飼料中蘇丹紅的測定方法及儀器適用性驗證

蔣婷婷，鄭金星

（浙江福立分析儀器股份有限公司，浙江臺州317500）

蘇丹紅是一種由親脂性偶氮化合物合成的紅色染料，并非食品添加劑，被廣泛應用于溶劑、油、蠟、汽油的增色以及鞋、地板等增光。由于蘇丹紅對食品具有染色功能，而且比天然色素價格低廉且染色牢固，導致一些廠商受利益驅使仍違禁使用。而在禽用飼料中，使用蘇丹紅會使禽類所產的蛋黃顏色發紅，人食用后會在體內緩慢蓄積，對人體的肝腎器官具有明顯的毒性作用。我國及歐盟（EU）等國家已禁止蘇丹紅在食品及飼料中添加。

在食品方面有關蘇丹紅的檢測方法有國家標準2005《食品中蘇丹紅染料的檢測方法高效液相色譜法》及歐盟標準方法《辣椒粉及以辣椒為主要成分的產品中蘇丹紅和胭脂樹橙的含量分析》。在飼料方面我國農業部在2007年頒布了關于使用高效液相色譜儀測定飼料中蘇丹紅染料的行業標準。本文根據飼料行業標準對某飼料中的蘇丹紅進行檢測，驗證方法以及儀器的適用性。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC5090（配置為LC5090 四元低壓輸液泵、LC5090脫氣機、LC5090自動進樣器、LC5090柱溫箱、LC5090 紫外檢測器、LC5090+色譜工作站），浙江福立分析儀器股份有限公司；KS康氏振蕩器，常州隆和儀器制造有限公司；GT16-3高速臺式離心機，北京時代北利離心機有限公司；CYNS-12氮吹儀，杭州川一實驗儀器有限公司；注射器濾膜（有機系），13 mm×0.45 μm，上海安譜科學儀器有限公司；乙腈，色譜級；蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，純度不低于85.0%，5 g，上海安譜科學儀器有限公司。

蘇丹紅標準貯備液：分別準確稱取蘇丹紅標準品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各10 mg，精確至0.000 1 g，分別置于100 mL容量瓶中，加乙腈超聲至完全溶解并定容至刻度。

蘇丹紅標準中間液：準確移取蘇丹紅標準貯備液10 mL 至100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度配制成濃度為10 μg/mL的蘇丹紅溶液。

蘇丹紅標準工作液：分別準確移取蘇丹紅標準中間液1 mL、2 mL、5 mL、10 mL、20 mL 于100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度配制成濃度分別為0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL 的標準工作液。

1.2 色譜條件

色譜柱：Sapphiresil C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：A相-水，B相-乙腈（0～8 min，B相95%～100%保持20 min，28～29 min；B 相100%～95%保持6 min）；流速：1 mL/min；柱溫：40℃；進樣體積：10 μL；檢測波長：蘇丹紅Ⅰ478 nm，蘇丹紅Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ520 nm。

1.3 樣品前處理

準確稱取某飼料樣品10 g（精確至0.001 g）置于150 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL乙腈，置于振蕩器振蕩提取30 min，取上清液于5 000 rpm 下離心3 min，靜置后取上清液5 mL，設置氮吹儀水浴溫度50℃，用氮氣吹干后加1 mL乙腈超聲30 s，過孔徑為0.45 μm的有機濾膜，濾液根據上述色譜條件上機測定。

2 結果與分析

2.1 標準曲線

將0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL的標準工作液按1.2中的色譜條件進行測定，外標法定量。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，所得標準曲線線性關系良好，相關系數均大于0.999 5（見表1），符合定量要求。

表1 蘇丹紅的標準曲線

2.2 檢出限

經計算，基線噪音為32.8 μAU，當蘇丹紅濃度為0.02 μg/mL 時，S/N=3.1，經計算換算，該方法檢出限為0.02 mg/kg，達到了NY/T 1258-2007《飼料中蘇丹紅染料的測定高效液相色譜法》0.5 mg/kg的要求。

2.3 精密度

對0.5 μg/mL 的標準溶液連續進樣7 次，考查儀器的精密度，保留時間和峰面積的重復性結果如表2 所示。保留時間RSD 在0.039%～0.047%之間，峰面積RSD 在0.152%～0.410%之間，儀器的精密度良好（見表2）。

表2 重復性結果（n=7）

2.4 樣品及加標回收率

對某飼料進行蘇丹紅檢測，經保留時間比對，蘇丹紅四組分均未檢出。同時對某飼料進行加標，加標濃度為0.5 μg/mL，加標回收率結果見表3，色譜圖見圖1、圖2。

圖1 某飼料未加標色譜圖

圖2 某飼料加標后色譜圖

表3 回收率結果

3 結論

采用福立高效液相色譜儀LC5090 低壓梯度系統測定飼料中的蘇丹紅，具有靈敏度、精密度和準確度高的特點，滿足NY/T 1258-2007《飼料中蘇丹紅染料的測定高效液相色譜法》的檢測要求。四種蘇丹紅分離度良好，標準曲線線性度均大于0.999 5，儀器檢出限計算值為0.02 mg/kg。連續進樣7次，四種蘇丹紅的保留時間和峰面積RSD分別在0.039%～0.047%和0.152%～0.410%，儀器精密度良好。對某飼料進行蘇丹紅檢測，檢測結果未檢出四種組分，樣品的加標回收率在92%～103%。使用該行業標準測定飼料中的蘇丹紅靈敏度高，分離度好，且儀器測定結果準確可靠，儀器適用性好。