìn)展，減輕肺損傷。RNA依賴(lài)的RNA聚合酶(RdRp)是病毒RNA復(fù)制的關(guān)鍵酶，可抑制病毒RNA的復(fù)制[9]。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法和分子對(duì)接技術(shù)探討清瘟護(hù)肺顆粒藥效成分、作用靶點(diǎn)及信號(hào)通路，為深入研究其防治COVID-19的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

1 材料與方法

1.1 中藥化學(xué)成分和疾病相關(guān)靶點(diǎn)篩選

利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)(TCMSP，http://lsp.Nwu.edu.cn /tcmsp.Php)、BATMAN-TCM(A Bioinformatics Analysis Tool for Molecular MechANis of Traditional Chinese Medicine，http://bionet.ncpsb.org/)及中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺(tái)(TCMIP，http://www.tcmip.cn/)數(shù)據(jù)庫(kù)篩選清瘟護(hù)肺顆粒中十六味中藥材的活性成分及相關(guān)靶點(diǎn)。利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.uniprot.org)將所有蛋白的名稱(chēng)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，得到靶標(biāo)蛋白所對(duì)應(yīng)的基因名稱(chēng)。

1.2 疾病靶點(diǎn)篩選

利用GeneCards(https://www.genecards.org/)和OMIM(https://www.omim.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)分別以“novel coronavirus”、“Coronavirus 2019 ”、“novel coronavirus pneumonia”為關(guān)鍵詞檢索疾病相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 靶點(diǎn)映射與靶蛋白互作分析

本實(shí)驗(yàn)將藥物靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)上傳至venny2.1.0 (https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/)繪制韋恩圖，得到藥材活性成分相關(guān)靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)的交集靶點(diǎn)。將清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)(https://string-db.org /)進(jìn)行分析，并利用Cytoscape3.7.1軟件構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖(protein protein interaction network，PPI)。利用軟件中“Network Analyzer”功能，并根據(jù)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)中的degree值和score值設(shè)置節(jié)點(diǎn)大小及顏色反應(yīng)。其中degree值是網(wǎng)絡(luò)分析中刻畫(huà)節(jié)點(diǎn)中心性的最直接度量指標(biāo)。節(jié)點(diǎn)degree值越大，該節(jié)點(diǎn)越重要。Score值反映了該節(jié)點(diǎn)及周邊節(jié)點(diǎn)的密集程度，節(jié)點(diǎn)score值越大，該節(jié)點(diǎn)連接的節(jié)點(diǎn)數(shù)越多。

1.4 GO富集分析及KEGG通路富集分析

利用R3.6.0軟件對(duì)藥材與疾病的交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO(Gene Ontology)生物信息學(xué)富集，分別從基因靶點(diǎn)的分子功能(molecular function，MF)、所處的細(xì)胞位置(cellular component，CC)和參與的生物過(guò)程(biological process，BP)三個(gè)方面分析，P值設(shè)為P≤ 0.05，利用Origin軟件作條形圖可視化分析。利用R語(yǔ)言中Cluster profiler數(shù)據(jù)包對(duì)藥材與疾病的交集靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析。通過(guò)查閱文獻(xiàn)及degree排名，篩選20條相關(guān)KEGG通路，采用ggplot2數(shù)據(jù)包對(duì)KEGG通路富集結(jié)果進(jìn)行可視化分析。

1.5 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

利用Cytoscape3.7.1軟件，將清瘟護(hù)肺顆粒藥材、活性成分及疾病交集靶點(diǎn)導(dǎo)入軟件進(jìn)行可視化分析，利用Cytoscape3.7.1軟件中的Merge功能，構(gòu)建藥材-成分-靶點(diǎn)(herb-compounds-target)網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖，根據(jù)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)中的緊密中心性(closeness centrality，CC)、介數(shù)中心性(betweenness centrality，BC)和度值(degree)進(jìn)行分析。根據(jù)KEGG富集結(jié)果篩選出的20條通路，利用Cytoscape3.7.1軟件中的Merge功能構(gòu)建靶點(diǎn)-通路(target-pathway)，根據(jù)網(wǎng)絡(luò)中的拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)BC、CC、Degree進(jìn)行分析，得出清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的主要活性成分和重要靶點(diǎn)。

1.6 分子對(duì)接

利用RCSB PDB數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.rcsb.org/)下載由上?？萍即髮W(xué)饒子和楊海濤團(tuán)隊(duì)提供的COVID-19病毒有效靶點(diǎn)SARS-CoV-2 3CL水解酶(SARS-CoV 3CLpro)(PDB ID：6LU7)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶II(ACE2) (PDB ID：1R42)和RNA依賴(lài)的RNA聚合酶(RdRp)(PDB ID：6L4R)的PDB格式文件用于分子對(duì)接研究，下載清瘟護(hù)肺顆粒中槲皮素、β-谷甾醇、漢黃芪素、木犀草素的mol2格式文件。利用AutoDock4.2.1軟件進(jìn)行分子對(duì)接，預(yù)測(cè)配體與受體之間最佳的結(jié)合模式[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 清瘟護(hù)肺顆?；钚猿煞值暮Y選

本研究通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)，BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)及TCMIP數(shù)據(jù)庫(kù)得到清瘟護(hù)肺顆粒16味藥材的化學(xué)成分，其中金銀花63個(gè)、連翹67個(gè)、大青葉34個(gè)、玄參39個(gè)、杏仁82個(gè)、浙貝母57個(gè)、桔梗39個(gè)、蘇葉48個(gè)、防風(fēng)50個(gè)、炒白術(shù)27個(gè)、茯苓48個(gè)、茵陳85個(gè)、黨參83個(gè)、竹葉7個(gè)、麥冬2個(gè)、生甘草92個(gè)合計(jì)823個(gè)化學(xué)成分，篩選重復(fù)后得到473個(gè)化學(xué)成分。其相關(guān)作用靶點(diǎn)共13 101個(gè)，篩選重復(fù)后得到878個(gè)靶點(diǎn)。

2.2 疾病靶點(diǎn)的篩選

通過(guò)OMIM和GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)分別以“novel coronavirus”、“coronavirus 2019”、“novel coronavirus pneumonia”為關(guān)鍵詞檢索疾病靶點(diǎn)，分別檢索到529、438、791個(gè)靶點(diǎn)，篩選重復(fù)后得到787個(gè)疾病靶點(diǎn)。

2.3 交集靶點(diǎn)收集與PPI網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

將藥材成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)通過(guò)韋恩圖映射，得到123個(gè)疾病與藥材成分的交集靶點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖1。將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，利用Cytoscape3.7.1軟件構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖，如圖2所示，該網(wǎng)絡(luò)圖共有82個(gè)節(jié)點(diǎn)，241條邊，其degree 值越大，節(jié)點(diǎn)越大；Combine score 值越小，顏色越明亮；degree 值越小，線條越細(xì)。

圖1 成分與疾病靶點(diǎn)交集分布Fig.1 Distribution of Intersection Compounds and Disease Target

2.4 GO生物過(guò)程和KEGG通路富集分析

本研究為更好闡明清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的作用機(jī)制，將藥材與疾病的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入R3.6.0軟件中，對(duì)靶蛋白進(jìn)行GO生物學(xué)功能分析，P≤0.05，利用origin軟件可視化分析，結(jié)果見(jiàn)圖3。GO分為分子功能MF、BP和CC三個(gè)部分。其中橫坐標(biāo)表示富集靶點(diǎn)的數(shù)目，縱坐標(biāo)代表GO富集分析的過(guò)程。利用R語(yǔ)言對(duì)靶蛋白進(jìn)行KEGG通路分析，富集到136條通路，通過(guò)查閱文獻(xiàn)及degree排名，篩選出20條主要相關(guān)通路，包括MAPK、PI3K/AKT、IL-17、HIF-1等信號(hào)通路。采用ggplot2數(shù)據(jù)包對(duì)KEGG通路富集結(jié)果進(jìn)行可視化分析，連接度越高，圓圈越大，P值越高，顏色越偏向紅色，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖3 清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的GO功能分析Fig.3 GO function analysis of Qingwen Hufei granules in the treatment of COVID-19

2.5 藥材-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建分析

將藥材、藥材活性成分、交集靶點(diǎn)與疾病生成關(guān)聯(lián)表，導(dǎo)入Cytoscape3.7.1軟件構(gòu)建清瘟護(hù)肺顆粒的“藥材-成分-靶點(diǎn)”關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見(jiàn)圖5。構(gòu)建的關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)包括251個(gè)節(jié)點(diǎn)和1143個(gè)邊。根據(jù)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)分析，得出同時(shí)滿(mǎn)足大于BC、CC、degree三個(gè)均值篩選得到槲皮素、漢黃芪素等15個(gè)藥效成分，結(jié)果見(jiàn)表1。

圖5 清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19藥材-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖Fig.5 Herb-compound-targe tnetwork of Qingwen Hufei granules in the treatment of COVID-19注：綠色橢圓：中藥材；藍(lán)色方塊：活性成分；黃色菱形：靶點(diǎn)。Note:Green ellipse:Herb;Blue diamond:Compound;Yellow rhombus:Target.

表1 清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的藥效成分

2.6 靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建分析

根據(jù)KEGG富集分析結(jié)果及查閱文獻(xiàn)篩選得到20條通路，導(dǎo)入Cytoscape3.7.1軟件構(gòu)建清瘟護(hù)肺顆粒的“靶點(diǎn)-通路”關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見(jiàn)圖6，圖中包括74個(gè)節(jié)點(diǎn)，334條邊。根據(jù)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)分析，得出同時(shí)滿(mǎn)足大于BC、CC、degree三個(gè)均值的15個(gè)靶點(diǎn)，分別為MAPK1、MAPK3、RELA、IL6、MAPK8、BCL2、TNF、MAPK14、PRKCB、CCND1、STAT3、IL1β、CASP3、PRKCA、EGFR，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖7 SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2及RdRp與藥效成分的分子對(duì)接圖Fig.7 Molecular docking diagram of 7SARS-CoV-23CL hydrolase,ACE2 and RdRp with active compounds注：a.ACE2-β-谷甾醇；b.ACE2-漢黃芪素；c.ACE2-木犀草素；d.ACE2-槲皮素；e.SARS-CoV-23CL水解酶-β-谷甾醇；f.SARS-CoV-23CL水解酶-漢黃芪素g.SARS-CoV-23CL水解酶-木犀草素；h.SARS-CoV-23CL水解酶-槲皮素；i.RdRp-β-谷甾醇；j.RdRp-漢黃芪素；k.RdRp-木犀草素；l.RdRp-槲皮素。Note:a.ACE2-β-sitosterol;b.ACE2-wogonin;c.ACE2-luteolin;d.ACE2-quercetin;e.SARS-CoV-2 3CL hydrolase-β-sitosterol;f.SARS-CoV-2 3CL hydrolase-wogonin;g.SARS-CoV-2 3CL hydrolase-luteolin;h.SARS-CoV-2 3CL hydrolase-quercetin;i.RdRp-β-sitosterol;j.RdRp-wogonin;k.RdRp-luteolin;l.RdRp- quercetin.

2.7 潛在藥效成分與ACE2、SARS-CoV-23CL水解酶和RdRp的分子對(duì)接結(jié)果分析

根據(jù)拓?fù)鋵W(xué)分析清瘟護(hù)肺顆粒在“藥材-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖得到排名較高的藥效成分，通過(guò)Autodock4.2.1軟件將藥效成分漢黃芩素、槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇與SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果見(jiàn)圖7。 其中清瘟護(hù)肺顆粒中化合物漢黃芩素、槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇與SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2和RdRp均小于-5 kcal/mol，表明均有較好的親和性，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 清瘟護(hù)肺顆粒核心化合物與 SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2和RdRp的結(jié)合能力

3 討論

根據(jù)新型冠狀病毒肺炎臨床癥狀可知，病因多以濕熱濁毒為主，在我國(guó)抗疫歷史中，中醫(yī)藥起到了不可或缺的作用。中藥含多種有效成分可多靶點(diǎn)多環(huán)節(jié)作用，用量可隨證加減，可調(diào)節(jié)免疫力和抗病毒，毒副作用較小，作用平和。清瘟護(hù)肺顆粒是由金銀花、連翹、大青葉、玄參、杏仁、浙貝母、桔梗、蘇葉、防風(fēng)、炒白術(shù)、茯苓、茵陳、黨參、竹葉、麥冬、生甘草十六味藥組成。方中金銀花、連翹、浙貝母清熱解毒，清肺止渴為君藥；大青葉、竹葉、桔梗具有清熱解毒，疏風(fēng)透邪的功效；黨參、炒白術(shù)、茯苓固護(hù)后天之本；浙貝母、桔梗、紫蘇葉及苦杏仁配伍可清熱宣肺，黨參與黃芪配伍可補(bǔ)益肺氣，生津止渴，可治療脾肺氣虛，清熱消渴[11,12]。

本研究通過(guò)拓?fù)鋵W(xué)分析得到“藥材-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖中清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的15個(gè)主要藥效成分。研究表明，甘草酚、大黃豆素具有抑制病毒的作用[13,14]。芒柄花黃素可通過(guò)調(diào)節(jié)COX-2/PGE?的表達(dá)抑制腸道病毒的復(fù)制[15]。查閱文獻(xiàn)得出耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)可引起的金黃色葡萄球菌肺炎，其中α毒素是一種必不可少的毒力因子，而柚皮素可顯著抑制α毒素的表達(dá)從而減輕感染小鼠的肺損傷和炎癥癥狀[16]。槲皮素具有抗菌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)的藥理作用，其可有效減少肺炎組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，抑制上皮細(xì)胞增生，有效改善肺炎小鼠肺組織病理學(xué)損傷，同時(shí)可減少病毒的復(fù)制，可有效預(yù)防和治療病毒[17,18]。因此，清瘟護(hù)肺顆粒中的主要藥效成分具有抑制病毒的作用。

本研究通過(guò)拓?fù)鋵W(xué)分析得到“靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖中清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的15個(gè)重要靶點(diǎn)。其中，RELA是一種抗病毒轉(zhuǎn)錄因子，Bais等人闡明了依賴(lài)RELA的生存因子，抑制了感染引起的細(xì)胞死亡，阻止了RERA缺陷細(xì)胞中Chandipura病毒(CHPV)的增殖[19]。在甲型流感病毒(IAV)感染過(guò)程中，IAV感染刺激了可溶性IL-6受體(sIL-6R)的表達(dá)，sIL-6R是一種參與IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的多功能蛋白，且sIL-6R的表達(dá)上調(diào)了其自身配體IL-6和促炎細(xì)胞因子IL-32的水平，認(rèn)為IL-6是參與病毒感染急性炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵細(xì)胞因子[20]。其中TNF-α和IL-1β是炎癥因子，具有較強(qiáng)的致炎活性，可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[21]。清瘟護(hù)肺顆?？赏ㄟ^(guò)改善機(jī)體炎癥反應(yīng)，達(dá)到促炎因子與抗炎因子動(dòng)態(tài)平衡。綜上可得，篩選的重要靶點(diǎn)與COVID-19有密切關(guān)系，其可能為該制劑的有效作用靶點(diǎn)。

通過(guò)KEGG富集及文獻(xiàn)研究篩選的20條通路，其中IL-17 信號(hào)通路與多種炎癥肺病疾病有關(guān)，IL-17上調(diào)可導(dǎo)致肺損傷加重，IL-17抑制劑可顯著減輕肺部炎癥，并抑制NF-κB的表達(dá)和激活，降低促炎癥因子的水平，可誘導(dǎo)VEGF表達(dá)上調(diào)，顯著抑制肺組織和細(xì)胞的炎性細(xì)胞因子水平[22]。通過(guò)獲得性肺炎(CAP)患兒支氣T管肺泡灌洗液(BAL)的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)重度CAP患兒的IL-17水平明顯增高。Th17細(xì)胞在肺部炎癥和纖維化中起關(guān)鍵作用，Th17細(xì)胞和IL-17A信號(hào)在宿主防御和疾病發(fā)展中的意義已在各種感染和自身免疫模型中得到證實(shí)[23]。大量研究表明，Th17細(xì)胞及其標(biāo)志性細(xì)胞因子IL-17A在呼吸道抵抗各種細(xì)菌和真菌感染的免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。IL-17A可作用于感染組織中的非免疫細(xì)胞，通過(guò)誘導(dǎo)抗菌蛋白、細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)來(lái)增強(qiáng)先天免疫。Yang等[24]研究表明，抑制PI3K/AKT信號(hào)通路Beclin1過(guò)表達(dá)可阻斷肺炎甲型流感病毒感染后肺炎鏈球菌的再感染。因此，清瘟護(hù)肺顆?？赡芡ㄟ^(guò)以上通路防治COVID-19。

分子對(duì)接結(jié)果表明，清瘟護(hù)肺顆粒中的藥效成分木犀草素、槲皮素、漢黃芩素、β-谷甾醇與SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2和RdRp的結(jié)合能均小于<-5 kcal/mol，推測(cè)清瘟護(hù)肺顆粒的藥效成分可能通過(guò)阻止病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞與ACE2結(jié)合，阻斷SARS-CoV-2病毒蛋白與SARS-CoV-2 3CL水解酶結(jié)合，阻斷病毒RNA復(fù)制過(guò)程，從而發(fā)揮防治效果。

綜上所述，本文運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析清瘟護(hù)肺顆粒防治新型冠狀肺炎的潛在藥效物質(zhì)，分析篩選清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的15個(gè)藥效成分以及15個(gè)重要靶點(diǎn)?；贙EGG富集和文獻(xiàn)報(bào)道分析得到清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的20條相關(guān)信號(hào)通路；清瘟護(hù)肺顆粒的藥效成分木犀草素、槲皮素、漢黃芩素等可能通過(guò)與SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2和RdRp結(jié)合作用于MAPK1、MAPK3、RELA、IL6等15個(gè)重要靶點(diǎn)調(diào)控IL-17 信號(hào)通路、PI3K/AKT信號(hào)通路等多條信號(hào)通路，達(dá)到防治 COVID-19的作用。該研究為進(jìn)一步研究清瘟護(hù)肺顆粒防治COVID-19的藥效成分及作用機(jī)制提供了參考。