新型超聲組織處理儀在氣管/肺活檢標本中的應(yīng)用研究

文/廖小杰，譚凌峰

肺癌是導(dǎo)致中國人癌癥死亡的首要原因[1]。70%以上的氣管/肺腫瘤的病理診斷都是由纖維支氣管鏡、穿刺活檢或細胞學標本診斷的[2]。病理科接收到氣管/肺活檢標本后的首要任務(wù)是確定病變是腫瘤還是其他，若是腫瘤或特殊感染，還要進行免疫組織化學染色或特殊染色協(xié)助進一步診斷。在臨床病理工作中，從接收標本、取材、常規(guī)脫水、制片到發(fā)出病理診斷報告，往往需要3~5d，對于需要進行免疫組織化學染色或特殊染色的標本，其病理報告需要更長的時間。本文應(yīng)用新型超聲處理儀及配套環(huán)保試劑進行氣管/肺小活檢標本的快速石蠟切片技術(shù)，并對其處理后的組織進行免疫組織化學染色或特殊染色，明顯縮短制片時間，應(yīng)用效果良好，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）標本。收集了柳州市工人醫(yī)院2020 年11 月-2021 年3月送檢由纖維支氣管鏡、穿刺活檢的氣管/肺活檢標本252 例，其中143 例使用新型超聲組織處理儀處理（超聲法組），其余109例使用傳統(tǒng)方法處理（傳統(tǒng)法組）。

（2）主要實驗儀器及試劑。JYCL-2 超聲組織處理儀及選自佛山南海鈞鎰生產(chǎn)的快速石蠟制片專用試劑（加強型）；LEICA ASP300S 全自動脫水機；愛華BMJ-1B 包埋機；Thermo HM325輪轉(zhuǎn)式切片機；派斯杰RS36 型HE 染色機；羅氏Benchmark XT 免疫組織化學儀。免疫組織化學一抗選自福州邁新生產(chǎn)的即用型CK（pan）（AE1/AE3）鼠抗人單克隆抗體、即用型CK5/6（D5/16B4）鼠抗人單克隆抗體、即用型CK7（OV-TL12/30）鼠抗人單克隆抗體、即用型TTF-1（MX011）鼠抗人單克隆抗體、即用型NapsinA（MX015）鼠抗人單克隆抗體、即用型P40（ZR8）兔抗人單克隆抗體、即用型Ki-67（MX006）鼠抗人單克隆抗體、即用型Syn（MX038）鼠抗人單克隆抗體、即用型CgA（MX018）鼠抗人單克隆抗體以及美國羅氏生產(chǎn)的ALK（D5F3）兔單克隆抗體等；二抗及DAB 選用美國羅氏生產(chǎn)的Ultraview Universal DAB試劑盒；特殊染色選自BASO 公司生產(chǎn)的抗酸染色液（冷染法）試劑盒及病理糖原染色液（PAS）試劑盒等。

1.2 方法

（1）標本處理。新型超聲組織處理儀組織處理流程：提前20min 開啟JYCL-2 超聲組織處理儀預(yù)熱試劑至設(shè)置的溫度，組織取材后于10%中性緩沖福爾馬林53℃固定25min，樣本釋放劑分別52℃處理30min 及56℃處理30min 后，于62℃石蠟浸蠟25min,常規(guī)包埋切片。傳統(tǒng)方法組織處理流程：組織取材后于10%中性緩沖福爾馬林固定6~24h 后上脫水機處理，分別于75%酒精、80%酒精、95%酒精及100%酒精中梯度脫水，然后于二甲苯中透明，石蠟浸蠟，常規(guī)包埋切片。

（2）HE 染色。4μm 石蠟切片經(jīng)80℃烤片15min，上HE 染色機行自動HE 染色，后經(jīng)常規(guī)脫水透明、中性樹膠封固后于顯微鏡下觀察結(jié)果，并根據(jù)《臨床技能操作規(guī)范·病理學分冊》[3]對HE 切片評價。

（3）免疫組織化學染色。4μm 石蠟切片經(jīng)65℃烤片1h，上免疫組織化學儀行自動免疫組織化學染色，后經(jīng)常規(guī)脫水透明、中性樹膠封固后于顯微鏡下觀察結(jié)果。

（4）特殊染色。抗酸染色：6μm 石蠟切片經(jīng)80 ℃烤片15min，常規(guī)脫蠟至水后，石炭酸復(fù)紅染色10min，流水沖洗后滴加酸性酒精脫色，流水沖洗后滴加亞甲基藍復(fù)染30s，流水沖洗，瀝干，中性樹膠封固鏡檢。

2 結(jié)果

2.1 HE 染色

超聲法組切片切面完整，切片平攤，透明度很高，細胞核與細胞質(zhì)對比清晰；與傳統(tǒng)法組所制片無明顯差異（圖1）。超聲法組與傳統(tǒng)法組的甲級片分別為93.8%、94.2%，達到病理切片質(zhì)控要求。

圖1 氣管/肺活檢標本HE 染色；①為肺腺癌（超聲法）；②為肺鱗狀細胞癌（超聲法）；③為肺肉芽腫性炎癥（超聲法）；④為機化性肺炎（超聲法）；⑤為肺腺癌（傳統(tǒng)法）；⑥為肺鱗狀細胞癌（傳統(tǒng)法）；⑦為肺肉芽腫性炎癥（傳統(tǒng)法）；⑧為機化性肺炎（傳統(tǒng)法）

2.2 免疫組織化學染色

超聲法組處理后的組織中的抗原保存良好，免疫組織化學染色抗體在組織細胞結(jié)構(gòu)上定位清晰準確，無背景染色，與傳統(tǒng)法組無明顯差異（圖2）。

圖2 氣管/肺活檢標本免疫組化染色及特殊染色 ①為肺腺癌表達TTF-1 蛋白（超聲法）；②為肺鱗狀細胞癌表達CK5/6 蛋白（超聲法）；③為肺腺癌表達ALK(D5F3)蛋白；④為肺肉芽腫性炎癥抗酸染色查見抗酸桿菌（超聲法）；⑤為肺腺癌表達TTF-1 蛋白（傳統(tǒng)法）；⑥為肺鱗狀細胞癌表達CK5/6 蛋白（傳統(tǒng)法）；⑦為肺腺癌表達ALK(D5F3)蛋白（傳統(tǒng)法）；⑧為肺肉芽腫性炎癥抗酸染色查見抗酸桿菌（傳統(tǒng)法）

2.3 特殊染色

超聲法組處理后的組織經(jīng)特殊染色后，組織中相應(yīng)的病原微生物能較好地顯示出來，如抗酸染色清晰地顯示抗酸桿菌（圖2）。

3 討論

病理診斷是疾病診斷的金標準，傳統(tǒng)的組織處理方法步驟繁多，耗時長，往往需要十數(shù)個小時，需在脫水機中脫水過夜，從而使得報告的實效性降低。因此，縮短制片時間，尤其是標本的脫水時間對于縮短報告時間非常重要。新型超聲組織處理儀是一種新型的組織處理設(shè)備，它通過精確控制溫度及超聲波的空化效應(yīng)加快了脫水試劑的滲透作用，從而極大地縮短了組織脫水的時間，使得脫水時間從傳統(tǒng)脫水方法的14h 縮短至2h。

由纖維支氣管鏡、穿刺活檢的氣管/肺活檢標本，組織的厚度均≤0.3cm，應(yīng)用新型超聲處理儀處理后，發(fā)現(xiàn)組織脫水效果良好，制片穩(wěn)定。行HE 染色后，染色對比清晰，紅藍分明，層次分明，與常規(guī)方法無明顯差別；氣管/肺小活檢標本診斷常用的免疫組織化學染色CK(Pan)、CK7、TTF-1、CK5/6、NasinA、P40、Ki-67、Syn、CgA、CD56、ALK(D5F3 等均表達良好，定位準確，背景清晰；特殊染色如抗酸染色、PAS 等能清晰地顯示病原微生物，染色分明，易于分辨。因此，快速組織處理系統(tǒng)在氣管/肺活檢標本中使用效果良好，結(jié)果準確。馬健波等[4]研究表明，使用新型超聲組織處理儀處理宮頸錐切組織，組織處理質(zhì)量好。雷琎等[5]研究表明，使用超聲法處理腸、肺、肝、腎、扁桃體、乳腺、子宮頸及胃組織，不會對HE 及免疫組織化學染色產(chǎn)生影響，有推廣使用的潛力。

氣管/肺活檢標本應(yīng)用新型超聲組織處理儀制作石蠟切片，操作簡便，在保證切片質(zhì)量的同時可大大縮短制片時間，極大地滿足了病理診斷及患者對于后續(xù)診療的需求，組織形態(tài)、抗原性、特殊結(jié)構(gòu)及微生物均保留完好。使用環(huán)保型試劑，對于廣大的病理技術(shù)工作者起到了良好的保護作用，是值得各個病理實驗室推廣的方法。