瑞舒伐他汀對2型糖尿病腎病患者氧化應激及mir-34a/SIRT1表達的影響

劉曉莉

糖尿病腎病為2型糖尿病最嚴重的并發癥，患者主要表現為血流動力學異常與代謝紊亂，是導致糖尿病患者晚期死亡的主要原因。糖尿病腎病的發生與炎性反應、氧化應激等多種途徑所致的血管內皮細胞功能異常、細胞凋亡有關。隨著臨床對他汀藥物研究的不斷深入，已證實他汀類藥物不僅具有血脂調節作用，還具有非依賴降脂的腎臟保護作用，能夠減輕氧化應激損傷[1]。瑞舒伐他汀為強效羥甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑，新型他汀類調脂藥物，生物利用度高，且安全性高，患者耐受性良好。沉默信息調節因子1(silent information regulator 1，SIRT1)為調節機體代謝的重要因子，陶鵬宇等[2]研究指出，SIRT1降低可促進腎臟細胞凋亡。臨床研究顯示，microRNA存在于外周血細胞中，表達水平穩定，mir-34a為mir-34家族成員，具有抑制細胞增殖，促進細胞凋亡的作用[3]。胡豪飛等[4]研究表明，腎組織mir-34a表達與IgA腎病患者腎小球硬化相關，其過程可能與脂代謝紊亂有一定相關性。本研究中2型糖尿病腎病患者采用瑞舒伐他汀治療，觀察患者氧化應激狀態與mir-34a/SIRT1表達水平，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年2月至2019年3月我院收治的2型糖尿病患者95例，采用隨機字母表法分為觀察組(n=47)與對照組(n=48)。觀察組中，男21例，女26例；年齡39～67歲，平均年齡(48.78±9.46)歲；病程5～14年，平均病程(7.65±1.87)年；平均收縮壓(133.48±10.25)mm Hg；平均舒張壓(82.43±6.48)mm Hg；平均體重指數(BMI)(24.62±2.73)kg/m2。對照組中，男19例，女29例；年齡39～67歲，平均年齡(49.43±9.65)歲；病程5～15年，平均病程(7.71±1.53)年；平均收縮壓(131.56±9.79)mm Hg；平均舒張壓(83.36±6.77)mm Hg；平均BMI(24.53±2.89)kg/m2。2組患者一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經我院倫理委員會批準同意。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①糖尿病診斷均符合中華醫學會糖尿病學分會制定的相關標準[5]，且符合糖尿病腎病診斷[6]，24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)>200 μg/min，常規尿檢蛋白陽性；②患者均未合并急慢性感染性疾病、惡性腫瘤或急慢性腎炎；③近1個月內未服用他汀類調脂藥物；④患者均知曉本研究詳情并自愿參與。

1.2.2 排除標準：①合并嚴重肝臟、心臟疾病；②有重度吸煙、嗜酒；③合并自身免疫性疾病；④近1個月內發生糖尿病酮癥酸中毒。

1.3 方法

1.3.1 對照組：采用常規治療，給予患者降糖藥物，指導患者適量運動、低蛋白飲食，控制血壓，維持電解質、酸堿平衡等。

1.3.2 觀察組：在對照組基礎上給予瑞舒伐他汀(生產廠家：江蘇南京正大天晴制藥有限公司生產；國藥準字 H20080670；規格：10 mg)治療，口服，10 mg/次，1次/d。4周為1個療程，連續治療8周。

1.3.3 其他：研究期間2組患者均不給予其他降脂類藥物。

1.4 觀察指標 觀察2組患者血脂水平、血清炎性因子水平、氧化應激指標與mir-34a、SIRT1表達水平。

1.4.1 血脂水平：治療前后于清晨患者空腹狀態下抽取靜脈血3 ml，使用全自動生化分析儀檢測低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)水平。

1.4.2 血清炎性因子水平：治療前后于清晨患者空腹狀態下抽取靜脈血3 ml放入無菌離心管內，離心后取上清液，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)，采用速率散射比濁法測定超敏C-反應蛋白(hs-CRP)。

1.4.3 氧化應激指標：另取3 ml靜脈血采用肝素抗凝，低溫離心后取血漿，采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)含量，采用硫代巴比妥酸顯色法測定丙二醛(MAD)含量。

1.4.4 mir-34a、SIRT1表達水平：將抽取的3 ml靜脈血放入無菌離心管內，室溫狀態下靜置30 min，離心后取血清離心后取上清液，采用免疫印跡法測定SIRT1表達水平。采用Ambion公司提供的mirVana試劑盒從血清中提取RNA，采用ABI公司提供的TaqMan MicroRNA Assay試劑盒將血清RNA逆轉錄后行qPCR反應，將U6作為內部參照。

2 結果

2.1 2組患者血脂水平比較 治療前，2組患者血脂水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，觀察組LDL-C、TC、TG均較治療前下降，且明顯低于對照組(P<0.05)，觀察組HDL-C水平較治療前升高，且明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者血脂水平比較

2.2 2組患者血清炎性因子水平比較 治療前，2組患者血清TNF-α、IL-6、hs-CRP水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，觀察組血清TNF-α、IL-6、hs-CRP均較治療前下降，且各指標水平均明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者血清炎性因子水平比較

2.3 2組患者氧化應激指標比較 治療前，2組患者SOD、MAD水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，觀察組SOD較治療前升高，且明顯高于對照組(P<0.05)，觀察組MAD水平較治療前降低，且明顯低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者氧化應激指標比較

2.4 2組患者mir-34a、SIRT1表達水平比較 治療前，2組患者mir-34a、SIRT1表達水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，觀察組mir-34a表達水平較治療前下降，且低于對照組(P<0.05)，觀察組SIRT1表達水平較治療前升高，且顯著高于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 2組患者mir-34a、SIRT1表達水平比較

3 討論

臨床研究指出，血清TC尤其是LDL-C 水平升高是糖尿病腎病進展的獨立危險因素[7]。血脂異常可導致神內脂肪酸結構發生改變，使腎內縮血管活性物質釋放增多，腎小球血液流變學異常，從而使LDL-C糖化與氧化。Bahmani等[8]指出，防治糖尿病腎病應重視調節血脂水平。瑞舒伐他汀是臨床治療早期糖尿病腎病的藥物，但在臨床期的應用較少。本研究中糖尿病腎病患者采用瑞舒伐他汀治療，結果顯示觀察組LDL-C、TC、TG水平明顯低于對照組，HDL-C水平顯著高于對照組，表明瑞舒伐他汀具有調節糖尿病腎病患者血脂作用。臨床研究指出，過度分泌的TG粒子，血清TG水平與尿蛋白排泄率、腎小球濾過率下降具有明顯相關性，可促進腎小球系膜細胞增生，加速腎炎進展，因此調節血脂水平有助于抑制腎臟疾病[9]。臨床研究發現，瑞舒伐他汀不僅具有腎臟保護作用，還具有良好的抗炎作用[10]。CRP為急性時相反應蛋白，并參與炎性反應過程，IL-6與TNF-α為其合成的調節因子。臨床研究已證實，IL-6與TNF-α水平與組織損傷程度呈正相關[11]。本研究結果顯示，觀察組血清TNF-α、IL-6、hs-CRP水平均明顯低于對照組。這表明瑞舒伐他汀具有顯著的抗炎作用，與相關臨床研究[12]具有一致性。

氧化應激是引發心血管功能異常的一個重要因素，糖尿病腎病患者腎組織的一個病理變化是活性氧濃度升高，增加腎臟負擔，并且能夠引起機體氧化應激反應。研究發現，氧化應激反應增強可對機體造成損傷，加速糖尿病腎病進展[13]。SOD為自由基清除劑，是人體內很重要的抗氧化酶，其水平變化能夠間接反映機體氧自由基清除能力的高低。MDA為脂質過氧化物，其水平可直接反映機體過氧化強度與組織損傷程度。因此評估上述指標，可評估機體氧化應激程度。郭英利等[14]研究指出，瑞舒伐他汀能夠降低慢性心力衰竭患者氧化應激反應。本研究結果顯示，觀察組SOD水平明顯高于對照組，MAD水平明顯低于對照組。表明瑞舒伐他汀可提高糖尿病腎病患者抗氧化應激能力。

Tabuchi等[15]研究顯示冠心病患者與非冠心病患者相比較，內皮祖細胞中miR-34a表達水平上調，而SIRT1表達水平下調，經阿托伐他汀治療后，可在一定程度上下調冠心病患者miR-34a的非正常表達水平，并促進SIRT1正常表達。并指出，miR-34a靶向調控SIRT1蛋白細胞凋亡過程中起重要作用，他汀類藥物能夠調節二者表達。氧化應激損傷可引起miR-34a表達水平上調，SIRT1表達水平下調。SIRT1為miR-34a作用的靶基因之一，在細胞氧化應激過程中能夠保護細胞，抑制細胞凋亡[16]。本研究結果顯示，治療前患者mir-34a表達升高，SIRT1下降，治療后觀察組mir-34a表達水平較治療前下降，且低于對照組，SIRT1表達水平較治療前升高，且顯著高于對照組。表明瑞舒伐他汀能夠調節miR-34a與SIRT1表達。推測瑞舒伐他汀可能通過減輕2型糖尿病腎病患者氧化應激損傷、調節脂代謝紊亂使miR-34a表達水平下調，SIRT1表達水平上調。

綜上所述，瑞舒伐他汀治療糖尿病腎病效果確切，可有效調節患者的血脂水平，降低炎性反應與氧化應激反應，并可在一定程度上調節mir-34a、SIRT1表達，而下調miR-34a表達，上調SIRT1表達反過來可減輕氧化應激損傷。但mir-34a是否通過 SIRT1通路參與氧化應激，本次未進行研究，此外，外周血細胞中miRNA的動態變化與血糖控制效果的關系也值得進一步探討。