肝螺桿菌感染促進(jìn)高脂飼料誘導(dǎo)的小鼠非酒精性脂肪性肝病進(jìn)展

沈 宸，吳志浩，殷 俊，朱立麒，張 泉,3

(1．揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，揚(yáng)州 225009；2．江蘇高校動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，揚(yáng)州 225009；3．揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院，揚(yáng)州 225001)

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一種較為常見(jiàn)的慢性肝病，在全球包括亞洲人群的患病率均約為25%[1-2]。而且隨著肥胖及糖尿病患者的不斷增加，NAFLD患病率可能將持續(xù)升高。雖然大多數(shù)NAFLD患者早期僅有較輕微的癥狀，但仍有部分患者可能向非酒精性脂肪性肝炎及肝纖維化進(jìn)展，最終發(fā)展為肝硬化，甚至是肝癌。然而，目前NAFLD的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，也無(wú)特異性治療方法及特效藥物。另一方面，腸道菌群被認(rèn)為是一個(gè)內(nèi)源性的致病因子，參與肥胖、胰島素抵抗和NAFLD等代謝疾病的發(fā)生與發(fā)展[3-4]。肝螺桿菌（Helicobacter hepaticus，H.h）是腸道菌群的一種，可以感染多種品系的小鼠，引起肝臟和腸道疾病[5]，在人類(lèi)肝臟中也有檢出[6]。本文旨在模擬人類(lèi)肝臟復(fù)雜的內(nèi)環(huán)境，研究H.h感染對(duì)高脂飼料誘導(dǎo)小鼠NAFLD發(fā)生的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及菌株

6周齡SPF級(jí)雄性BALB/c小鼠20只，體質(zhì)量為17～18 g，購(gòu)自上海靈暢生物科技有限公司[SCXK（滬）2018-0003]，飼養(yǎng)于揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心SPF級(jí)設(shè)施房[SYXK（蘇）2017-0044]。環(huán)境溫度為（24±2）℃，相對(duì)濕度為（40～60）%，光照周期為明暗時(shí)間各12h。實(shí)驗(yàn)前H.h檢測(cè)呈陰性。H.h細(xì)菌（ATCC 51449）購(gòu)自美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心，保存于－80℃。

1.2 主要試劑及儀器

蘇木精（貨號(hào)M1051740500）和伊紅（貨號(hào)71014160）購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；天狼猩紅染液購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司（貨號(hào)S8060）；飽和油紅O染液（貨號(hào)G1015）購(gòu)自武漢塞維爾生物科技有限公司；三酰甘油（triglyceride，TG）（貨號(hào)A110-1-1）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（glutamic-pyruvic transaminase，ALT）（貨號(hào)C009-1-1）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（glutamicoxaloacetic transaminase，AST）檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)C010-1-1）購(gòu)自南京建成科技有限公司；多聚甲醛（貨號(hào)30525-89-4）購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司；RNAiso PLUS（TRIzol）（貨號(hào)108-95-2）和PrimeScript RT Regent Kit with gDNA Eraser（貨號(hào)R323-01）購(gòu)自日本TAKARA公司；Universal SYBR Green Master（貨號(hào)4913850001）購(gòu)自上海羅氏制藥有限公司；PCR引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成；兔抗鼠α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha-smooth muscle actin，α-SMA）、膠原蛋白Ⅰ型（collagen typeⅠ，CollagenⅠ）抗體購(gòu)自上海塞維爾生物科技有限公司；鏈霉親和素生物素標(biāo)記的羊抗兔二抗購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司；細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（貨號(hào)DP302）購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司；高脂飼料（脂肪含量為70%）購(gòu)自南京君科生物工程有限公司；酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)BioTek公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

20只小鼠隨機(jī)分為4組，每組5只，分別為空白對(duì)照組、高脂飲食（high fat diet，HFD）組、H.h組和H.h+HFD組。各組小鼠雖飼養(yǎng)于同一設(shè)施環(huán)境中，但通過(guò)分區(qū)域飼養(yǎng)避免組間交叉感染。H.h組和H.h+HFD組一次性灌胃H.h標(biāo)準(zhǔn)菌株菌液0.2 mL（1×108CFU/mL）。H.h灌胃后飼養(yǎng)5 d，提取小鼠糞便DNA，PCR法檢測(cè)16 S rRNA和cdtB基因以確認(rèn)感染。PCR引物序列如下：16SrRNA的上游引物為5'-GCATTTGAAACTGTTACTCTG-3'-，下游引物為5'-CTGTTTTTCAAGCTCCCC-3'-；cdtB基因的上游引物為5'-ATGAAAGAGACTTTATTGCTTCA-3'，下游引物5'-AGCCTGTGCATACCCTCATA-3’。確認(rèn)感染成功后，HFD組和H.h+HFD組開(kāi)始飼喂高脂飼料（此時(shí)記為造模開(kāi)始），高脂飼料每天進(jìn)行更換；空白對(duì)照組和H.h組飼喂常規(guī)飼料。各組小鼠均飼養(yǎng)12周，動(dòng)物飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理及福利要求。

1.4 血清生化指標(biāo)檢測(cè)

各組小鼠于造模開(kāi)始當(dāng)天及此后的第4、8、12周（本文中第n周均指第n周末）麻醉后頜下取血，每次取400 μL/只。血液于室溫條件下放置1 h后，置于4 ℃冰箱過(guò)夜，然后于4 ℃條件下1000 r/min離心15 min，收集血清。根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)檢測(cè)各組小鼠血清中生化指標(biāo)TG、ALT和AST的含量，用酶標(biāo)儀讀取數(shù)據(jù)。

1.5 代謝及肝指數(shù)檢測(cè)

造模期間每周稱(chēng)量一次小鼠體質(zhì)量，并記錄。于造模開(kāi)始后的第12周，用頸椎脫臼法處死小鼠。小鼠處死前12 h禁食，臨處死前稱(chēng)量小鼠體質(zhì)量，并摘眼球放血；處死后迅速取出肝臟，肉眼觀察其顏色、外形，并稱(chēng)取肝臟質(zhì)量，計(jì)算肝指數(shù)（肝指數(shù)=肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量）。

1.6 肝臟組織病理學(xué)檢測(cè)

分離肝臟后，取相同部位的部分肝組織，分別制作冰凍切片和石蠟切片。冰凍切片用于油紅O染色，石蠟切片用于天狼猩紅染色和HE染色，具體染色步驟根據(jù)各染色試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。然后在普通光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟脂肪堆積、膠原沉積和形態(tài)學(xué)變化，并進(jìn)行肝組織病理學(xué)的等級(jí)評(píng)分。每只小鼠選取3張切片，200倍鏡下隨機(jī)觀察20個(gè)視野，采用2005年美國(guó)非酒精性脂肪性肝炎臨床研究工作組（Clinical Research Network，CRN）提出的標(biāo)準(zhǔn)[7]進(jìn)行NAFLD活動(dòng)度積分（NAFLD activity score，NAS）和肝纖維化評(píng)定，用于反映非酒精性脂肪性肝炎的嚴(yán)重程度。

NAS評(píng)定從3個(gè)方面分別進(jìn)行評(píng)分：①顯微鏡下估計(jì)肝脂肪變性的面積，＜5%為0分，5%～32%為1分，33%～65%為2分，≥66%為3分；②顯微鏡下計(jì)數(shù)有肝小葉炎性反應(yīng)的視野數(shù)，0個(gè)為0分，＜2個(gè)為1分，2～3個(gè)為2分，≥4個(gè)為3分；③肝細(xì)胞氣球樣變性，無(wú)為0分，少見(jiàn)為1分，多見(jiàn)為2分。3項(xiàng)得分相加，總和為1～2分可排除非酒精性脂肪性肝炎，3～4分為非酒精性脂肪性肝炎可能，5～8分確診非酒精性脂肪性肝炎。

采用CRN標(biāo)準(zhǔn)對(duì)肝纖維化進(jìn)行評(píng)定時(shí)，根據(jù)逐漸發(fā)展的纖維化進(jìn)程分為 5級(jí)。①0期：無(wú)纖維化。②1期：竇周纖維化或門(mén)脈周?chē)w維化。1期又被細(xì)分為肝腺泡3區(qū)竇周纖維化輕度（僅在中央靜脈邊緣出現(xiàn)）（1A期）、肝腺泡3區(qū)竇周纖維化重度（1B期）和僅匯管區(qū)竇周纖維化（1C期）。③2期：竇周纖維化合并匯管區(qū)周?chē)w維化。④3期：纖維橋形成。⑤4期：肝硬化。

1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)肝臟組織中相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)

采用TRIzol法提取肝臟組織中總RNA，驗(yàn)證純度后使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后使用GAPDH作為內(nèi)參，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）、IL-1β、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平。PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃30 s，共40個(gè)循環(huán)。PCR引物序列如下：IL-1β上游引物為5'-GCAACTGTTCCTGAACTCAACT-3'，下游引物為5'-ATCTTTTGGGGTCCGTCAACT-3'；IL-6上游引物為5'-TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC-3'，下游引物為5'-TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC-3'；TNF-α上游引物為5'-AACTAGTGGTGCCAGCCGAT-3'，下游引物為5'-CTTCACAGAGCAATGACTCC-3'；TGF-β上游引物為5'-TGCGCTTGCAGAGATTAAAA-3'，下游引物為5'-CTGCCGTACAACTCCAG-TGA-3'；GAPDH上游引物為5'-CCATCACCATCTTCCAGGAG-3'，下游引物為5'-CCTGCTTCACCA-3’。每個(gè)樣本做3次重復(fù)，采用2－ΔΔCt法進(jìn)行結(jié)果分析。

1.8 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肝臟組織中相關(guān)蛋白表達(dá)

選取各組小鼠肝臟組織的石蠟切片，經(jīng)過(guò)枸櫞酸鹽抗原修復(fù)后，用5% BSA封閉，然后加入兔抗鼠α-SMA和CollagenⅠ一抗（工作液體積稀釋比例均為1∶400），4 ℃反應(yīng)16 h。加入鏈霉親和素生物素標(biāo)記的羊抗兔二抗復(fù)合物，37 ℃反應(yīng)30 min，最后使用DAB顯色液顯色。光學(xué)顯微鏡下定性觀察目的蛋白表達(dá)情況，棕色標(biāo)記即為蛋白表達(dá)陽(yáng)性。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 22.0軟件進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)分析，并用GraphPad Prism 8.0軟件制作統(tǒng)計(jì)圖。各實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3次，結(jié)果數(shù)據(jù)用±s表示。多組比較先進(jìn)行方差分析，再采用Bonferroni法進(jìn)行兩兩比較。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠一般情況

在造模飼養(yǎng)過(guò)程中，空白對(duì)照組小鼠生長(zhǎng)及生活習(xí)性正常，毛色光澤；H.h組小鼠被毛日漸粗亂；HFD組和H.h+HFD組小鼠隨著高脂飲食時(shí)間的延長(zhǎng)，被毛日漸疏松且油膩，精神萎靡。各組小鼠體質(zhì)量均逐漸增加，其中HFD組和H.h+HFD組體質(zhì)量增幅較大，與空白對(duì)照組和H.h組相比的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01，圖1）。

圖1 各組小鼠體質(zhì)量變化Figure 1 Body weight of mice in different groups

2.2 小鼠血清生化指標(biāo)變化

小鼠血清生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示，隨著造模時(shí)間延長(zhǎng)，各組小鼠血清中ALT、AST及TG含量均增高。與空白對(duì)照組相比，HFD組和H.h+HFD組ALT和AST值出現(xiàn)明顯升高；H.h+HFD組升高幅度更大，HFD組次之；H.h組也出現(xiàn)升高，但幅度相對(duì)較緩（均P＜0.05，圖3）。與空白對(duì)照組相比，H.h組TG值增加不明顯，但HFD組和H.h+HFD組血清中TG值均明顯升高，H.h+HFD組升高幅度較HFD組更大，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05，圖2）。

2.3 小鼠肝臟外形變化及肝指數(shù)情況

肝臟大體觀察可見(jiàn)：空白對(duì)照組小鼠肝臟表面光滑，色澤鮮紅，質(zhì)韌，邊緣銳利；H.h組小鼠肝臟表面光澤變差，顏色較暗淡；HFD組小鼠肝臟表面顏色偏黃白，有油膩感，邊緣變鈍；H.h+HFD組小鼠肝臟顏色偏黃且暗淡，出現(xiàn)皺縮現(xiàn)象（圖3）。稱(chēng)量肝臟質(zhì)量后計(jì)算肝指數(shù)，結(jié)果顯示，HFD組和H.h+HFD組肝指數(shù)分別為（0.044±0.003）和（0.048±0.002），較空白對(duì)照組（0.038±0.005）和H.h組（0.036±0.003）均明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

2.4 小鼠肝臟組織病理學(xué)變化

HE染色結(jié)果（圖4A）顯示：空白對(duì)照組小鼠肝細(xì)胞呈多邊形，細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，除有少量細(xì)胞出現(xiàn)小泡性脂肪變性外，無(wú)氣球樣變性及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；H.h組有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，呈聚集狀，肝小葉結(jié)構(gòu)稍有紊亂，肝細(xì)胞有少量脂肪變性；HFD組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞脂肪變性較為明顯，以小泡性脂肪變性為主；H.h+HFD組肝細(xì)胞脂肪變性更加嚴(yán)重，為大、小泡混合型脂肪變性，夾雜部分氣球樣變肝細(xì)胞，且可見(jiàn)不同數(shù)量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及點(diǎn)狀壞死灶。

小鼠肝臟組織冰凍切片經(jīng)油紅O染色后觀察肝臟細(xì)胞中脂肪堆積情況（圖4B）。結(jié)果顯示：空白對(duì)照組肝細(xì)胞質(zhì)中脂滴小且極少；H.h組肝細(xì)胞質(zhì)中脂滴小且分布較為分散；HFD組肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有大量紅色脂滴；H.h+HFD組肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)所含脂滴量最多。

圖2 各組小鼠血清生化指標(biāo)的比較Figure 2 Comparison of serum biochemical indexes in mice among the four groups

圖3 各組小鼠肝臟照片F(xiàn)igure 3 Photographs of the livers of mice in the four groups

小鼠肝臟組織石蠟切片經(jīng)天狼猩紅染色后，鏡下觀察肝臟組織中膠原沉積情況（圖4C）。結(jié)果顯示：空白對(duì)照組小鼠肝組織中未見(jiàn)肝纖維化；H.h組僅有竇周纖維化或匯管區(qū)周?chē)w維化（1期）；HFD組出現(xiàn)竇周纖維化合并匯管區(qū)/匯管區(qū)周?chē)w維化（2期）；H.h+HFD組可見(jiàn)纖維橋形成（3期）。

NAS和肝纖維化評(píng)定結(jié)果均顯示，HFD組和H.h+HFD組評(píng)分均明顯高于空白對(duì)照組及H.h組，各實(shí)驗(yàn)組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05，圖4D），且HFD組和H.h+HFD組的NAS評(píng)分值均＞4分，提示這兩組的小鼠出現(xiàn)非酒精性脂肪性肝炎及肝纖維化。

2.5 小鼠肝臟組織中相關(guān)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平

圖4 各組小鼠肝臟組織的病理學(xué)變化Figure 4 Hematoxylin-eosin staining (A), oil red O staining (B) and Sirius red staining (C) of liver tissues as well as the non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) activity score and liver fibrosis relative level (D) in mice of the four groups

實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示，相比空白對(duì)照組，H.h感染和飼喂高脂飼料均可以促進(jìn)小鼠肝臟組織中IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β轉(zhuǎn)錄；其中，H.h+HFD組的IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β轉(zhuǎn)錄水平均明顯高于空白對(duì)照組，且高于H.h組和HFD組（圖5）；各實(shí)驗(yàn)組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

圖5 各組小鼠肝臟組織細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平Figure 5 Transcriptional levels of cytokines in liver tissues of mice in the four groups

2.6 小鼠肝臟組織中相關(guān)蛋白表達(dá)

小鼠肝臟組織的免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示：空白對(duì)照組小鼠肝組織中α-SMA和CollagenⅠ蛋白基本不表達(dá)；H.h組僅在竇周或匯管區(qū)有少量α-SMA和CollagenⅠ蛋白表達(dá)；HFD組在竇周合并匯管區(qū)/匯管區(qū)周?chē)猩倭康摩?SMA和CollagenⅠ蛋白表達(dá)；而H.h+HFD組小鼠肝組織中α-SMA和CollagenⅠ蛋白大量表達(dá)（圖6）。

圖6 各組小鼠肝臟組織中α-SMA和CollagenⅠ的免疫組織化學(xué)結(jié)果（DAB顯色，×200）Figure 6 Immunohistochemical results of α-SMA and CollagenⅠ in liver tissues (DAB staining, ×200)

3 討論

近年來(lái)，隨著人類(lèi)飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的改變，NAFLD的發(fā)病率不斷攀升。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國(guó)成人NAFLD患病率為6%～27%，NAFLD年發(fā)病率為3.4%～9.1%[8-10]。根據(jù)肝組織脂肪變性是否伴有炎性反應(yīng)和纖維化，NAFLD可分為非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪性肝炎相關(guān)性肝硬化3個(gè)階段[11]。NAFLD發(fā)生過(guò)程較為復(fù)雜，包括遺傳和環(huán)境等因素[12]。利用高脂飼料建立小鼠非酒精性脂肪肝模型，可有效模擬人類(lèi)非飲酒類(lèi)脂肪肝的病理狀況。本研究中血清學(xué)與病理學(xué)結(jié)果顯示，隨著高脂飼料飼喂時(shí)間延長(zhǎng)，小鼠肝組織中脂滴數(shù)量增多，TG水平上升，提示高脂飼料引起肝組織形態(tài)學(xué)改變，NAFLD模型建立成功。

近年來(lái)，腸道菌群在肝臟相關(guān)疾病，尤其是NAFLD中的作用備受關(guān)注。相關(guān)文獻(xiàn)[13-14]證實(shí)，在臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，腸道菌群失調(diào)參與了NAFLD的發(fā)病。腸道菌群主要通過(guò)影響機(jī)體代謝、增加腸道通透性和參與宿主免疫反應(yīng)，以及調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)、脂肪及膽汁酸代謝等信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)等，促進(jìn)NAFLD的發(fā)生[15-17]。H.h是腸道菌群的一種，可感染多種哺乳動(dòng)物。H.h的自然宿主是鼠類(lèi)，在大鼠和小鼠中檢出率較高，在人類(lèi)肝臟組織中也有檢出報(bào)告，推測(cè)其致病機(jī)制是一種細(xì)菌-肝炎-肝癌的發(fā)病模式[18]。同時(shí)有研究表明，H.h感染可以導(dǎo)致并加快肝纖維化的形成[19]。與此同時(shí)，高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展及無(wú)菌實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的應(yīng)用也為研究H.h對(duì)NAFLD發(fā)病的影響機(jī)制提供了有效手段。

本研究中通過(guò)H.h感染和高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合構(gòu)建NAFLD模型，在造模過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，小鼠肝組織中TNF-α、IL-6和IL-1β等因子的轉(zhuǎn)錄水平明顯升高；推測(cè)H.h感染可以通過(guò)激活相關(guān)蛋白通路（如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3通路等），促進(jìn)大量炎性因子表達(dá)，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞存活與增殖，參與炎性反應(yīng)[20]。另外，隨著NAFLD的發(fā)展，大量積聚的活性氧使肝星狀細(xì)胞活化，從而釋放出TGF-β；TGF-β可以刺激α-SMA和CollagenⅠ等蛋白的分泌，使細(xì)胞外基質(zhì)增多，膠原酶表達(dá)受到抑制，從而導(dǎo)致膠原合成增加而降解減少，最終引起膠原沉積和纖維化[21]。在本研究中，本課題組初步探究了H.h感染對(duì)高脂飼料誘導(dǎo)NAFLD模型小鼠的影響，發(fā)現(xiàn)在構(gòu)建NAFLD模型時(shí)，H.h感染可促進(jìn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和炎性細(xì)胞因子釋放，并進(jìn)一步增加TGF-β的分泌，加重了NAFLD模型的纖維化和膠原纖維沉積程度，說(shuō)明小鼠感染H.h可以促進(jìn)NAFLD的發(fā)展。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，在構(gòu)建NAFLD模型時(shí)，H.h能上調(diào)小鼠肝臟組織中炎性因子表達(dá)，加快TGF-β分泌，從而促進(jìn)NAFLD發(fā)展；提示H.h感染會(huì)對(duì)NAFLD的發(fā)病進(jìn)程及評(píng)價(jià)帶來(lái)一定影響。