CD44及相關細胞因子水平對活動性肺結核診斷及預后評估價值

陳科帆 熊域皎 焦家歡 袁術生

結核病具體的致病分子機制目前并不是十分清楚，研究發現人體免疫功能，特別是細胞免疫在其中發揮了關鍵作用[1]。疾病的不同階段細胞免疫分泌的細胞效應因子可能發生改變，這些變化的細胞因子與疾病進展相關聯，檢測這些免疫細胞因子有助于闡明宿主對抗結核分枝桿菌(MTB)的反應機制，以及評估結核病的預后轉歸[2-3]。白細胞黏附分子(leukocyte adhesion molecules，LAM)CD44分布極為廣泛的細胞表面跨膜糖蛋白，主要參與異質性粘附，例如與淋巴細胞結合后參與細胞偽足形成，促進細胞穿過血管壁，同時對巨噬細胞活化及T、B淋巴細胞分化具有刺激作用。研究顯示，CD44參與了MTB與宿主免疫系統的相互作用，并參與到抗結核的機體免疫反應中[4]。因此，本研究通過觀察活動性肺結核患者外周血CD44表達及上下游相關細胞因子水平變化，探討CD44與活動性肺結核病變發展及預后的關系。

資料和方法

1.研究對象：采用回顧性研究方法，搜集2018年1月至2019年7月于樂山市人民醫院感染科治療的86例活動性肺結核患者作為觀察組，其中，男52例(60.5%)，女34例(39.5%)；年齡范圍19～67歲，平均年齡(40.26±9.54)歲。另選取本院同期健康體檢者40名作為對照組，其中，男23名(57.5%)，女17名(42.5%)；年齡范圍20～66歲，平均年齡(40.22±9.46)歲。觀察組與對照組在性別分布(χ2=0.116，P=0.924)和年齡組成(t=0.107，P=0.932)方面差異無統計學意義。本研究經本院倫理委員會審核通過。

2.納入標準：活動性肺結核診斷參照文獻[5]，初診初治患者。排除存在先天性肺臟發育異常者，并發惡性腫瘤者，并發糖尿病者，并發其他急、慢性感染性疾病或者自身免疫性疾病者。

3.外周血細胞因子表達水平檢測：抽取觀察組治療前和對照組外周血2 ml，1000×g離心10 min，取上層血清，-80 ℃保存待檢。觀察組均給予異煙肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺強化治療 2 個月，異煙肼、利福平、乙胺丁醇鞏固治療4個月，并于治療6個月后抽取外周血2 ml，1000×g離心10 min，取上層血清，-80 ℃保存待檢。所有血液標本送檢驗科，應用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測CD44、γ-干擾素(IFN-γ)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)表達水平。CD44-ELISA試劑盒(批號：20181211)、IFN-γ-ELISA試劑盒(批號：20180914)和TNF-α-ELISA試劑盒(批號：20181203)購自上海江萊生物科技有限公司。按照試劑盒說明書操作完成檢測，簡述如下：每個樣品取待檢血清200 μl加入至96孔板，按照試劑盒要求將稀釋的酶標記檢測抗體加入每個孔中，37 ℃孵育1 h，去除抗體檢測溶液，用試劑盒提供洗滌緩沖液洗滌平板3次，加入酶反應底物，30 min后加入終止液，酶標儀讀取405 nm波長處吸光度值，對照試劑盒標準品計算各樣品的表達水平。

結 果

1.檢測情況：觀察組治療前和治療6個月后CD44、TNF-α和IFN-γ表達水平均明顯高于對照組，觀察組治療6個月后CD44、TNF-α和IFN-γ表達水平均明顯低于治療前(表1)。觀察組CD44表達水平與TNF-α和IFN-γ表達水平呈正相關，差異有統計學意義(r值分別為0.704和0.613，P值均<0.05)。

表1 觀察組和治療組CD44、TNF-α和IFN-γ表達水平的比較

2.預測價值：應用ROC曲線分析CD44表達水平預測活動性肺結核的價值，曲線下面積(AUC)為0.84(95%CI：0.77～0.91)，截斷值為26.74 μmol/L，診斷敏感度為90.3%，特異度為86.4%，見圖1。

圖1 CD44表達水平預測活動性肺結核的ROC曲線

將觀察組患者按治療前CD44表達水平≥26.74 μmol/L和<26.74 μmol/L分為高濃度組(64例)和低濃度組(22例)。高濃度組治療2個月和6個月后痰菌陰轉率分別為76.6%(49/64)和95.3%(61/64)，均明顯高于低濃度組[分別為63.6%(14/22)和81.8%(18/22)]，差異均有統計學意義(χ2值分別為2.972和3.016，P值分別為0.045和0.038)。

討 論

本研究顯示，活動性肺結核患者CD44表達水平明顯高于健康人群，而且經積極抗結核治療后CD44表達會明顯降低。TNF-α和IFN-γ是巨噬細胞發揮抗菌活性的主要效應分子[6]。本研究相關性分析顯示，活動性肺結核患者CD44表達水平與TNF-α和IFN-γ水平呈正相關。張憲波等[4]研究顯示，TNF-α可以誘導CD44高表達，高表達的CD44又可以進一步促進IFN-γ釋放，形成正反饋。上述結果提示，CD44與其下游分子一起參與到機體免疫應答抗結核的過程。由此可見，活動性結核病階段機體免疫應答反應性增強，CD44也會相應的表達增高。ROC曲線分析顯示，CD44取截斷值26.74 μmol/L時，對活動性肺結核的診斷敏感度為90.3%，特異度為86.4%，提示了檢測CD44表達對活動性肺結核診斷具有臨床價值。

研究發現，MTB感染時CD44 表達明顯增高，可增強機體免疫反應[7]。Palaniappan等[8]研究發現，CD44的反應性表達增加可以預示機體免疫對抗MTB的效果。筆者以CD44表達水平26.74 μmol/L為臨界值，將活動性肺結核患者分為高濃度組和低濃度組，結果顯示，CD44高濃度組患者治療2個月后和6個月后痰菌陰轉率均明顯高于低濃度組，說明了CD44高水平表達可預示患者好的預后。本研究顯示，經過強化和鞏固抗結核治療后，活動性肺結核患者CD44表達水平會相應降低，可能是由于抗結核治療后機體細菌載量減少和炎癥反應減輕，對CD44的刺激表達也就相應減弱。CD44表達的詳細調控機制及其在機體內的動態變化規律還有待進一步研究。