五苓散對高脂血癥模型貴州小型豬的治療作用

張 慧，吳延軍，姚 瑾，陸濤峰，王郭琦，趙 海，姚 剛，吳曙光

（1. 貴州中醫藥大學實驗動物研究所，貴陽 550025；2. 重慶市巫山縣中醫院，重慶 404700）

高脂血癥（hyperlipidemia）是由多種原因導致脂代謝紊亂的一種病理狀態，臨床表現為血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（lowdensity lipoprotein cholesterol，LDL-C）升高及血清高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）降低。高脂血癥是引發心腦血管病變及其他臟腑病變的主要病因之一[1]。因此，降低和控制高脂血癥，對降低心血管疾病的發病風險和保護相關臟腑具有重要意義。

經典方劑五苓散來源于《傷寒論》、《金匱要略》，由白術、豬苓、茯苓、桂枝、澤瀉5種藥物組成，具有利尿利濕、溫陽化氣的藥用功效。近年來，中醫藥治療高脂血癥的研究發現，高脂血癥的發病機制多指向痰濕積聚，包括臟腑虛弱及其病因、偏愛高脂飲食等?！夺t學正傳》云：“津液稠粘，為痰為飲，積久滲入脈中，血為之濁?！爆F代中醫理論認為，西醫所說的高脂血癥是由于身體痰濁不暢，堵塞血脈，血流不暢，長時間陷入血瘀而致病[2]，即該病的基本病機是痰瘀互結[3]。在臨床應用中，五苓散的治療范圍很廣[4]，包括腹瀉、水腫、眩暈、尿潴留等，主要適應證為脾虛濕困，以濕為主，與高脂血癥的基本病機非常契合。因此，本實驗探討五苓散對貴州小型豬高脂血癥模型的治療作用。

現代研究發現，血清中TG、TC、LDL-C和HDL-C等血脂生化指標的變化，是高脂血癥發生的主要表現，也被認為是痰濕證的微觀辨證指標[5]。為了探討五苓散對中醫痰濕證所致高脂血癥的影響，本研究擬通過分析五苓散對貴州小型豬高脂血癥模型體質量指數（body mass index，BMI）、腹圍、中醫證候和主要血脂指標的變化，進一步研究和確定痰濕證的定量指標。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

12頭成年普通級貴州小型豬，1.5～2歲，體質量為（28±3）kg，從貴州中醫藥大學實驗動物研究所自主培育的貴州小型豬種群（經本單位長期進行遺傳學和微生物學質量控制及監測，符合普通級實驗動物要求[6-7]）中隨機挑選，飼養于貴州中醫藥大學實驗動物研究所普通級設施專門的小型豬籠具中。飼養期間各組動物自由飲水。所有實驗操作均符合貴州中醫藥大學實驗倫理福利要求（審批號：20190017）。

1.2 飼料、藥品和試劑

實驗組動物飼喂高脂飼料配方為3.0%膽固醇、0.5%膽鹽、0.2%丙硫氧嘧啶、10.0%豬油、86.3%基礎飼料；對照組飼喂基礎飼料，基礎飼料由重慶騰鑫生物技術有限公司配制加工。

五苓散由澤瀉、茯苓、豬苓、白術、桂枝5種藥材分別加工成粉狀，按質量比例（茯苓18.75%，澤瀉31.25%，豬苓18.75%，桂枝12.5%，白術18.75%）均勻混合而成，藥材購自貴州同濟堂藥店。TC（批號：D799800-0100）、TG（批號：D799796-0100）、LDL-C（批號：D711063-0048）、HDL-C（批號：D711214-0048）試劑盒均購自生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.3 實驗儀器

電子地磅（分度值0.1 kg，型號XK3190-A12，上海耀華體重系統有限公司）；纖維皮卷尺（分度值1 mm，型號SJ-440050，海寧上匠工具有限公司）；電子天平（型號JYI001，上海精密儀器有限公司）；離心機（型號TDLSO-2B，上海安亭科學儀器廠）；Axio Lab.A1系統顯微鏡德國CarlZeiss公司；全自動生化檢測儀（AU680，美國Beckman Coulter公司）。

1.4 動物造模、分組及實驗干預

選擇4只貴州小型豬為正常組，飼喂普通飼料。另外8只飼喂高脂飼料，連續24周造模。造模成功后，8只高脂血癥模型豬分為模型組4只和五苓散治療組4只，繼續飼喂高脂飼料；其中，五苓散治療組飼料中添加五苓散，連續給藥8周。五苓散按照0.55g/（kg-1·d-1）的劑量，混入少量飼料中，使模型豬主動采食，待采食完混藥飼料后再補充核定量的高脂飼料。各組動物飼料總量相同，每日飼喂2次。各組動物均自由飲水。

1.5 BMI及腹圍測定

分別在造模完成后（24周）和用藥干預結束后（32周），測量各組動物的體質量（WP，kg）、體長（LP，m）和腹圍（AC，cm），計算體質量指數（BMI）值（BMI=WP/L2）。體長，是指從兩耳根中點連線的中部起，用卷尺沿背脊量到尾根為止。腹圍，是指從中軸線背部最高處起，用卷尺沿腹部量到第三乳頭為止。

1.6 中醫證候評分

觀察各組動物中醫證候變化，參照《中藥新藥臨床研究指導原則（試行）》[8]的相關規定對肥胖程度、腹部大小、被毛狀況、神疲乏力程度、好靜懶動程度、氣短氣喘程度、糞便形態7個典型癥狀表現（表1），賦以分值來顯示其癥狀的輕重程度，分值設為0～10分，總評分0～70分。在造模完成后的第24周和用藥結束后的第32周，分別對各組動物進行打分，總分≤總分值的30%（即21分）為正常生理性表現，總分＞總分值的30%即為痰濕證；得分越高說明病情越嚴重。

表1 貴州小型豬中醫證候評分表 Table 1 Chinese medicine syndrome rating scale for Guizhou mini-pigs

1.7 血脂指標測定

分別在造模完成后的24周和用藥結束后的32周，于次日空腹采集各組動物的前腔靜脈抗凝血，檢測血清中四項血脂指標。血脂指標在貴州省人民醫院臨床檢驗中心檢測。

1.8 統計學分析

結果用±s表示。所有數據均用GraphPad Prism 5軟件處理，多組間比較使用單因素方差分析，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 BMI及腹圍的變化

造模完成后，模型組BMI和腹圍均值均較正常組有所增加，但差異無統計學意義（P=0.52，P＞0.05）（表2），這可能與貴州小型豬對高脂飲食的耐受程度有關。

表2 貴州小型豬BMI、腹圍、血脂指標和證候評分Table 2 BMI, abdominal circumference, blood lipid and syndrome scores in Guizhou mini-pigs

造模完成后，治療組給予五苓散治療8周，32周用藥結束后測定BMI和腹圍的變化，結果顯示，模型組BMI和腹圍均值均較正常組有所增加，但差異無統計學意義（P=0.45，P＞0.05）；治療組BMI和腹圍均值較模型組有所下降，但差異無統計學意義（P=0.65，P＞0.05）。治療組與正常組相比，BMI和腹圍均值也有所增加，但差異無統計學意義（P=0.73，P＞0.05），結果如表2所示。結果表明，經過五苓散治療8周的治療組，BMI和腹圍均值有一定程度的改善，但各組之間差異沒有統計學意義（P＞0.05）。

2.2 血脂水平變化

正常組飼喂普通飼料，模型組和治療組動物飼喂高脂飼料，連續飼喂24周后，模型組較正常組血清中TG、TC、LDL-C水平均顯著升高（P＜0.05），而HDL-C水平顯著降低（P＜0.05）（表2）。結果表明，高脂飼料飼喂24周能引起模型組貴州小型豬主要血脂指標明顯改變。

造模完成后，治療組給予五苓散治療8周，各組飼料同前繼續飼喂。第32周用藥結束后，治療組較模型組血清中TG、TC、LDL-C水平均顯著降低（P＜0.05），而HDL-C水平顯著升高（P＜0.05）；治療組與正常組相比，各項指標差異不顯著（P＞0.05）（表2）。結果表明，經過五苓散治療8周后，模型組貴州小型豬主要血脂指標能明顯改善，并能基本恢復至正常組水平。

2.3 中醫證候評分

連續飼喂高脂飼料24周后，模型組動物表現出肥胖臃腫、腹脹膨大、被毛稀少脫落、神疲乏力、身體困重、好靜懶動、動則氣短氣喘和糞便色淡稀軟不成形等表癥。高脂血癥模型豬經過五苓散治療8周后，此類癥狀表現逐漸開始好轉，身形漸轉向勻稱健壯，被毛光澤柔順，活動量增多，呼吸頻率均勻。

根據表1中的中醫證候指標評分標準，對實驗24周和32周各組動物表現予以評分，統計結果見表2。造模完成時，模型組中醫證候評分顯著性增加（P＜0.01）；經過五苓散治療8周后，治療組較模型組中醫證候評分顯著性下降（P＜0.01）；但治療組評分仍然顯著高于正常組（P＜0.01）。結果表明，給小型豬飼喂高脂飼料24周，可以表現出明顯的痰濕證；經過五苓散治療8周后，痰濕程度顯著減輕，但尚未恢復至正常水平。

3 討論

在中醫理論體系中，高脂血癥屬于“痰濁”、“痰濕”、“濕濁”范疇。長期暴食膏粱厚味會損傷脾胃，導致脾陽不振、水濕內停、精谷不化，故脾虛濕困是本病最基本的病理基礎[9]。脾臟失運，不能正常運化水谷精微，導致“痰濁、水濕”等，不僅阻礙了脾運水化濕的功能，而且直接浸沒血管，引起血管疾病。治療高脂血癥往往是從痰瘀互結入手，以化痰祛瘀為主[10]。五苓散的成分主要是溫藥，整個方劑具有較強的溫經利濕作用，主要由茯苓、豬苓、澤瀉、桂枝、白術組成。白術具有利尿、益氣、健脾的作用，它可以加強水和津液正常分布，保持水的濕潤而不積聚，適用于濕邪所致之病，可治痰濕之患[11]。

有研究表明加味三才五苓散治療脾虛痰濕型非酒精性脂肪性肝病患者具有良好的效果，能有效改善患者的中醫癥狀、血脂等，并能降低BMI，臨床療效確切[12]。蔡小榮[13]的研究成果表明，茵陳五苓散能降低高脂血癥大鼠血清TC、TG和LDL-C的含量，提高HDL-C含量。劉婷等[14]研究結果表明，在動物模型中使用五苓散的主要成分澤瀉能有效抑制脂肪肝，不僅能促進肝臟脂肪代謝，而且能改善上焦的濕濁。因此，選用五苓散治療高脂血癥，其健脾降脂作用更為顯著。臨床研究顯示，痰濕內阻型高脂血癥觀察組總有效率高于對照組，BMI、肥胖度及體質量百分率水平均低于對照組（P＜0.05），表明五苓散加減聯合中醫治療痰濕內阻型高脂血癥效果較好，可提高臨床療效，改善患者體質量，減輕肥胖程度[15]。王茜[16]采用五苓散加減聯合中醫電針技術治療高脂血癥患者，有效率達到了91.49%，較對照組顯著提高，進一步證實了痰濕內阻型高脂血癥患者采用五苓散加減聯合中醫電針技術治療的有效性。另外，五苓散對脂代謝紊亂相關疾病有一定的治療作用[17]，具有保肝和降血脂作用，并能降低丙氨酸轉氨酶活性[18]。

目前，已有多種動物（大鼠、小鼠、兔、豚鼠、斑馬魚等）的高脂血癥模型的研究報告[19]，但小型豬高脂血癥模型只有五指山豬有建模成功的報告[20-21]。本研究以貴州小型豬為實驗對象，采用飼喂高脂飼料的方法模擬了過食肥甘引起的痰濕內阻，建立了貴州小型豬高脂血癥痰濕證候組合模型，并用經典名方五苓散治療觀察。結果顯示，造模完成后，貴州小型豬模型組主要血脂指標TC、TG、LDL-C水平明顯升高（P＜0.05），HDL-C水平明顯降低（P＜0.05），模型組也表現出高脂血癥表征，經五苓散干預后，治療組各項指標有所改善，與李芹等[22]研究結果一致。

值得注意的是，本研究中高脂飼料飼喂24周后模型組貴州小型豬TC明顯低于五指山豬高脂模型[20-21]。貴州小型豬另外一項高脂飼料誘導動脈粥樣硬化的研究[23]顯示，高脂飼料飼喂14周后實驗組TC含量能達到對照組的2.23倍，與本研究獲得的結果基本一致。成人正常TC參考值為2.9～6.0mmol/L，《中國成人血脂異常防治指南（2016年修訂版）》指出，TC＞7.2 mmol/L為血脂異常高危人群，高危人群TC較成人正常值改變僅有1.2倍，因此高脂飲食造成小型豬TC指標過高不一定能很好復制人高脂血癥模型。本研究結果表明，高脂飲食能造成貴州小型豬主要血脂指標的明顯改變，也能引起高脂血癥表征，但血清TC指標的改變沒有五指山小型豬明顯，進一步揭示貴州小型豬具有較強的血脂調節能力，與人臨床上的血脂改變更為接近，可能更適合作為人高脂血癥的動物模型。