HPLC法定量分析22%苯·五氟·硝水分散片劑

彭 麗，周玉良

(山東勝邦綠野化學(xué)有限公司，山東 濟(jì)南 250204)

22%苯·五氟·硝磺水分散片劑是由苯噻酰草胺、五氟磺草胺和硝磺草酮的混配制劑，主要用于防除水稻移栽田一年生雜草，其中五氟磺草胺作為稻田廣譜除草劑，可有效防除稗草、千金以及一年生莎草科雜草，并對(duì)眾多闊葉雜草有效[1]。本品用于水稻移栽后，稻苗徹底返青期，均勻撒施，不僅可高效防除我國(guó)水稻田主要雜草，而且使用方便，省工省時(shí)，與我國(guó)當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)相適應(yīng)。水分散片劑(WDT)是20世紀(jì)末在水分散性粒劑(WDG)[2]、片劑(T)[3]以及泡騰片劑(EVT)[4]基礎(chǔ)上研發(fā)出來(lái)的農(nóng)藥固體新劑型，集三者優(yōu)點(diǎn)于一身，同時(shí)對(duì)環(huán)境友好，三種組分同時(shí)分析檢測(cè)未見(jiàn)報(bào)道。

采用高效液相色譜外標(biāo)法分析22%苯·五氟·硝水分散片劑中各有效成分，結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)便，快速，重現(xiàn)性好。定量準(zhǔn)確易于車間大批量生產(chǎn)檢測(cè)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀 器

儀器：1260 Infinity Ⅱ高效液相色譜儀，安捷倫；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器。

色譜柱：ZORBAX SB-C18(250×4.6 mm，5 μm)不銹鋼柱；數(shù)據(jù)處理：安捷倫Chemstation工作站；過(guò)濾器：濾膜孔徑約0.45 μm。

1.2 試劑和溶液

乙腈(色譜純)；水(新蒸二次蒸餾水)；磷酸(分析純)；苯噻酰草胺標(biāo)樣(已知準(zhǔn)確質(zhì)量分?jǐn)?shù)，≥98.0%)；五氟磺草胺標(biāo)樣(已知準(zhǔn)確質(zhì)量分?jǐn)?shù)，≥98.0%)；硝磺草酮標(biāo)樣(已知準(zhǔn)確質(zhì)量分?jǐn)?shù)，≥98.0%)；22%苯·五氟·硝水分散片劑樣品，山東勝邦綠野化學(xué)有限公司。

1.3 色譜操作條件

流動(dòng)相：乙腈+水=50+50(磷酸調(diào)pH 3.0)(V/V)；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；

波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣量：10 μL；

保留時(shí)間：硝磺草酮約4.8 min；五氟磺草胺約6.5 min；苯噻酰草胺約11.8 min。

圖1 硝磺草酮、五氟磺草胺和苯噻酰草胺樣品液相色譜圖

上述液相色譜條件系典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)對(duì)給定操作參數(shù)做適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取0.0125 g(精確至0.0002 g)五氟磺草胺標(biāo)樣和0.0375 g(精確至0.0002 g)硝磺草酮標(biāo)樣置于兩個(gè)25 mL容量瓶中，向兩個(gè)容量瓶中分別加入約20 mL乙腈，放在超聲波中處理10 min，取出冷至室溫。用乙腈稀釋至刻度，搖勻；準(zhǔn)確稱取0.045 g(精確至0.0002 g)苯噻酰草胺標(biāo)樣于50 mL容量瓶中，用移液管準(zhǔn)確移取5 mL五氟磺草胺標(biāo)樣溶液和5 mL硝磺草酮標(biāo)樣溶液于此容量瓶，用乙腈稀釋至刻度，搖勻備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取約含0.045 g(精確至0.0002 g)苯噻酰草胺的試樣，置于50 mL容量瓶中，向容量瓶中加約20 mL乙腈，放在超聲波中處理10 min，取出冷至室溫。用乙腈稀釋至刻度，搖勻過(guò)濾后備用。

1.4.3 測(cè)定

在上述液相色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直到相鄰兩針苯噻酰草胺(五氟磺草胺、硝磺草酮)峰面積相對(duì)變化小于1.0%為止，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.4.4 計(jì) 算

將測(cè)得的兩針試樣溶液及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中苯噻酰草胺(五氟磺草胺、硝磺草酮)峰面積，分別進(jìn)行平均。

試樣中苯噻酰草胺(五氟磺草胺、硝磺草酮)質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1(%)按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：A1——標(biāo)樣溶液中苯噻酰草胺(五氟磺草胺、硝磺草酮)峰面積的平均值

A2——試樣溶液中苯噻酰草胺(五氟磺草胺、硝磺草酮)峰面積的平均值

m1——苯噻酰草胺(五氟磺草胺、硝磺草酮)標(biāo)樣的質(zhì)量，g

m2——試樣的質(zhì)量，g

P——標(biāo)樣中苯噻酰草胺(五氟磺草胺、硝磺草酮)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

色譜柱選用常用的反相填料C18柱，選用乙腈+0.05%磷酸水溶液為流動(dòng)相[5]，以及甲醇+水為流動(dòng)相，經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，最終以乙腈+水=50+50(磷酸調(diào)pH 3.0)(V/V)流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，苯噻酰草胺、五氟磺草胺和硝磺草酮能得到較好的分離，而且峰形好，保留時(shí)間短。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

通過(guò)高效液相色譜儀DAD檢測(cè)器3D光譜數(shù)據(jù)采集，得到三者的紫外吸收光譜圖(圖2)，再綜合考慮樣品檢測(cè)用溶劑、儀器以及雜質(zhì)的影響，采用254 nm為三種物質(zhì)同柱分析的檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖2 硝磺草酮、五氟磺草胺和苯噻酰草胺紫外吸收光譜圖

2.3 線性相關(guān)性

取苯噻酰草胺、五氟磺草胺和硝磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品分別配制5種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述液相色譜條件下分別測(cè)定，以不同濃度下苯噻酰草胺、五氟磺草胺和硝磺草酮的峰面積為縱坐標(biāo)，其對(duì)應(yīng)的苯噻酰草胺、五氟磺草胺和硝磺草酮稱樣量為橫坐標(biāo)做線性回歸曲線。得到苯噻酰草胺回歸方程為y=15262x+298.2，相關(guān)系數(shù)為0.9996；五氟磺草胺回歸方程為y=8668.7x+58.118，相關(guān)系數(shù)為0.9991；硝磺草酮回歸方程為y=22859x-19.135，相關(guān)系數(shù)為0.9997。

表1 精密度測(cè)定結(jié)果

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

對(duì)同一樣品，按照上述分析檢測(cè)方法，連續(xù)進(jìn)行五次測(cè)定，分別計(jì)算有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)、平均值及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，并考察方法的精密度。得到苯噻酰草胺、五氟磺草胺和硝磺草酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.05、0和0.05，變異系數(shù)為0.27%、0和1.61%。

2.5 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

表2 回收率測(cè)定結(jié)果

將除原藥以外的所有助劑混勻，作制劑空白。然后，按制劑標(biāo)稱值在制劑空白中添加有效成分，合成5個(gè)制劑樣品，再按照上述分析方法測(cè)定質(zhì)量分?jǐn)?shù)，計(jì)算回收率，測(cè)得苯噻酰草胺的平均回收率為99.56%，五氟磺草胺的平均回收率為99.58%，硝磺草酮的平均回收率為99.43%。

3 結(jié) 論

本方法以乙腈+水=50+50(磷酸調(diào)pH 3.0)(V/V)溶液為流動(dòng)相，在同一高效液相色條件下測(cè)定復(fù)配制劑中苯噻酰草胺、五氟磺草胺和硝磺草酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，其檢測(cè)結(jié)果的線性關(guān)系、精密度和準(zhǔn)確度均能滿足生產(chǎn)中分析檢測(cè)的要求，并且具有分離效果好，不受雜質(zhì)干擾，而且還有快速、簡(jiǎn)便和準(zhǔn)確的特點(diǎn)，是一種非常實(shí)用且有效的分析檢測(cè)方法。