梅勝堯,高慶發,張逸民,張玉堂
江蘇省藥物研究所有限公司江蘇省藥物安全性評價中心,江蘇南京 211118
飼養管理直接影響實驗兔的質量,科學飼養必須依據其自身的生長發育特點進行。根據品種、性別、年齡、環境等不同飼養管理方式需進行適當的調整。除做好科學飼養之外,對于疾病的預防也是實驗兔生長過程中需高度重視的一部分。實驗兔抵抗力較低時容易患病,對正常生長發育不利,嚴重的還會造成大批量死亡,嚴重影響實驗進程及結果,因此對于疾病應堅持預防為主,通過加強飼養管理減少疾病的發生,進而保證實驗室內實驗兔健康生長,降低因實驗動物原因造成的實驗結果不準確問題。本文主要介紹了實驗兔的飼養管理方法及相應的疾病預防措施,具體內容如下。
動物實驗中,實驗兔主要使用的是兔形目中的家兔、新西蘭兔、荷蘭兔等多個品系的兔,均是由野生穴兔馴化而來,具有野生兔的生活習性。動物實驗室兔的管理應根據兔的生理特點具體調整。
在野外生存時為躲避天敵,白天嗜眠,夜晚外出覓食、活動,因此在長期的進化過程中形成了晝伏夜出的生活習性。實驗兔目前也保留著相同的生活習性,白天在籠中休息,夜晚表現十分活躍,采食飲水主要在夜間進行,占全天的70%左右。
根據實驗兔的習性,實驗室的工作照明應做到試驗開始時開啟,結束即關閉,減少高強度的光照時間。同時動物照明應設置明確固定的晝夜交替時間,一般明暗比以12 h∶12 h或10 h∶14 h為宜。
實驗兔聽覺敏銳,警惕性較高。因此,膽小、喜歡安靜的生活環境。環境中突然出現的異響,陌生的實驗操作員都會導致其受驚,在籠內躁動,繼而引發其它實驗兔恐慌,引起整個兔群受驚。受驚的實驗兔會表現為巨大的應激反應,例如食欲下降,腹瀉,母兔難產、流產等現象,對實驗兔的正常生長健康不利[1]。
因此兔實驗室應設置在遠離大型儀器設備的環境噪音較低處,約束實驗室的實驗人員,控制噪音不高于60分貝,更不得出現異響或其它實驗動物嘶鳴吠叫,不與其它實驗動物同層同樓混養。
實驗兔喜歡干燥舒爽的環境。
溫度:實驗兔作為恒溫哺乳動物,體溫相對恒定在38~39 ℃。成年兔適宜的飼養環境溫度為15~25 ℃,新出生的仔兔適宜環境溫度為30~32 ℃,1~2月齡的幼兔最適溫度為20 ℃左右,因此選擇實驗室溫度時應根據實驗兔的年齡進行微調。符合國標的普通級兔實驗室溫度控制范圍為16~26 ℃,濕度范圍為40%~70%,換氣次數不小于10次/h。如飼養青年或成年實驗兔,實驗室溫度控制在19~21 ℃為宜,該溫度下實驗兔、實驗人員都較適宜。
濕度:雖然國標規定兔實驗室濕度范圍為40%~70%,但兔在濕度大的環境下易滋生多種疾病。而在40%~60%的濕度環境下,實驗兔對實驗環境適應性好,體質強,體重增加快。
換氣次數:普通級實驗室與普通飼養場區別較大,一般密閉性較好,所以應保證足夠的換氣次數(送風量/房間體積)不小于10,在能耗設備支持的條件下,可以提高換氣次數至15次左右來降低動物實驗室內的氨濃度,換氣較好的實驗室內實驗兔不易產生細菌、病毒和寄生蟲的交叉感染。
實驗兔幼年時期喜歡群居,但隨著年齡的增長,群居性越來越差。籠養條件下同籠內的實驗兔常常會出現斗毆、撕咬現象,尤其是在性成熟的雄兔混養時最為嚴重。同時實驗兔混養易引發試驗操作、觀察混淆,受試物交叉污染,導致實驗結果不真實、不可信、不可重復。
實驗兔應單籠飼養,籠具符合國標標準,體重小于2.5 kg的兔飼養空間不小于0.18 m2×0.35 m(籠底面積乘以高度),大于等于2.5 kg的實驗兔飼養空間不小于0.2 m2×0.4 m。這樣的居住空間才能滿足實驗兔的動物福利要求和實驗要求。
兔形目動物也具有嚙齒行為,其門齒、臼齒發達,生長快。實驗兔因飼養環境接觸不到石塊樹枝等自然硬物無法自然磨損牙齒,故而應提高飼料顆粒硬度幫助其磨牙。一般硬度在12~16 kgF的兔維持飼料能較好地提高實驗兔的嚙齒行為,預防門牙過長。
野生兔屬于單胃草食動物,通過攝入植物性飼料吸收身體所需的各種營養物質,兔的盲腸較發達,盲腸內含有大量的微生物,可以對食物進行發酵輔助消化,增加營養物質的利用率。
實驗兔因實驗需要減少實驗個體的差異,提高實驗條件的相似性,從而便于統計實驗數據,提高動物實驗的可重復性,所以不適宜對實驗兔喂養植物飼料,而應飼喂統一的配方飼料。
實驗兔飼料中一般添加30%~40%干化的青綠飼料成分,輔以可飼喂由玉米、豆粕、苜蓿、草粉、酵母粉、食鹽、維生素、礦物質等組成。確保兔的營養攝入和滿足兔的生理需求。
實驗兔亦有食糞癖,這是一種正常的生理現象。實驗兔會直接從肛門處采食軟便,重新吸收其中剩余的營養物質。實驗人員很少能觀察到實驗兔有軟便的存在,只能觀察到固態的硬糞球。在營養學、藥物代謝、毒代等試驗中要充分考慮兔從軟糞中對受試物的重復吸收,從而影響試驗測量數值。
實驗兔日糧主要以配方顆粒飼料為主,日糧要求營養均衡、全面,確保實驗兔可以正常生長,保證實驗數據的真實性和穩定性。同時根據兔的不同生長發育階段選擇相應的生長飼料、維持飼料或繁殖飼料。
實驗兔每日的飼喂需定時定量。根據實驗兔的年齡、品種、生長階段決定每日的飼喂時間及飼喂次數。幼兔飼喂次數要多于成年兔,每次飼喂量以不剩飼料為宜,每日飼喂量根據體重確定,2.5 kg左右的實驗兔每日飼喂50~100 g維持飼料為宜。幼兔應多次少量飼喂。由于實驗兔靜伏夜動的習性,因此夜間應加大飼喂量[2]。
實驗兔一般由實驗動物生成廠家生成后運送至購買單位,因兔膽小易受驚,易產生應激反應。故訂購實驗動物時應及早與供應商溝通,在發貨前至少提前一周調整實驗兔的食譜,增加顆粒飼料飼喂量,逐漸減少直至取消青綠飼料飼喂,從而使實驗兔盡早適應實驗室的喂養管理。實驗兔進入使用單位動物實驗室后,第一晚可不喂食,減輕實驗兔的腸胃負擔,幫助其更好地適應環境。
兔飼料應選擇行業內具有一定口碑的實驗動物飼料生產廠家的產品,每個飼料批次應有對國標規定項目的質量檢測報告,尤其微生物、重金屬、黃曲霉毒素等指標應有不超過兩個月的檢測報告。飼料購入后應存放于干燥通風的符合國標規定的飼料存儲間,開包飼料與密封飼料應分別規定其有效期限,不得超期使用。實驗兔使用單位也應定期對在庫飼料進行第三方委托檢測,確保飼料質量。
實驗兔實驗室飼養過程中應做好溫度濕度記錄、個體觀察記錄,對實驗過程中實驗兔的精神狀態、食欲行為、糞便呼吸、異常反應等方面進行詳盡的記錄。
籠養的實驗兔抵抗力較差,因此實驗室內兔籠、兔舍需要每日進行打掃,清理更換飼料飲水,及時對糞便進行清理。
實驗室內飼養的實驗兔由于抵抗力降低,因此容易出現疾病問題。另外,實驗兔一旦發病難以控制,會直接影響實驗數據,因此對于實驗兔疾病主要以預防為主。
第一,選擇實驗用兔時,應選擇體格強健、抗病能力較強的實驗兔。新購入的實驗兔應盡量隔離飼養2周以上,無任何異常情況時才可進入實驗區域飼養實驗。
第二,兔籠的大小應滿足符合國標14925實驗動物-兔最小空間需求。較窄的話兔子活動受限會導致出現強烈的應激反應,抗病能力降低。
第三,實驗室內兔的飼養密度不宜太大,過大的飼養密度導致病菌大量的繁殖,空氣流通不暢,容易發生飛沫傳播感染,增加了實驗兔患病的概率。
第四,增強衛生清潔工作,及時清除糞便等排泄物。定期對兔籠、食槽、水槽進行更換,更換后的籠具、實驗結束后實驗室應清洗和殺菌消毒,定期清洗更換兔實驗室的送排風過濾網。
第五,預防免疫。應保證動物實驗室購入的實驗兔均已進行預防接種。應與實驗動物供應商及時溝通,確保提供的動物每一只都進行過疫苗接種。同時,應盡量避開接種后的短期內對實驗兔進行運輸轉移,以免影響疫苗效果[3]。
實驗室飼養的實驗兔容易出現的疾病有:出血性敗血病、兔梅毒、球蟲、兔螨病、鼻疽病、兔大腸桿菌病、兔巴氏桿菌病等。
對于出血性敗血病可通過肌肉注射抗生素進行治療,每天注射2次,連續注射3 d。對于兔梅毒可通過肌肉注射青霉素進行治療,連續注射5 d,可達到較好的治療效果。對于球蟲病可使用長效磺胺、球蟲散、腸蟲清等藥物進行治療,每天使用一次,連續服用5 d左右。兔螨病是一種寄生蟲病,患兔螨病的實驗兔可通過噴灑除癩靈水溶液以及涂抹洗必泰軟膏進行治療。對于患鼻疽病的實驗兔可通過肌肉注射青霉素、卡那霉素進行治療,同時搭配口服強力霉素、四環素或磺胺藥物,連續使用5 d可達到較好的治療效果。對于患兔大腸桿菌病的實驗兔可通過使用痢特靈進行治療,每天服用3次,連續服用3 d。對于患兔巴氏桿菌病的實驗兔可通過肌肉注射鏈霉素和青霉素進行治療,每天注射2次,連續注射5 d。