HS-SPME-GC-MS 法分析烏梅與炮制品中揮發性成分

李書帆，劉 毅，江漢美，劉天琪

（湖北中醫藥大學/湖北省藥用植物研發中心，武漢 430065）

烏梅為薔薇科植物梅（Prunus mume）的干燥近成熟果實。夏季果實近成熟時釆收，低溫烘干后悶至色變黑。烏梅味酸、澀，性平，歸肝、脾、大腸經，具有斂肺、澀腸、生津安蛔的功效。臨床用于肺虛久咳、久瀉久痢、虛熱消渴、蛔厥嘔吐腹痛［1］。現代藥理研究表明，烏梅具有抑菌、鎮咳、抗病毒、鎮靜催眠抗驚厥等藥理作用［2］。烏梅中主要含有有機酸、萜類、甾醇、黃酮類、揮發性成分等［3］。臨床上多使用烏梅、烏梅炭和醋烏梅進行用藥，目前國內外尚未見采用頂空固相微萃取法（HS-SPME）與氣相色譜-質譜聯用技術（GC-MS）相結合對烏梅和烏梅炮制品的揮發性成分進行分析對比的研究報道。本研究首次使用HS-SPME-GC-MS 對烏梅及烏梅炮制品的揮發性成分進行分析比較，討論炒炭及醋制對烏梅的揮發性成分的影響，旨在從揮發性成分的角度為臨床合理用藥提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試藥

烏梅藥材（批號：2020092218）購于老百姓大藥房，經湖北中醫藥大學生藥教研室楊紅兵教授鑒定為梅的干燥近成熟果實。米醋購于北區超市（佛山市海天調味食品股份有限公司，批號：BM0921115C）。

1.2 儀器

手動固相微萃取（SPME）進樣裝置，德國IKA 公司；Agilent6890/5973 型氣相-質譜-計算機聯用儀，美國 Hewlett-Packard 公司；65 μm 聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯（PDMS/DVB）萃取纖維頭，美國Supelco公司；ALC-210.2 型電子天平，北京賽多利斯天平有限公司，d=0.01 g。

1.3 方法

1.3.1 醋制烏梅的制備 參照中藥炮制學第十版烏梅的炮制方法，取60 g 烏梅，加6 g 米醋拌勻，悶潤至醋被吸盡，置適宜容器內，密閉，隔水加熱2~4 h，取出干燥。

1.3.2 烏梅炭的制備 取凈烏梅置炒制容器內，用武火加熱，炒至皮肉發泡，表面呈焦黑色，取出晾涼，篩去碎屑。

1.3.3 頂空固相微萃取條件 取烏梅樣品1.2 g，置于 15 mL 頂空瓶中，插入裝有 65 μm PDMS/DVB 萃取纖維頭的手動進樣器，在60 ℃下平衡10 min 后，再壓縮手柄伸出萃取頭萃取15 min，解析附時間4 min。

1.3.4 GC-MS 色譜與質譜條件

1）GC色譜條件。HP-5MS石英毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；從50 ℃開始升溫，以10 ℃/min升至 230 ℃；載氣為高純度 He（99.999%），柱流速0.8 mL/min，進樣口溫度230 ℃；不分流進樣。

2）MS條件。EI源；離子源溫度230 ℃，電離電壓70 eV；四級桿溫度150 ℃；掃描質量范圍35~550m/z。

2 結果與分析

按既定的試驗條件進樣，查閱有關文獻，按照出峰數、相似度與相對百分含量進行定性與定量分析，離子流結果見圖1，烏梅與其炮制品揮發性成分見表1。

2.1 烏梅生品揮發性成分分析

由表1 可知，從烏梅生品中檢測出32 個峰，鑒定出了23 種揮發性成分，占總量的88.90%，其中主要為醛類成分，占烏梅揮發性成分的60.30%。烏梅中揮發性成分最高的是苯甲醛，占揮發性成分的48.45%，其次為崖柏酮（6.63%）、糠醛（6.32%）、壬醛（5.10%）、苯甲醇（4.31%）等。崖柏酮具有抗菌消炎、抗過敏及促進血液循環的作用，促進支氣管擴張，對皮膚有保健作用，許多香精含有該化合物，是醫藥和防腐的重要材料［4］。桉油精具有抗菌、抗癌、抗炎、抗氧化、殺菌、殺蟲等多種藥理活性［5］。

2.2 醋烏梅揮發性成分分析

醋烏梅中檢測出18 個成分，鑒定出了14 種揮發性成分，占總量的82.52%，其中主要為醛類成分，占醋烏梅揮發性成分的71.59%。醋烏梅成分和生品對比減少了13 種成分，新增4 種成分，分別為異戊酸、雙戊烯、苯乙醛、鄰甲酚。異戊酸具有抑菌作用，是一種天然抗菌產品［6］。雙戊烯具有良好的祛痰、鎮咳、抑菌作用，臨床上用于利膽、溶石、祛除腸道氣體和增加消化液體積［7］。苯乙醛具有一定抗菌和抗氧化作用［8］。鄰甲酚對硝化細菌具有一定的抑制作用［9］。

表1 烏梅及其炮制品的揮發性成分

2.3 烏梅炭揮發性成分分析

從烏梅炭當中檢測出28 個成分，鑒定出18 種揮發性成分，占總量的91.93%，其中主要成分為醛類，占烏梅炭揮發性成分的80.01%。烏梅炭中揮發性最高的同為苯甲醛，占揮發性成分的58.57%。與生品對比，減少了13 種成分，新增8 種成分，分別為苯乙醛、2-乙酰基呋喃、2-（正庚酰）噻吩、2-吡咯甲醛、甲酸芐酯、山梨酸甲酯、1-苯基-1，2-丙二酮、水楊酸甲酯。烏梅炭中特有的水楊酸甲酯具有抗炎、鎮痛、促滲等作用［10］。

2.4 烏梅與其炮制品的共有揮發性成分分析

烏梅生品和醋制烏梅及烏梅炭中有9 種共有揮發性成分，分別為苯甲醛、苯甲醇、苯酚、乙酸芐酯、乙酸乙酯、2-甲基丁酸、糠醛、愈創木酚、壬醛，共占其總揮發性成分的70.65%、79.47%、87.64%。其中苯甲醛具有解熱鎮痛、抗癌、潤腸通便的功效［11］。苯甲醇可作為抗菌劑，具有中等抗菌活性，用于抑制革蘭陽性菌、霉菌、酵母菌［12］。乙酸乙酯有水果香味，具有抗血栓［13］、抗炎［14］以及對LPS 誘導的急性肝損傷有保護作用［15］。2-甲基丁酸有一定的抑菌作用［16］。愈創木酚具有很好的殺菌作用［17］。壬醛對細菌和真菌具有明顯的抑制作用［18］。

3 討論

在烏梅生品及2 種炮制品的揮發性成分中，烏梅生品含有較多崖柏酮，而醋烏梅和烏梅炭中均無此成分。壬醛、2-甲基丁酸和愈創木酚在生品中含量較高，并含有桉油精。醋制烏梅中含有特有的雙戊烯，烏梅炭中苯乙醛、乙酸乙酯和苯甲醇含量較高，說明烏梅生品長于抑菌殺蟲消炎，醋烏梅長于鎮咳固澀抗菌，而烏梅炭長于抗炎鎮痛抗血栓，且炒炭后苯酚含量降低，有緩和藥性減少刺激的作用［19］。

試驗通過HS-SPME-GC-MS 技術對烏梅及其炮制品進行了揮發性成分分析，結果顯示烏梅生品及炮制品的揮發性成分在炮制前后藥理作用變化較大，且各有特點。新增及減少的化學成分可能因為在醋制與炒炭過程中發生了化學變化和物理變化，如還原反應和氧化反應，具體原因仍需進一步研究［20］。