‘酒紅’礬根離體快繁技術研究

張新玉，許 栩

（北京安海之弋園林古建工程有限公司，北京 102607）

礬根為多年生草本花卉，是虎耳草科礬根屬植物的通稱。礬根品種眾多，一些品種對土壤的重金屬有較強的吸收，在生態修復和環境保護方面具有一定作用。礬根因其多變的葉形及葉色，被稱為“花園調色板”，在美國園林景觀中應用較廣泛。近幾年來，才開始將礬根引進國內。礬根耐寒喜蔭，在園林造景中可以作為林下陰生彩葉植物使用，或者用作室內高端盆景，其開發利用前景廣闊，特別是北京百萬畝大造林后，隨著林木蔥郁，林下土壤裸露成為需要解決的課題，而具有推廣應用潛力的林下地被植物礬根受到重視。

礬根分株繁殖成活率較低，且繁殖速度較慢；部分品種可以播種繁殖，但種子發芽慢且不整齊。植物組織培養技術可以實現礬根的快速大量繁殖。本研究從我們近年來引種的品種中，篩選出能夠在北京地區露地越冬、正常生長的品種‘酒紅’礬根，研究建立完整的離體組培快繁技術體系，可引用于‘酒紅’礬根種苗規模化生產，并為其他礬根的組培研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料為北京安海之弋園林古建工程有限公司引種的‘酒紅’礬根。

1.2 外植體制備及消毒

4 月于溫室內取材，選擇生長旺盛、無明顯病蟲害、大小在3cm×3cm 左右的幼葉作為外植體。

用毛筆蘸取洗潔精溶液，洗刷葉片表面灰塵，再用自來水沖洗30min。將葉片轉移至帶蓋無菌瓶中，在超凈臺內，先用75%乙醇浸泡外植體30s，期間輕輕搖晃；然后再用2%次氯酸鈉溶液浸泡2min，期間輕輕搖晃；最后用無菌水清洗4 次。在無菌紙板上，用無菌剪刀在葉片主葉脈處剪成約1cm×1cm 的葉片圖1（A）所示，貼在誘導培養基表面，葉背面朝上。

圖1 礬根‘酒紅’的組培擴繁體系

表1 不同激素濃度對礬根‘酒紅’愈傷組織誘導的影響

1.3 培養基

愈傷組織誘導培養基、繼代培養基和增殖培養基均以MS 為基礎培養基，誘導和繼代培養基中的激素（6-BA，NAA）設置相同，濃 度 分 別 為（0.5mg/L，0.05mg/L）、（1.0mg/L，0.05mg/L）、（1.5mg/L，0.3mg/L），糖含量為3%。增殖培養基中的激素（6-BA，NAA）濃度設置分別為（0.1mg/L，0.01mg/L）、（0.3mg/L，0.03mg/L）、（0.5mg/L，0.05mg/L）、（0.6mg/L，0.02mg/L），糖含量為3%。生根培養以1/2MS 為基礎培養基，分別添加不同濃度的NAA 或IBA，NAA 濃度設置為0.1mg/L 和0.2mg/L，IBA 濃度設置為0.1mg/L，同時設置添加活性炭（0.5g/L）和不添加活性炭的對比，觀察活性炭對生根的影響。以上所有培養基，均添加4g/L 的瓊脂粉，糖含量均為2%，pH 均調至5.9～6.0，121℃滅菌17min。

1.4 培養條件與方法

1.4.1 愈傷組織的誘導

將消毒后的葉子，圖1（A）所示，在接近葉柄處的主葉脈處剪切成1cm×1cm 大小的葉片，接種至不同的誘導培養基中，每瓶培養基接種2 個外植體，每個處理接種20 瓶。培養條件為：室溫24±2℃下，先暗培養7d，后轉入LED 白光下培養，光照強度為2000lux，光照周期為10h/d，一個月后統計愈傷組織誘導率。

1.4.2 繼代培養與不定芽分化

誘導培養40d 左右，外植體產生大量愈傷組織。將愈傷組織切割成1cm×1cm 左右的組織塊，再轉入與誘導培養基一致的繼代培養基中進行繼代培養，每瓶培養基接種2 個愈傷組織塊，每個處理接種10 瓶。培養條件為：室溫24±2℃，光照強度為2000lux，光周期為10h/d。繼代培養1 個月后，各培養基中的愈傷組織均分化出不定芽，觀察不定芽的生長情況。

糖尿病患者由于代謝紊亂，其陰道內糖原水平明顯提高,不僅導致陰道環境的變化，也會給陰道清潔度帶來很大影響，直接誘導炎癥反應[4]。上述變化也增加了老年糖尿病合并陰道炎患者的治療難度。

1.4.3 增殖培養

以繼代培養基中生長正常的不定芽為材料，切除不定芽基部的愈傷組織，以單株形式轉入增殖培養基。每瓶培養基接種10株，每個處理接種10 瓶。培養條件為：室溫24±2℃，光照強度為2000lux，光周期為10h/d，50d 后觀察苗長勢及增殖情況。

1.4.4 生根培養

將增殖培養基中的小苗轉入含有不同激素及濃度的生根培養基中，每瓶培養基接種10 株小苗，每個處理接種10 瓶，15d 后統計培養基的生根狀況。

1.4.5 煉苗移栽

當不定根長約1cm 時，將瓶苗放在溫室內煉苗7d。前4 天不打開瓶塞，光照強度保持在3000～6000lux 之間，溫度保持在20～27℃之間；第5 天、第6 天不打開瓶塞，光照強度保持在6000～10000lux 之間，溫度保持在20～27℃之間；第7 天將瓶塞打開一半，光照強度保持在6000～10000lux 之間，溫度保持在20～27℃之間。第8 天取出瓶苗，用水清洗掉根部粘連的培養基，栽入草炭土:蛭石:珍珠巖=2:2:1 的混合基質中。移栽后的礬根苗，前10 天需要保持環境較高的空氣濕度（90%以上），光照強度控制在6000lux 以下，溫度保持在20～27℃之間，10d 后慢慢減少濕度和增加光照強度，15d 后進入正常管理。

1.5 數據處理及分析

增殖率（%）=單瓶苗總數/單瓶接種苗數×100

生根率（%）=生根苗總數/接種苗總數×100

2 實驗結果

2.1 愈傷組織誘導培養基的篩選

表1 中列出了不同誘導培養基下愈傷組織的誘導情況。在誘導初期，三種培養基的愈傷組織均為綠色，水澤化，隨著培養時間的延長，愈傷組織變得疏松，顏色有綠色、乳白色及淡紅色如圖1（B）所示。根據表1，可以看出，在培養基里添加1.5mg/L 6-BA、0.3mg/L NAA 時可快速誘導愈傷組織的形成，愈傷組織生長較好。

2.2 愈傷組織的繼代培養

將愈傷組織轉接到相應的新培養基中，培養1 個月后，發現在添加了1.5mg/L 6-BA 與0.3mg/L NAA 的培養基中，可快速誘導愈傷組織產生出大量不定芽，且生長健壯，僅發現個別芽出現玻璃化現象。表2 中列出繼代培養基中不同的激素濃度對礬根繼代培養及不定芽分化的影響。

表2 不同激素濃度對礬根‘酒紅’愈傷組織繼代培養的影響

2.3 增殖培養基的篩選

將單芽轉入含有不同激素濃度的增殖培養基中一個月后，觀察發現6-BA 濃度過高易導致玻璃化，濃度過低，增殖效果不好。當6-BA 的濃度為0.3mg/L，NAA 的濃度為0.03mg/L 時，可明顯觀察到增殖現象，一個月后增殖系數為4，當繼續培養50d 后，增殖系數可達到7，如圖1（C）、表3 所示。

表3 不同激素濃度對礬根‘酒紅’增殖培養的影響

2.4 生根培養基的篩選

將單芽轉入含有不同激素濃度的生根培養基中，觀察各培養基中生根速度及生根狀況。表4 列出不同生根培養基處理下，礬根的生根狀況。實驗發現：①當生根培養基中的NAA 的濃度為0.2mg/L 時，加入活性炭會延緩生根時間，這可能是因為活性炭會吸附培養基中的NAA，有效NAA 濃度減少導致生根時間稍微長一些；②生根培養基用的1/2MS 指僅大量元素濃度為MS 的一半，而鐵鹽、微量元素、有機元素的濃度不變。如果將MS 培養基中的所有元素都減半，礬根生根速度明顯很慢；③對于礬根‘酒紅’，NAA 的生根效果要優于IBA。從節約生根時間考慮，最佳生根培養基為1/2MS+0.2mg/L NAA，生根率可達100%，如圖1（D）所示。其次生根培養基可選擇1/2MS+0.1mg/L NAA，生根率也可達100%。

表4 不同激素濃度及培養基處理對礬根‘酒紅’生根的影響

2.5 煉苗移栽

將根長約1cm 長的礬根組培苗，進行煉苗處理，如圖1（E）所示，煉苗7d 后移栽至預先澆透水的草炭土:蛭石:珍珠巖=2:2:1 的混合基質中。最終移栽成活率可達95%，如圖1（F）所示。

3 討論

陳錦等[3]在對美洲礬根‘紫色宮殿’的組織培養及快速繁殖的研究中，分別以礬根的幼芽、葉柄和葉片為外植體進行誘導，結果表明以幼芽為外植體時繁殖率最高，誘導培養基為MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA，生根培養基為4/5MS+0.2mg/L NAA+0.2g/L AC。陳宏等[2]以礬根的帶莖尖幼嫩莖段為外植體進行誘導，最佳誘導增殖培養基為MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA，生根培養基為4/5MS+0.2mg/L NAA+1.0g/L AC。以上兩者研究均建立完整的快繁體系，但是外植體不易消毒，且以莖段為外植體，會損害植株。本研究以葉子為外植體進行誘導，誘導效果可能不是最佳，但是取材不損害原植株，且消毒比較容易，2%的次氯酸鈉消毒2min 中即可達到消毒效果，后期利用少量分化出來的芽進行增殖培養，在短時間內也可實現快速繁殖。