乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組化檢測(cè)在乳腺癌診斷中的應(yīng)用

劉 麗 白春俠 曹美榮

（營(yíng)口市中心醫(yī)院，遼寧 營(yíng)口 115000）

乳腺疾病分為乳腺炎癥、乳腺病變、乳腺癌等，需要將惡性腫瘤、良性腫瘤、乳腺病變等進(jìn)行區(qū)分，但是在診斷過程中由于患者病情復(fù)雜，導(dǎo)致原位癌、浸潤(rùn)性癌、腫瘤間質(zhì)重塑等鑒別工作難以開展[1]。蛋白免疫組化診斷是臨床常見的診斷方法，通過分析病灶組織中蛋白免疫指標(biāo)陽性情況，分析其病灶性質(zhì)，有利于后續(xù)治療。CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白是臨床常見的免疫組化指標(biāo)，研究顯示，在乳腺癌疾病呈顯著表達(dá)，具有較高的診斷價(jià)值[2]。本文主要針對(duì)乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組化檢測(cè)乳腺癌價(jià)值進(jìn)行分析，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在2018年5月至2019年5月，對(duì)我院收治的150例乳腺疾病患者進(jìn)行回顧性對(duì)比分析，排除精神異常、患有重大疾病、診斷前服用或采取其他輔助治療的患者。根據(jù)患者病變情況將其分為觀察組與對(duì)比組。觀察組是乳腺癌患者，共90例；對(duì)照組是乳腺良性病變患者，共60例。其中，觀察組年齡34～59歲，平均年齡為（41.25±4.21）歲；病程1～9年，平均病程為（4.34±1.23）年；絕經(jīng)患者39例，未絕經(jīng)患者51例；病理類型：51例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，25例浸潤(rùn)性小葉癌，13例單純導(dǎo)管癌，其他1例。對(duì)照組年齡35～58歲，平均年齡為（40.85±4.35）歲；病程1～9年，平均病程為（4.39±1.11）年；絕經(jīng)患者21例，未絕經(jīng)患者39例；病理類型：24例硬化性乳腺病變、36例纖維腺瘤。在一般資料比較方面，兩組差異不大（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 試劑與設(shè)備 采用的試劑為丹科醫(yī)療器械技術(shù)服務(wù)（上海）有限公司生產(chǎn)的乳腺間質(zhì)CD34測(cè)定試劑盒和平滑肌肌動(dòng)蛋白試劑盒。主要采用的設(shè)備為酶標(biāo)儀和血液分析儀，酶標(biāo)儀的型號(hào)為美國Awareness Stat Fax-210酶標(biāo)儀，血液分析儀的生產(chǎn)廠家和型號(hào)為Sysmex公司SF-3000自動(dòng)血液分析儀。

1.2.2 方法 本文150例乳腺疾病患者采用乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組化進(jìn)行檢測(cè)。①制作樣本：觀察患者病變組織，測(cè)量患者病變組織、腫瘤、癌癥物病變大小、周圍病變情況，描述病變組織、腫物性狀，采用細(xì)胞活檢方式將病變組織、腫物多切面切開，若病變組織、腫物距切緣較遠(yuǎn)，取具有代表性的切緣進(jìn)行細(xì)胞活檢，采用濃度為4%中性甲醛對(duì)組織進(jìn)行固定，制片方法為常規(guī)石蠟制片法，對(duì)樣本進(jìn)行HE染色，并將樣本保存?zhèn)溆谩＂诿庖呓M化檢測(cè)：對(duì)所有樣本進(jìn)行免疫組化染色，采用過氧化酶SP檢測(cè)法，藥劑為過氧化酶采用鏈霉素抗生物素蛋白，同時(shí)將樣本進(jìn)行脫蠟、水化處理，采用濃度為10%過氧化氫阻斷過氧化酶活性，在無菌環(huán)境下嚴(yán)格按照試劑盒的適用說明進(jìn)行操作，乳腺間質(zhì)CD34按1∶80比例配比，平滑肌肌動(dòng)蛋白按1∶50配比，每張切片上滴加配比后的乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白，室溫下培育2 h。滴加酶生物素，觀察DAB顯示情況，并采用蘇木青對(duì)樣本染色，最后封片對(duì)比染色情況。

1.3 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白免疫組化檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判定，對(duì)比兩組患者乳腺間質(zhì)CD34和平滑肌肌動(dòng)蛋白的染色結(jié)果。將不著色細(xì)胞定義為陰性，用（-）表示；陽性細(xì)胞位于乳腺間質(zhì)內(nèi)部，呈黃棕色，形狀為長(zhǎng)梭形。陽性細(xì)胞數(shù)小于25%為弱陽性，用（+）表示，陽性細(xì)胞25%～50%為陽性，用（++）表示，陽性細(xì)胞大于50%為強(qiáng)陽性，用（+++）表示。選取乳腺間質(zhì)呈現(xiàn)清晰黃棕色顆粒部分，采用40倍低倍顯微鏡觀察乳腺間質(zhì)中陽性細(xì)胞最密集區(qū)域，換用100以上高倍鏡對(duì)該區(qū)域進(jìn)行放大，由兩名以上醫(yī)師分別進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞占總癌癥細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，并觀察細(xì)胞染色情況與形態(tài)。其中，差率10%以內(nèi)可采用，反之重新檢測(cè)。陽性率=（強(qiáng)陽性例數(shù)+陽性例數(shù)）/總例數(shù)×100.00%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究有關(guān)數(shù)據(jù)采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，組間結(jié)果比較行χ2檢測(cè)，應(yīng)用logistic回歸分析CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析。P＜0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽性診出率比較 觀察組患者CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽性診出率均高于對(duì)照組，數(shù)據(jù)差異顯著（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽性診出率比較[n（%）]

2.2 CD34與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析 logistic回歸分析顯示，CD34與患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超聲BI-RADS分級(jí)呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。見表2。

表2 CD34與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析

2.3 平滑肌肌動(dòng)蛋白與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析 logistic回歸分析顯示，平滑肌肌動(dòng)蛋白與患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超聲BI-RADS分級(jí)呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。見表3。

表3 平滑肌肌動(dòng)蛋白與患者疾病發(fā)展相關(guān)性分析

3 討論

乳腺疾病是女性常見疾病，乳腺癌是女性最常見的浸潤(rùn)性癌癥，致死率僅次于肺癌。若治療不及時(shí)，乳腺癌細(xì)胞隨血液、淋巴液擴(kuò)散，轉(zhuǎn)移到患者全身，嚴(yán)重危及女性患者生命安全[3]。

CD34是一種高度糖基化的穿膜糖蛋白，具有選擇性，表達(dá)在人類及其他哺乳動(dòng)物造血干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、乳腺未分化間葉細(xì)胞表面，CD34分子表達(dá)隨著細(xì)胞成熟逐漸削弱[4]。根據(jù)孔丹青等[5]研究結(jié)果表明，CD34分子在介導(dǎo)細(xì)胞間黏附作用中具有重要作用，能有效參與人體、動(dòng)物造血干細(xì)胞運(yùn)輸，參與炎性反應(yīng)。肌動(dòng)蛋白屬于球狀多功能蛋白質(zhì)，存在于真核細(xì)胞中。平滑肌動(dòng)蛋白中的細(xì)絲是組成肌細(xì)胞收縮裝置的一部分，以游離單體形式存在，具有移動(dòng)和收縮功能，屬于細(xì)胞功能中必不可少的一部分[6]。根據(jù)張亮等[7]研究結(jié)果表明，腫瘤間質(zhì)在腫瘤、癌癥疾病演變過程中起著重要作用，腫瘤、癌癥實(shí)質(zhì)細(xì)胞與未分化間葉細(xì)胞相互作用，促進(jìn)良性腫瘤疾病向惡性腫瘤、癌癥發(fā)展。因此，乳腺癌間質(zhì)發(fā)生改變可能與腫瘤間質(zhì)的演變有關(guān)，腫瘤間質(zhì)在演變過程中CD34失去表達(dá)，轉(zhuǎn)化為平滑肌動(dòng)蛋白出現(xiàn)表達(dá)[8-9]。裴蓓等[10]認(rèn)為該過程和表達(dá)體現(xiàn)了患有乳腺癌患者的原位癌細(xì)胞向浸潤(rùn)性癌轉(zhuǎn)移過程,間質(zhì)纖維細(xì)胞獲得平滑肌肌動(dòng)蛋白，失去乳腺間質(zhì)CD34纖維細(xì)胞，可能是癌細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)的標(biāo)志或者先兆，或者該癌癥本身就是一種早期的浸潤(rùn)癌，只是該細(xì)胞陽性表現(xiàn)為弱陽性或者假陽性，常規(guī)染色技術(shù)不能對(duì)其進(jìn)行分辨。本次研究結(jié)果顯示，觀察組患者CD34指標(biāo)、平滑肌肌動(dòng)蛋白指標(biāo)陽性診出率明顯高于對(duì)照組，且CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽性表達(dá)與患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、超聲BI-RADS分級(jí)呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），說明分析乳腺間質(zhì)CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白陽性表達(dá)情況，能夠輔助診斷患者乳腺癌疾病，為主治醫(yī)師提供科學(xué)的診斷依據(jù)。

綜上所述，免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織中乳腺間質(zhì)CD34、平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)情況具有重要意義，能夠有效提高乳腺癌患者和乳腺良性病變患者診斷效率和陽性檢出率。因此，該檢測(cè)法在臨床醫(yī)學(xué)中具有推廣意義。