華蟾素聯合化療在食管癌中對人端粒逆轉錄酶表達的影響

楊 柳 洪永貴 胡彥偉 郭君蘭

(安陽市腫瘤醫院腫瘤內科 安陽 455000)

食管癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，全世界每年約有30萬人死于該病。我國是食管癌高發地，每年病死人數可達15萬左右，其中太行山脈一帶，即林州市又為全國發病率之最[1]。目前關于食管癌發病機制考慮與上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)相關。EMT是腫瘤侵襲過程中的核心事件，侵襲性較低的上皮表型細胞轉化為侵襲性較高的間質表型細胞是導致食管癌發生侵襲與轉移的主要因素[2]。華蟾素作為中藥抗腫瘤的重要成員，已被廣泛應用于消化道腫瘤的治療。現今已有大量基礎實驗證實[3]，華蟾素可以通過對多種分子信號傳導通路的影響，抑制腫瘤細胞的增殖、分化，并誘導其凋亡，顯著降低瘤細胞的增殖及遠處侵襲能力，對多種中晚期腫瘤均有顯著的療效，并能減輕癌痛，緩解終末期病人痛苦，與化療聯合使用，增加了抗腫瘤療效，同時降低化療毒副反應。人端粒酶由人端粒逆轉錄酶(hTERT)，人端粒酶RNA組(hTR)及人端粒酶相關蛋白(hTEP1)組成[4]。由此可知，人端粒逆轉錄酶(hTERT)是食管癌侵襲轉移的重要分子蛋白酶。本文收集2018年9月～2019年9月我院食管癌中應用華蟾素聯合化療及單純化的患者的外周血，利用RT-PCR法檢測食管癌患者外周血中的人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)mRNA陽性表達率，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集安陽市腫瘤醫院在2018年9月～2019年9月收治的30例華蟾素注射液聯合化療的食管癌患者作研究資料。聯合組男17例(56.6%)，女13例(43.4%)，中位年齡64歲(42～90歲)。并隨機收集同一時期單純化療的食管癌患者30例作對照組。對照組男18例(60%)，女12例(40%)，中位年齡61歲(38～87歲)。兩組資料在性別、年齡、分期上無統計學差異。

1.2 方法

收集兩組病例：(1)一般情況包括年齡、性別、分期；(2)兩組資料1周期治療后外周血中的人端粒酶逆轉錄酶(hTERTmRNA)水平。

外周血(hTERTmRNA)檢測方法：(1)收集兩組病人治療1周期治療后的外周靜脈血5ml，抗凝處理(EDTANA2)；(2)采用RT-PCR法行mRNA檢測提取；(3)提取出mRNA含量在紫外分光度計上測定260nm和280nm的吸光度值，并計算260/280的值和RNA的濃度；(4)根據hTERT-mRNA的引物進行mRNA擴增；(5)利用熒光定量分析hTERT-mRNA的含量(用拷貝數/ml表示)。

1.3 統計學方法

采用統計學軟件SPSS13.0對數據進行處理，兩組計數資料采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

聯合用藥組外周血 hTERT MRNA陽性率53.3%(16/30)，單純化療組為86.7%(26/30)，聯合用藥組與化療組比較明顯降低(P<0.05)，見表1。

表1 食管癌外周血hTERT mRNA表達與臨床相關參數的關系[n(%)]

3 討論

食管癌是危害安陽地區民眾健康的重要殺手，但目前其治療效果尚不盡如人意。據不完全統計，食管癌手術治療的5年生存率小于30%，放療的5年生存率小于20%，而晚期食管癌化療的5年生存率不足5%。因此積極尋找新的治療手段和治療模式是提高生存率的重中之重。

端粒酶是一種具有逆轉錄活性的核糖核蛋白。目前研究提示，它與腫瘤的增值、分化和衰老有密切關系，與腫瘤發生發展密切相關，可以作為診斷腫瘤轉移及預后的指標。華蟾素作為中藥抗腫瘤的重要成員，已被廣泛應用于消化道腫瘤的治療[5]。華蟾素通過影響hTERT-mRNA表達水平，從而降低腫瘤復發轉移的研究目前尚無相關報道。本研究補充了相關研究的空白，實驗結果提示華蟾素聯合化療組外周血中hTERT MRNA陽性率53.3%(16/30)，單純化療組為86.7%(26/30)。實驗證明，華蟾素聯合化療較單純化療組，其外周血中hTERT mRNA的陽性表達率明顯降低。因此，華蟾素聯合化療能更好抑制腫瘤發生發展，降低腫瘤侵襲力，提高患者療效，同時降低化療毒副反應，改善患者預后。由上述數據分析可知，食管癌患者血漿中hTERT mRNA的表達與性別及年齡無關，與臨床分期及淋巴結轉移情況相關[6]。因此臨床上通過檢測外周血中hTERT mRNA，對食管癌早期診斷，近期療效及預后判斷均有一定提示作用。

綜上所述，本課題通過研究華蟾素聯合化療對食管癌患者外周血內hTERT-mRNA表達水平的差異性，探討華蟾素聯合化療對腫瘤侵襲能力及臨床預后的影響，從而為提高食管癌治療效果和改善患者生活質量尋求更多治療方法。華蟾素注射液聯合化療提高了食管癌患者生活質量，減輕了化療痛苦，增強機體免疫力，延長了生存期，臨床應用安全有效，值得為臨床所推廣。