復合芽孢桿菌對蛋雞糞便微生物及蛋品質的影響

萬學濟，龔 萍，楊 宇，童新紅，李中心，喻 婷，葉勝強，陳 星，王麗霞，凌明湖，陳 潔，錢運國

（武漢市農業科學院，武漢 430208）

中國是畜禽養殖大國，也是獸用抗菌藥物生產和使用大國。獸用抗菌藥物在防治動物疾病、提高養殖效益、保障畜禽產品有效供給中，發揮了重要作用。但是，由于市場秩序不夠規范、養殖環節使用不盡合理、從業人員科學用藥意識不強、公眾對細菌耐藥性認知度不高等問題依然存在，嚴重威脅了畜禽產品質量安全和公共衛生安全，給人類和動物健康帶來隱患［1，2］。中國已于 2020 年 7 月 1 日起全面禁止促生長藥物飼料添加劑的使用。大量的研究表明，在畜禽日糧中添加一定劑量的益生菌，可與腸黏膜共同構成一道保護屏障，阻止細菌、病毒和食物抗原的入侵，進而促進宿主健康［3］。芽孢桿菌可以形成芽孢，具有抗逆性強、耐酸堿、耐高溫高壓等特性，是畜禽養殖中研究和使用較多的一類益生菌［4］。其中地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）均已在中國得到批準可用作飼料添加劑。在家禽中，芽孢桿菌具有提高動物生產性能，促進營養物質消化吸收，提高飼料利用率，減少動物腸道中的有害菌群，調節動物胃腸道微生態平衡，提高抗病力等多種作用［5］。為此，試驗選取前期研制的一種復合芽孢桿菌添加到蛋雞飼糧中，研究其對蛋雞腸道微生物及蛋品質的影響，旨在為益生菌在蛋雞生產中的推廣應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

復合芽孢桿菌由實驗室研制（地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌含量分別為5×109CFU/g、2×1010CFU/g）。

1.2 試驗設計

選取同一批次兩棟海蘭褐蛋雞（30 周齡），一棟為對照組（10 416 只），一棟為試驗組（10 224 只）。對照組飼喂基礎日糧，試驗組在基礎日糧中添加1 g/kg 復合芽孢桿菌。

1.3 飼養管理

采用蛋雞“124”標準化養殖模式，即1 棟全封閉式雞舍，層疊式籠養蛋雞2 萬只以上，生產過程采用自動喂料機、自動集蛋雞、傳送帶清糞機、濕簾風機4 機配套進行生產蛋雞的高效健康養殖模式。試驗期3 個月。

1.4 指標檢測

1）糞便微生物檢測。無菌采集新鮮糞便保存于冰盒中，每組5 個重復，每月測定一次。在超凈臺內稀釋糞樣，選擇2~3個適宜稀釋度分別接種于營養瓊脂、乳酸菌培養基瓊脂、伊紅美藍瓊脂平板、SS 瓊脂培養基（所用培養基均購自青島海博生物技術有限公司），分別測定菌落總數、乳酸菌、大腸菌群和“沙門+志賀”氏菌的數量；選擇2~3 個適宜稀釋度，80 ℃水浴15 min 后，接種于營養瓊脂平板，測定芽孢桿菌的數量。采用平板菌落計數法進行統計，結果用1 g糞便中細菌數量的對數值［log（CFU/g）］表示。

2）蛋品質測定。每組隨機采集新鮮雞蛋120枚，于12 h 內進行蛋品質測定，每月測定一次。采用電子天平測定蛋重，用數顯卡尺、數顯千分尺分別測定蛋的縱長、橫寬及蛋殼厚度；用鹽水漂浮法測定蛋比重，蛋殼強度測定儀（ROBOTMATION）測定蛋殼強度，蛋品質測定儀（ROBOTMATION）測定蛋白高度、哈氏單位和蛋黃顏色，用電子天平測定蛋黃重；并記錄肉斑、血斑及雞蛋破損情況。

1.5 數據處理

試驗數據用SPSS 13.0 進行統計分析，結果用“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 復合芽孢桿菌對蛋雞糞便微生物的影響

由圖1 可以看出，在0 d 時，試驗組與對照組雞舍糞便中的細菌總數、大腸菌群、芽孢桿菌、乳酸菌及“沙門+志賀”氏菌的數量無顯著差異（P>0.05）（圖1A）；在30 d 時，與對照組相比，試驗組“沙門+志賀”氏菌數顯著降低（P<0.05），芽孢桿菌數顯著增加（P<0.05）（圖1B）；在 60 d 時，與對照組相比，試驗組細菌總數、大腸菌群數顯著降低（P<0.05），芽孢桿菌數顯著增加（P<0.05）（圖1C）；在90 d 時，與對照組相比，試驗組細菌總數、大腸菌群、“沙門+志賀”氏菌數顯著降低（P<0.05）（圖1D）。從0~90 d 總體上看，試驗組蛋雞糞便中的細菌總數、大腸菌群和“沙門+志賀”氏菌的數量呈下降趨勢，芽孢桿菌數呈上升趨勢，90 d 時糞便中“沙門+志賀”氏菌數極顯著低于0~60 d（P<0.05），芽孢桿菌數顯著高于 0~30 d（P<0.05）。結果表明，在日糧中添加復合芽孢桿菌，可顯著降低蛋雞糞便中的有害微生物數量，改善蛋雞腸道健康。

2.2 復合芽孢桿菌對蛋品質的影響

由圖2 可以看出，在0、30 d 時，試驗組與對照組的蛋重、蛋形指數、蛋比重、蛋黃比率、蛋殼厚度、蛋殼強度、蛋黃顏色、蛋白高度、哈氏單位均無顯著差異（P>0.05）（圖2A、2B）；在60 d 時，試驗組的蛋黃比率顯著高于對照組（P<0.05）（圖2C）；在90 d時，試驗組的蛋黃顏色顯著高于對照組（P<0.05）（圖2D）；在30~90 d，試驗組的蛋殼強度、蛋白高度和哈氏單位均有高于對照組的趨勢，但差異不顯著（P>0.05）。從0~90 d 總體上看，試驗組的蛋重、蛋白高度與哈氏單位有增加的趨勢，但差異不顯著（P>0.05）；60 d 的蛋黃比率極顯著高于其他時期（P<0.05），90 d的蛋殼強度顯著高于0 d（P<0.05），90 d 的蛋黃顏色顯著高于其他時期（P<0.05）。結果表明，在日糧中添加復合芽孢桿菌，可顯著提高雞蛋的蛋黃比率、蛋黃顏色，具有增加蛋殼強度、蛋白高度和哈氏單位的潛力。

3 小結與討論

3.1 復合芽孢桿菌對蛋雞糞便微生物的影響

動物腸道微生物區系的平衡對于動物的生長發育有著直接的影響。在飼養管理中不可避免地會導致大腸桿菌、沙門氏菌等病原菌進入畜禽腸道內繁殖。進入腸道的病原菌會通過產生毒素和有害物質減少腸道微生物的種類與數量，降低腸道微生物的多樣性［6］。腸道微生物多樣性的減少會降低腸內穩態和抵御病原菌的能力。益生菌主要通過與腸道微生物之間、與宿主之間的相互作用而發揮作用［7］。Li 等［8］報道，芽孢桿菌能抑制腸道有害菌的繁殖，促進腸道有益菌的生長；郭軍蕊等［9］研究發現，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可降低蛋雞糞和盲腸大腸桿菌數量，增加腸道雙歧桿菌數量。本研究中，在30 d 時，試驗組“沙門+志賀”氏菌數顯著降低（P<0.05），芽孢桿菌數顯著增加（P<0.05）；在60 d 時，試驗組細菌總數、大腸菌群數顯著降低（P<0.05），芽孢桿菌數顯著增加（P<0.05）；在90 d 時，試驗組細菌總數、大腸菌群、“沙門+志賀”氏菌數顯著降低（P<0.05）。表明在日糧中添加復合芽孢桿菌，可顯著降低蛋雞糞便中的大腸菌群、“沙門+志賀”氏菌等有害微生物數量，增加芽孢桿菌等有益微生物的數量，進而改善蛋雞腸道健康。

3.2 復合芽孢桿菌對蛋品質的影響

蛋品質是影響商品蛋經濟效益的重要因素之一。哈氏單位是衡量蛋的新鮮度和蛋清質量的重要指標，蛋白高度和哈氏單位越高，蛋清品質越好，蛋越新鮮。Abdelqader 等［10］發現，在高產蛋雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌，可明顯提高蛋雞的蛋殼厚度、加深蛋黃的顏色，從而改善蛋殼的品質，使破蛋率降低，進一步提高養殖戶的經濟收入；雷凱［11］研究表明，蛋雞飼糧中添加地衣芽孢桿菌可以改善蛋殼厚度、蛋殼強度、哈夫單位、蛋白高度和蛋黃顏色；郭軍蕊等［9］研究顯示，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可顯著提高雞蛋的蛋黃顏色。本研究中，在60 d 時，試驗組的蛋黃比率顯著高于對照組（P<0.05）；在90 d 時，蛋黃顏色顯著提高（P<0.05）；0~90 d，試驗組的蛋重、蛋白高度與哈氏單位有增加的趨勢，但差異不顯著（P>0.05）。結果表明，在日糧中添加復合芽孢桿菌，可顯著提高雞蛋的蛋黃比率、蛋黃顏色，具有增加蛋殼強度、蛋白高度和哈氏單位的潛力。

在蛋雞日糧中添加復合芽孢桿菌，可顯著降低蛋雞糞便中的大腸菌群、“沙門+志賀”氏菌等有害微生物數量，增加芽孢桿菌等有益微生物的數量，進而改善蛋雞腸道健康；可顯著提高雞蛋的蛋黃比率、蛋黃顏色，具有增加蛋殼強度、蛋白高度和哈氏單位的潛力，進而改善蛋品質。