懷孕與非懷孕遠(yuǎn)東刺猬血清蛋白比較分析

金志民，賈修歧，楊新宇，蘇 航

（牡丹江師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，黑龍江 牡丹江157011）

遠(yuǎn)東刺猬（Erinaceus amurensisSchrenk）又稱東北刺猬，屬猬形目猬科刺猬屬，是一種晝伏夜出的小型哺乳動(dòng)物［1］。由于其具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和醫(yī)學(xué)價(jià)值，因此被廣泛飼養(yǎng)［2-4］。血清蛋白成分及其含量變化與機(jī)體健康、營養(yǎng)和疾病等狀況有著密切關(guān)系，對(duì)于建立種質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、遺傳育種和經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖等方面具有重要意義［5］。

有關(guān)遠(yuǎn)東刺猬的研究已有許多［6-12］，但遠(yuǎn)東刺猬血清蛋白的研究還未見相關(guān)報(bào)道，本試驗(yàn)通過聚丙烯酰胺凝膠電泳研究遠(yuǎn)東刺猬受孕與非受孕個(gè)體血清蛋白的譜帶分布，討論其分布特點(diǎn)以及比較酶帶的表達(dá)強(qiáng)度，為遠(yuǎn)東刺猬的養(yǎng)殖及深入研究提供基礎(chǔ)生化數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2019年4月采用籠捕法捕自黑龍江省牡丹江市三道關(guān)林區(qū)健康成年雌性個(gè)體4只，其中懷孕個(gè)體2只，非懷孕個(gè)體2只。

1.2 方法

1.2.1 血清的制備采用無傷害采血法從遠(yuǎn)東刺猬四肢靜脈采血，室內(nèi)靜置20 min后于4℃、4 000 r/min離心15 min，上清液為血清。采血后對(duì)采血處進(jìn)行消毒并將其放歸至捕捉地。

1.2.2 電泳采用Tris、HCl、TEMED、過硫酸銨、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、甘氨酸、核黃素（天津市大茂化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）配制聚丙烯酰胺凝膠，用移液槍（Eppendorf）將電泳上樣液依次加入到點(diǎn)樣孔中，點(diǎn)樣順序?yàn)椋悍菓言校ˋ1、A2、A3、A4）、懷孕（B1、B2、B3、B4），點(diǎn)樣量為3～5μL。使用DYCZ-24A型雙垂直電泳槽（北京市六一儀器廠生產(chǎn)）進(jìn)行聚丙烯酰胺垂直板電泳（起始電流10 mA，待點(diǎn)樣孔中的樣品進(jìn)入到凝膠中后將電流調(diào)至40 mA穩(wěn)流電泳4 h）。

1.2.3 染色電泳結(jié)束后，進(jìn)行血清蛋白染色。染色液：0.05 g考馬斯亮藍(lán)R250、20 g磺基水楊酸充分混勻后定容至100 mL過濾備用。

1.2.4 洗脫將染色后的凝膠放入裝有濃度為7%的冰醋酸洗脫液中進(jìn)行洗脫，待凝膠中出現(xiàn)透明背景下清晰的藍(lán)色條帶后終止洗脫。使用凝膠成像系統(tǒng)（美國Alpha公司，AlphaImager Mini）對(duì)洗脫后的凝膠進(jìn)行掃描拍照，并計(jì)算相對(duì)遷移率，即溴酚藍(lán)的遷移距離與蛋白質(zhì)條帶遷移距離的比值［13］。比較譜帶遷移率、數(shù)量和譜帶染色的深淺度來判斷酶的分布、表達(dá)強(qiáng)度和活性［14，15］。

2 結(jié)果與分析

由圖1、表1可見，遠(yuǎn)東刺猬懷孕與非懷孕個(gè)體共分離出遷移率為0.005～0.590的27條電泳譜帶，其中非懷孕遠(yuǎn)東刺猬血清蛋白分出20條譜帶，懷孕遠(yuǎn)東刺猬血清蛋白分離出25條譜帶。按血清蛋白電泳譜帶的分布特點(diǎn)將電泳圖譜分為2個(gè)區(qū)域：Ⅰ區(qū)：1～5號(hào)電泳譜帶；Ⅱ區(qū)：6～27號(hào)電泳譜帶。

圖1 懷孕與非懷孕遠(yuǎn)東刺猬血清蛋白帶電泳圖譜

在Ⅰ區(qū)：1～5號(hào)電泳譜帶為懷孕與非懷孕個(gè)體共有帶，其活性比較為：1＞2＞4=5＞3；懷孕與非懷孕間血清蛋白活性一致。

在Ⅱ區(qū)：6、13、14、16、19、21、27號(hào)譜帶是懷孕遠(yuǎn)東刺猬特有譜帶，9、23號(hào)譜帶是非懷孕遠(yuǎn)東刺猬特有帶，其余為共有帶。其中，7、8、11、25號(hào)電泳譜帶是懷孕與非懷孕共有帶，其活性比較為：11＞7＞8＞25；懷孕與非懷孕間血清蛋白活性一致；10、12、17、18、20、22號(hào)帶為懷孕與非懷孕共有帶，其活性比較為：10＞12＞17＞22＞20＞18，懷孕與非懷孕間血清蛋白活性表現(xiàn)為：懷孕＞非懷孕；24、25、26號(hào)譜帶為懷孕與非懷孕共有帶，其活性比較為：24＞25＞26，懷孕與非懷孕間血清蛋白活性表現(xiàn)為：懷孕＜非懷孕。

表1 懷孕與非懷孕遠(yuǎn)東刺猬血清蛋白譜帶分布和遷移率

3 小結(jié)與討論

遠(yuǎn)東刺猬懷孕與非懷孕個(gè)體間血清蛋白的譜帶數(shù)量和分布相似，但活力和特有帶的分布存在著明顯的差別。與個(gè)體之間的體貌特征、生理生化指標(biāo)、激素的分泌水平密切相關(guān)。血清蛋白中的球蛋白與生物體免疫功能呈正相關(guān)［5］。遠(yuǎn)東刺猬懷孕個(gè)體的機(jī)體免疫力較非懷孕個(gè)體強(qiáng)。同時(shí)根據(jù)血清蛋白特有帶的分布可以判斷其是否懷孕，為遠(yuǎn)東刺猬的養(yǎng)殖和深入研究提供基礎(chǔ)的生化數(shù)據(jù)。