新型超聲組織處理儀在氣管/肺活檢標本中的應用研究

文/廖小杰，譚凌峰

肺癌是導致中國人癌癥死亡的首要原因[1]。70%以上的氣管/肺腫瘤的病理診斷都是由纖維支氣管鏡、穿刺活檢或細胞學標本診斷的[2]。病理科接收到氣管/肺活檢標本后的首要任務是確定病變是腫瘤還是其他，若是腫瘤或特殊感染，還要進行免疫組織化學染色或特殊染色協助進一步診斷。在臨床病理工作中，從接收標本、取材、常規脫水、制片到發出病理診斷報告，往往需要3~5d，對于需要進行免疫組織化學染色或特殊染色的標本，其病理報告需要更長的時間。本文應用新型超聲處理儀及配套環保試劑進行氣管/肺小活檢標本的快速石蠟切片技術，并對其處理后的組織進行免疫組織化學染色或特殊染色，明顯縮短制片時間，應用效果良好，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）標本。收集了柳州市工人醫院2020 年11 月-2021 年3月送檢由纖維支氣管鏡、穿刺活檢的氣管/肺活檢標本252 例，其中143 例使用新型超聲組織處理儀處理（超聲法組），其余109例使用傳統方法處理（傳統法組）。

（2）主要實驗儀器及試劑。JYCL-2 超聲組織處理儀及選自佛山南海鈞鎰生產的快速石蠟制片專用試劑（加強型）；LEICA ASP300S 全自動脫水機；愛華BMJ-1B 包埋機；Thermo HM325輪轉式切片機；派斯杰RS36 型HE 染色機；羅氏Benchmark XT 免疫組織化學儀。免疫組織化學一抗選自福州邁新生產的即用型CK（pan）（AE1/AE3）鼠抗人單克隆抗體、即用型CK5/6（D5/16B4）鼠抗人單克隆抗體、即用型CK7（OV-TL12/30）鼠抗人單克隆抗體、即用型TTF-1（MX011）鼠抗人單克隆抗體、即用型NapsinA（MX015）鼠抗人單克隆抗體、即用型P40（ZR8）兔抗人單克隆抗體、即用型Ki-67（MX006）鼠抗人單克隆抗體、即用型Syn（MX038）鼠抗人單克隆抗體、即用型CgA（MX018）鼠抗人單克隆抗體以及美國羅氏生產的ALK（D5F3）兔單克隆抗體等；二抗及DAB 選用美國羅氏生產的Ultraview Universal DAB試劑盒；特殊染色選自BASO 公司生產的抗酸染色液（冷染法）試劑盒及病理糖原染色液（PAS）試劑盒等。

1.2 方法

（1）標本處理。新型超聲組織處理儀組織處理流程：提前20min 開啟JYCL-2 超聲組織處理儀預熱試劑至設置的溫度，組織取材后于10%中性緩沖福爾馬林53℃固定25min，樣本釋放劑分別52℃處理30min 及56℃處理30min 后，于62℃石蠟浸蠟25min,常規包埋切片。傳統方法組織處理流程：組織取材后于10%中性緩沖福爾馬林固定6~24h 后上脫水機處理，分別于75%酒精、80%酒精、95%酒精及100%酒精中梯度脫水，然后于二甲苯中透明，石蠟浸蠟，常規包埋切片。

（2）HE 染色。4μm 石蠟切片經80℃烤片15min，上HE 染色機行自動HE 染色，后經常規脫水透明、中性樹膠封固后于顯微鏡下觀察結果，并根據《臨床技能操作規范·病理學分冊》[3]對HE 切片評價。

（3）免疫組織化學染色。4μm 石蠟切片經65℃烤片1h，上免疫組織化學儀行自動免疫組織化學染色，后經常規脫水透明、中性樹膠封固后于顯微鏡下觀察結果。

（4）特殊染色。抗酸染色：6μm 石蠟切片經80 ℃烤片15min，常規脫蠟至水后，石炭酸復紅染色10min，流水沖洗后滴加酸性酒精脫色，流水沖洗后滴加亞甲基藍復染30s，流水沖洗，瀝干，中性樹膠封固鏡檢。

2 結果

2.1 HE 染色

超聲法組切片切面完整，切片平攤，透明度很高，細胞核與細胞質對比清晰；與傳統法組所制片無明顯差異（圖1）。超聲法組與傳統法組的甲級片分別為93.8%、94.2%，達到病理切片質控要求。

圖1 氣管/肺活檢標本HE 染色；①為肺腺癌（超聲法）；②為肺鱗狀細胞癌（超聲法）；③為肺肉芽腫性炎癥（超聲法）；④為機化性肺炎（超聲法）；⑤為肺腺癌（傳統法）；⑥為肺鱗狀細胞癌（傳統法）；⑦為肺肉芽腫性炎癥（傳統法）；⑧為機化性肺炎（傳統法）

2.2 免疫組織化學染色

超聲法組處理后的組織中的抗原保存良好，免疫組織化學染色抗體在組織細胞結構上定位清晰準確，無背景染色，與傳統法組無明顯差異（圖2）。

圖2 氣管/肺活檢標本免疫組化染色及特殊染色 ①為肺腺癌表達TTF-1 蛋白（超聲法）；②為肺鱗狀細胞癌表達CK5/6 蛋白（超聲法）；③為肺腺癌表達ALK(D5F3)蛋白；④為肺肉芽腫性炎癥抗酸染色查見抗酸桿菌（超聲法）；⑤為肺腺癌表達TTF-1 蛋白（傳統法）；⑥為肺鱗狀細胞癌表達CK5/6 蛋白（傳統法）；⑦為肺腺癌表達ALK(D5F3)蛋白（傳統法）；⑧為肺肉芽腫性炎癥抗酸染色查見抗酸桿菌（傳統法）

2.3 特殊染色

超聲法組處理后的組織經特殊染色后，組織中相應的病原微生物能較好地顯示出來，如抗酸染色清晰地顯示抗酸桿菌（圖2）。

3 討論

病理診斷是疾病診斷的金標準，傳統的組織處理方法步驟繁多，耗時長，往往需要十數個小時，需在脫水機中脫水過夜，從而使得報告的實效性降低。因此，縮短制片時間，尤其是標本的脫水時間對于縮短報告時間非常重要。新型超聲組織處理儀是一種新型的組織處理設備，它通過精確控制溫度及超聲波的空化效應加快了脫水試劑的滲透作用，從而極大地縮短了組織脫水的時間，使得脫水時間從傳統脫水方法的14h 縮短至2h。

由纖維支氣管鏡、穿刺活檢的氣管/肺活檢標本，組織的厚度均≤0.3cm，應用新型超聲處理儀處理后，發現組織脫水效果良好，制片穩定。行HE 染色后，染色對比清晰，紅藍分明，層次分明，與常規方法無明顯差別；氣管/肺小活檢標本診斷常用的免疫組織化學染色CK(Pan)、CK7、TTF-1、CK5/6、NasinA、P40、Ki-67、Syn、CgA、CD56、ALK(D5F3 等均表達良好，定位準確，背景清晰；特殊染色如抗酸染色、PAS 等能清晰地顯示病原微生物，染色分明，易于分辨。因此，快速組織處理系統在氣管/肺活檢標本中使用效果良好，結果準確。馬健波等[4]研究表明，使用新型超聲組織處理儀處理宮頸錐切組織，組織處理質量好。雷琎等[5]研究表明，使用超聲法處理腸、肺、肝、腎、扁桃體、乳腺、子宮頸及胃組織，不會對HE 及免疫組織化學染色產生影響，有推廣使用的潛力。

氣管/肺活檢標本應用新型超聲組織處理儀制作石蠟切片，操作簡便，在保證切片質量的同時可大大縮短制片時間，極大地滿足了病理診斷及患者對于后續診療的需求，組織形態、抗原性、特殊結構及微生物均保留完好。使用環保型試劑，對于廣大的病理技術工作者起到了良好的保護作用，是值得各個病理實驗室推廣的方法。