不同炮制方法對(duì)草果中揮發(fā)性成分的影響

遲玉廣 李中陽(yáng) 黃愛華

摘要 [目的]研究草果的不同炮制方法對(duì)其揮發(fā)油的含量及成分的影響，為臨床用藥提供依據(jù)。[方法]將草果依法炮制處理后，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，并利用GC-MS技術(shù)分析測(cè)定其中揮發(fā)性成分及相對(duì)含量。[結(jié)果]草果生品、炒制品和姜炙品的揮發(fā)油提取率分別是0.025 1～0.026 8、0.021 7～0.022 0和0.015 8～0.018 9 mL/g，并分別鑒定出了52、46、47個(gè)組分，其中，以1，8-桉油素、香葉醇等5個(gè)成分含量較高，占峰面積總和的50%以上;與炮制品相比，生品中1，8-桉油素相對(duì)含量較高，而香葉醇在姜炙品的相對(duì)含量則明顯高于其他2個(gè)樣品。[結(jié)論]不同炮制方法對(duì)草果揮發(fā)油提取率及其主要揮發(fā)性成分的相對(duì)含量存在一定的影響。

關(guān)鍵詞 草果;炮制方法;揮發(fā)性成分;GC-MS

Abstract [Objective]To study the effects of different processing methods of Amomum tsao-ko on the content and composition of its volatile oil， to provide the basis for clinical medication.[Method]After the Amomum tsao-ko was processed according to law， the volatile oil was extracted by steam distillation， and the volatile components and relative content were analyzed and determined by GC-MS technology.[Result]The extraction efficiency of Amomum tsao-ko from raw， fried and ginger made were 0.025 1-0.026 8，0.021 7-0.022 0 and 0.015 8-0.018 9 mL/g， and 52， 46， 47 kinds of compounds in three Amomum tsao-ko volatile oils were identified，respectively.Among them， the content of 5 components including 1，8-cineole and geraniol were relatively high， accounting for more than 50% of the total peak area.Compared with processed products，the relative content of 1，8-eucalyptin in raw products was higher.The relative content of geraniol in ginger products was obviously higher than that in other two samples.[Conclusion]Different processing methods have different effects on the extraction efficiency and the relative content of the main volatile components in Amomum tsao-ko.

Key words Amomum tsao-ko;Processing methods;Volatile component;GC-MS

草果又名草果仁、草果子、老蔻，為姜科植物草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire的干燥成熟果實(shí)。秋季果實(shí)成熟時(shí)采摘，除去雜質(zhì)，曬干或低溫干燥，或用沸水燙2～3 min后，再曬干或烘干，主產(chǎn)于云南、廣西、貴州等省。草果味辛、性溫，歸脾、胃經(jīng)，具有燥濕溫中、截瘧除痰等功效，用于寒濕內(nèi)阻、脘腹脹痛、痞滿嘔吐、瘧疾寒熱、瘟疫發(fā)熱等[1]。

現(xiàn)代藥理研究證明，草果中的揮發(fā)油是其最主要活性成分之一，具有多種功效[2]。因此，在《中國(guó)藥典》中，測(cè)定揮發(fā)油總量是評(píng)價(jià)草果品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。草果揮發(fā)油的成分主要為萜類化合物，包括單萜烯類、含氧單萜類、倍半萜烯烴類及含氧倍半萜類等，其中果仁和果殼揮發(fā)油中以1，8-桉油素含量最高[3]。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于草果揮發(fā)性成分的研究主要集中在成分分析[3-5]、提取方法研究[6-8]、藥理藥效研究[9-10]、檢測(cè)方法及指紋圖譜分析[11-12]等方面，而關(guān)于不同炮制方法對(duì)草果中揮發(fā)性成分的影響方面的研究鮮有報(bào)道。該研究擬在前人研究的基礎(chǔ)上，將草果運(yùn)用炒制、姜炙2種傳統(tǒng)炮制方法炮制后，分別用水蒸氣蒸餾法提取其中揮發(fā)油，并利用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)草果炮制品和生品中的揮發(fā)性成分進(jìn)行相對(duì)含量及成分的比較研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

電子天平（杭州友恒稱重設(shè)備有限公司）;TC-15套式恒溫器（海寧市新華醫(yī)療器械廠）;KQ-200DE型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）;氣質(zhì)聯(lián)用儀（單四極桿）Agilent7890B-5975A（美國(guó)安捷倫科技有限公司）;揮發(fā)油提取器一套。

草果藥材（產(chǎn)品批號(hào)：160501，產(chǎn)地：云南）;蒸餾水;生姜汁（自制）;無(wú)水乙醚（分析純）;無(wú)水硫酸鈉（分析純）。

1.2 草果的加工與炮制

稱取3份80～90 g的草果，除雜，按照文獻(xiàn)[13-15]方法炮制，重復(fù)3次，具體方法如下：

①生品。取一份除雜后的草果，去殼和隔膜，取仁，打成粗粉，密封保存?zhèn)溆谩＂诔粗啤Ｈ∫环莩s后的草果，放入熱鍋內(nèi)，用武火炒至外表黑褐，發(fā)泡，有香氣時(shí)取出，放涼，篩去灰屑，去殼和隔膜，取仁，打成粗粉，密封保存?zhèn)溆肹13-14]。③姜炙。取一份除雜后的草果，去殼取仁，加入6 g姜汁拌勻，稍悶潤(rùn)，待姜汁被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至深黃色而姜汁微干，取出晾涼，打成粗粉，密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 揮發(fā)油提取

依照2015版《中國(guó)藥典》四部通則2204，揮發(fā)油提取方法如下：取“1.2”項(xiàng)下3組樣品粉末各50.0 g，加400 mL 蒸餾水浸泡1.5 h，用揮發(fā)油提取器按常規(guī)水蒸氣蒸餾法提取5 h，讀取揮發(fā)油量后用無(wú)水硫酸鈉干燥，封裝備用。

1.4 揮發(fā)油檢測(cè)

對(duì)提取的草果揮發(fā)油利用GC-MS分析，檢測(cè)方法如下。

1.4.1

氣相色譜條件。HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，30 m×250 μm×0.25 μm;進(jìn)樣口溫度250 ℃;進(jìn)樣量1 μL;分流比為50∶1;汽化溫度為 250 ℃;溶劑延遲3.0 min;柱初始溫度80 ℃，保持3 min，以6 ℃/min升至180 ℃保持2 min;載氣為He，流速為1.0 mL/min。

1.4.2

質(zhì)譜條件。電離方式EI（70 eV）;離子源溫度為230 ℃;四級(jí)桿溫度為150 ℃;接口溫度為280 ℃;質(zhì)量掃描范圍50～550 amu。

2 結(jié)果與分析

2.1 草果不同炮制品揮發(fā)油物理性狀及提取率

揮發(fā)油提取器中提取液分上下兩層，上層液均為橙黃色油狀液體，香味辛辣濃烈;下層液均為白色渾濁液體，氣味淡，草果生品與炮制品的揮發(fā)油物理性質(zhì)無(wú)明顯差異。測(cè)量上層橙黃色油相體積，計(jì)算揮發(fā)油提取率，結(jié)果得出生品、炒制品和姜炙品草果揮發(fā)油提取率分別為0.025 1～0.026 8、0.021 7～0.022 0和0.015 8～0.018 9 mL/g。

2.2 草果不同炮制品主要揮發(fā)性成分分析

利用上述方法分別對(duì)生品、炒制品和姜炙品揮發(fā)油樣品進(jìn)行GC-MS分析，得總離子流圖，具體結(jié)果見圖1。所得各組分經(jīng)NIST數(shù)據(jù)庫(kù)檢索確定其化學(xué)成分，并使用面積歸一化法，計(jì)算各化學(xué)成分在揮發(fā)油中的相對(duì)含量。結(jié)果顯示（表1），草果生品、炒制品和姜炙品的揮發(fā)油中分別鑒定出了52、46、47個(gè)組分，分別占其揮發(fā)油總量的99.90%、99.98%和99.99%。其中，以1，8-桉油素、香葉醇、2-異丙基苯甲醛、α-松油醇和（E）-檸檬醛5種成分含量較高，占峰面積總和的50%以上。

2.3 炒制和姜炙工藝對(duì)草果揮發(fā)油提取率及成分的影響

揮發(fā)油提取率測(cè)定結(jié)果顯示，炮制過(guò)后的各樣品揮發(fā)油含量明顯減少，其中以姜炙品最為明顯，數(shù)據(jù)經(jīng)單因素方差分析顯著性差異明顯（P=0.002）。可能是由于姜炙過(guò)程中，果仁經(jīng)液體悶潤(rùn)，又加熱揮干液體，導(dǎo)致了揮發(fā)油的損失。而炒制過(guò)程中，果仁不直接接觸熱源，果殼在其中起到了緩沖作用，使揮發(fā)油損失較少。

此外，通過(guò)對(duì)2種不同炮制品和生品草果揮發(fā)油主要化學(xué)成分的比較發(fā)現(xiàn)，3個(gè)揮發(fā)油樣品中共有成分?jǐn)?shù)量較多，共有40個(gè)，分別占生品、炒制品、姜炙品揮發(fā)油總量的96.16%、98.12%、97.69%。而通過(guò)對(duì)各樣品特有成分分析發(fā)現(xiàn)，各樣品特有成分?jǐn)?shù)量相對(duì)較少，且相對(duì)含量偏低，其中，生品草果揮發(fā)油特有成分有7個(gè)，占其揮發(fā)油總量的1.22%;炒制草果揮發(fā)油特有成分有2個(gè)，占其揮發(fā)油總量的0.69%;姜炙草果揮發(fā)油特有成分有2個(gè)，僅占其揮發(fā)油總量的0.38%。由此說(shuō)明，炒制和姜炙2種炮制工藝對(duì)草果揮發(fā)油中的化學(xué)成分種類無(wú)顯著性影響。

2.4 不同炮制品中5種主要成分的相對(duì)含量差異分析

從圖2可以看出，3個(gè)揮發(fā)油樣品中均以1，8-桉油素含量最高，是草果揮發(fā)油中的最主要有效成分。其中，在生品草果中，1，8-桉油素相對(duì)含量最高，達(dá)26.99%，炒制品次之，姜炙品中相對(duì)含量最低，僅為22.89%，與揮發(fā)油提取率呈現(xiàn)相同規(guī)律。此外，除1，8-桉油素外，其他4種成分相對(duì)含量在生品草果中基本持平，而在2種炮制品中，香葉醇則較其他3種成分含量明顯提高，其中以姜炙品中最為明顯。

3 結(jié)論

（1）草果不同炮制品的揮發(fā)油提取率存在一定差異，經(jīng)過(guò)炮制后揮發(fā)油提取率與生品相比有所下降，其中以姜炙品最為明顯，由此推測(cè)姜炙后草果的辛燥之性有所緩和。

（2）3個(gè)揮發(fā)油樣品中共檢出58個(gè)化合物，其中以1，8-桉油素、香葉醇、2-異丙基苯甲醛、α-松油醇和（E）-檸檬醛5種成分相對(duì)含量較高。

（3）在5種主要揮發(fā)性成分中，1，8-桉油素的相對(duì)含量遠(yuǎn)高于其他成分，是草果中的最主要揮發(fā)性成分，且其在生品中相對(duì)含量明顯高于2種炮制品，該結(jié)果說(shuō)明生品草果的抗菌殺蟲、截瘧除痰的功效應(yīng)當(dāng)優(yōu)于炮制品。

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