微波消解-電感耦合等離子體-質譜法測定柏子養心丸中總汞的含量

任琦，許妍，劉桂鳳，徐蘭，鄧維

1.江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，江西 南昌 330029；2.解放軍聯勤保障部隊第九〇八醫院，江西 南昌 330002

柏子養心丸處方來源于《古今醫統》卷七葉引《集驗方》。上世紀八十年代初期多家企業獲得當地衛生局批準并進行生產，為國家基本藥物。現行標準收載于《中國藥典》2020 年版一部，處方由炙黃芪、黨參、當歸、川芎、朱砂等十三味藥組成，具補氣、安神之功效，用于心悸易驚、失眠多夢等癥［1-3］。方中朱砂為硫化物類礦物辰砂族辰砂，主含硫化汞（HgS），具有清心鎮驚，明目，解毒之功效，用于心悸易驚，失眠多夢，癲狂發瘋，小兒驚風等癥［4-5］。《中國藥典》2020 年版一部朱砂品種項下規定：本品含硫化汞（HgS）不得低于96%。因此，含朱砂中藥制劑的總汞含量較高，而通過測定制劑中硫化汞（HgS）的含量，可以評價制劑中所投朱砂的真偽及投樣量是否準確，因此有必要對柏子養心丸中總汞進行測定。而柏子養心丸現行標準僅有朱砂的顯微鑒別，未對其特征性成分加以控制，難以有效控制產品質量，故本研究采用微波消解-電感耦合等離子體-質譜法［6-17］建立柏子養心丸中總汞含量測定方法，以期為柏子養心丸的質量評價供參考依據，保證臨床用藥安全。

1 儀器與試藥

Agilent 7700 電感耦合等離子體-質譜儀（美國Agilent Technologies 有限公司）；Sartorius BSA 124SCW 電子天平（德國Sartorius 公司）；MARS-xpress微波消解儀（美國CEM 有限公司）；Milli-Q Direct 16 超純水儀（Millipore 中國有限公司）；GST25-20趕酸儀（上海博通化學科技有限公司）。

元素內標標準溶液（209Bi 內標元素）：濃度為100 μg/mL，來源于Agilent，批號：5188-6625；調諧溶液：來源于安捷倫科技股份有限公司，批號為5184-3566；汞標準溶液：濃度為1 000 μg/mL，來源于中國計量科學研究院國家標準物質，批號：GBW 08617 13011；硝酸：來源于MERCK，批號：K48901 356713；超純水：由Milli-Q 超純水儀制得。

7 批柏子養心丸來源于7 個企業（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號：15035315，國藥準字Z11020080，規格：每100 粒重10 g；上海華源制藥安徽廣生藥業有限公司，批號：121201，國藥準字Z34021073，規格：每瓶裝60 g；江西藥都樟樹制藥有限公司，批號：150403，國藥準字Z36021835，規格：每瓶裝60 g；九芝堂股份有限公司，批號：201412037，國藥準字Z43020150，規格：每瓶裝120 g；湖北諾得勝制藥有限公司，批號：150102，國藥準字Z42020282，規格：每瓶裝60 g；蕪湖張恒春藥業有限公司，批號：1503071，國藥準字Z34020946，規格：每瓶裝36 g；南京同仁堂藥業有限責任公司，批號：140910，國藥準字Z32020029，規格：每瓶裝60 g）。

2 方法與結果

2.1 儀器設置條件

電感耦合等離子體-質譜儀設置條件，射頻功率：1 600 W；反應模式：氦模式；載氣：氬氣；載氣流速：0.79 L/min；碰撞氣體：氦氣；氦氣流速：4.5 mL/min；泵速：0.10 rps；采樣錐孔徑：1.0 mm；截取錐孔徑：0.4 mm；離子透鏡1∶3.5 V；離子透鏡2∶-99.5 V；數據采集次數：3 次。

微波消解程序：消解功率800 W，25 min 內升溫至150 ℃，保持5 min，再以5 ℃/min 升至180 ℃，保持25 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備取柏子養心丸0.5 g，精密稱定，置消解罐中，加硝酸6 mL，置微波消解儀中進行消解，消解完全后，消解罐自然冷卻至室溫，將消解液轉入50 mL 量瓶中，用水少量多次洗滌消解罐，洗液合并于量瓶中，用水稀釋至刻度，即得。再精密吸取上述溶液100 μL，置250 mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。同法同時制備試劑空白樣品溶液。

2.2.2 內標溶液的制備精密量取209Bi 內標標準溶液1 mL，置100 mL 容量瓶中，用2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，即得209Bi 的內標溶液（濃度為1 μg/mL）。

2.2.3 汞標準儲備溶液的制備取汞標準物質（標準值為1 000 μg/mL）1 mL，置100 mL 量瓶中，用2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，即得汞的標準儲備液（濃度為10 μg/mL）。

2.2.4 汞標準曲線溶液的制備精密量取汞標準溶液儲備液0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分別置50 mL 量瓶中，用2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，即得。（濃度分別為0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0ng/mL）

2.3 測定法

采用在線內標法，用三通管將含209Bi 內標溶液與供試品溶液后進入電感耦合等離子體-質譜儀。測定時以209Bi 作為內標，標準進樣管始終插入內標溶液中，依次從樣品管中吸入各個濃度的標準曲線溶液，以測量值為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

2.4 線性關系考察

取“2.2.4”項下標準曲線溶液，按“2.1”項下儀器設置條件進樣測定，記錄儀器響應值。以汞元素質量濃度（ng/mL）為橫坐標，與測量值為縱坐標進行線性擬合，繪制，得汞元素線性回歸方程Y=0.002 2X+4.996 8×10-4，r=0.996 3。結果表明汞質量濃度在0～5.0 ng/mL 范圍內與測量值線性關系良好。

2.5 檢測限試驗

取“2.2.1”項下空白樣品溶液適量，按“2.1”項下儀器設置條件重復進樣測定11 次，計算儀器響應值的標準偏差，3 倍標準偏差對應的質量濃度即為檢測限，結果汞的檢出限為0.011 1 ng/mL。

2.6 精密度試驗

取“2.2.4”項下汞元素標準溶液（濃度3 ng/mL），按“2.1”項下儀器設置條件重復進樣測定6 次，記錄儀器響應值，測定結果分別為3.020、3.013、3.002、3.109、3.015、3.121 ng/mL，RSD 為1.8%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗

稱取柏子養心丸（上海華源制藥安徽廣生藥業有限公司，批號：121201）0.5 g，精密稱定，共取6份，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下儀器設置條件進樣測定，記錄儀器響應值。結果見表1，6 份樣品中汞的平均含量為186 868 ng/g，RSD 為1.3%（n=6），表明本方法重復性良好。

表1 重復性試驗結果

2.8 加樣回收率試驗

稱取柏子養心丸（上海華源制藥安徽廣生藥業有限公司，批號：121201）0.25 g，精密稱定，共取6 份，采用加樣回收試驗，加入標準溶液（濃度為5 μg/mL）50 mL，按“2.2.1”項下方法制備，再按“2.1”項下儀器設置條件進樣測定，計算加樣回收率，結果見表2。

表2 回收率試驗結果

計算公式：回收率=（測得總量-樣品中的量）÷添加量×100%

2.9 樣品中總汞的測定

稱取7 批柏子養心丸樣品各0.5 g，精密稱定，分別按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下儀器設置條件進樣測定，計算樣品總汞的含量（mg/kg），結果見表3。

表3 樣品中總汞的測定結果（mg/kg）

3 討論

本次試驗結果可知，參照《中國藥典》2020年版一部對部分藥材重金屬及有害元素的限度規定，汞不得超過0.2 mg/kg，根據柏子養心丸的用法與用量：水蜜丸一次6 g，小蜜丸一次9 g，2 次/d。按每日服用量折算，總汞的限度：水蜜丸不得過0.002 4 mg/d，小蜜丸0.003 6 mg/d。結果7 批樣品總汞含量均大于擬定的限度，表明柏子養心丸中總汞含量都非常高。但有研究表明［4-5］，朱砂在體內不能被完全溶解吸收，占給藥量的98.5%以硫化汞（HgS）形式隨糞便排出體外，而1.5%的可溶性汞鹽才是能被人體所吸收的成分，也是朱砂中有毒的成分。因此有待進一步研究柏子養心丸中可溶性汞的毒性風險，為柏子養心丸的安全性評價供參考依據，保證其臨床用藥安全。