Semaphorin4D與血管生成擬態在卵巢上皮性腫瘤中的表達及其意義＊

文/黃曉玲，石麗萍，張帝開，曾秀華，周明

1 研究背景

卵巢癌是婦科第二常見和致命的惡性腫瘤[1]。在卵巢癌中，上皮性卵巢癌幾乎占90%，由于缺乏早期診斷的有效方法，常常在發現時已是廣泛的腫瘤浸潤、腹膜轉移，導致治療效果欠佳。Sema4D 又稱 CD100，是一個跨膜糖蛋白，Sema4D 在腫瘤引起的血管生成中扮演類似血管內皮生長因子（VEGF）的角色，血管內皮生長因子是一種蛋白質，已被作為某些癌癥治療的一部分，而Sema4D 促進血管生成的具體機制如何，是否可以作為癌癥診斷及治療的一部分，尚不明確。

血管生成擬態（VM）是Maniotis 等提出的由腫瘤細胞本身形成的類血管樣管道。VM 的存在使惡性腫瘤細胞與機體血循環直接接觸,造成腫瘤細胞的侵襲能力增大，從而耐藥性增強,最后會導致傳統的抗腫瘤血管生成治療難以徹底阻斷腫瘤血供,影響患者生存率。

本研究主要希望通過檢測Sema4D 及VM、MCV 在卵巢惡性腫瘤、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中的表達情況，并結合臨床病理因素分析其意義，探討Sema4D 在卵巢癌發生發展過程起怎樣的作用，其影響是否與VM 及MCV 相關，Sema4D 蛋白與VM及MCV 的表達與臨床因素間有何關系。

2 研究方法

本研究收集2014 年1 月—2019 年1 月羅湖區人民醫院經手術和病理證實的33 例卵巢惡性上皮性腫瘤患者的腫瘤組織、38 例卵巢良性上皮性腫瘤組織。納入標準：①均經病理學確診為卵巢上皮性腫瘤者；②初次治療及臨床病理資料保存完整者；③無其他腫瘤者；④術前未做放化療者。惡性腫瘤組患者年齡21 ～70 歲，其中＜50 歲者18 例，≥50 歲者15 例。病理分型：漿液性腺癌20 例，黏液性腺癌8 例，子宮內膜樣癌5 例。根據2014年FIGO手術病理分期對惡性腫瘤患者進行分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期2 例，Ⅲ期6 例，Ⅳ期2 例；良性腫瘤組患者年齡19~80 歲，＜50 歲者32 例，≥50 歲者6 例，病理分型：漿液性腺瘤20 例，黏液性腺瘤18 例。所使用標本均經患者知情并同意，研究經羅湖區人民醫院倫理委員會批準。

通過免疫組織化學染色（法）檢測卵巢組織包括惡性腫瘤、良性腫瘤及正常卵巢組織中Sema4D 蛋白表達，由兩位經驗豐富的病理科醫師，采用雙盲法在高倍視野下（400X）對免疫組織化學染色結果進行判斷，研究因子的陽性表達水平由染色強度評分和陽性細胞數百分比評分的乘積表示。染色強度為無色、淡黃色、棕黃色和棕褐色，分別取0~3 分；高倍視野下觀察到的目的因子陽性表達細胞數占總細胞數的百分比：10%取0 分、10%~50%取1 分、50%~75%取2 分、＞75%取3 分。本實驗陽性表達水平標準為：0~3 分為免疫反應陰性，＞3 分為免疫反應陽性。

對所有標本組織進行PAS 糖原染色和CD31 免疫組織化學染色雙重染色，判斷血管生成擬態。由兩位研究者，采用雙盲法判斷結果。在腫瘤組織中，CD31 染色陽性的管道樣結構為內皮血管；PAS 染色陽性但CD31 染色陰性的管道樣結構為血管生成擬態管道，其內可含有血細胞，有相關結構為陽性，未見相關結構為陰性。

微血管密度（Microvessel Density，MVD）的測定：以CD31標記血管內皮細胞計數微血管數，每一標本低倍鏡（100×）下選3 個微血管數最多的區域，在每一個區域中計數1 個高倍鏡（400×）下的微血管數，取3 個視野的均值。

3 統計

采用SPSS13.0 軟件對所得數據進行統計學分析，采用Fisher精確檢驗或卡方檢驗及t 檢驗比較臨床病理變量與Sema4D、VM 或MVD 的相關性。用卡方檢驗分析Sema4D 與VM 之間的相關性，用t 檢驗及點雙列分析Sema4D 與MVD 之間的相關性。

4 結果

Sema4D 在良性腫瘤組及惡性腫瘤組中的表達有明顯差異，在惡性腫瘤組中有明顯表達；VM 出現在良性腫瘤組及惡性腫瘤組之間的差異有統計學意義；惡性腫瘤組的MVD 較良性腫瘤組的MVD 明顯較高，結果有統計學意義。（見表1）。在所有病例中分析，Sema4D 與VM 之間有相關性（見表2），考慮Sema4D 對VM 的形成有影響。Sema4D、VM 均與MVD 呈正相關關系（見表3），考慮Sema4D 有血管生成作用，符合既往研究結果，而VM陽性的病例中的MVD 較高，具體兩者相關的原因仍需進一步研究。在惡性腫瘤內分析（見表4），Sema4D、VM 及MVD 均與腫瘤分化程度有關，3 者均與年齡及、是否淋巴結轉移、腫瘤分期之間均無明顯關系。

表1 良性腫瘤+惡性腫瘤

表2 良性腫瘤+惡性腫瘤

表3 良性腫瘤+惡性腫瘤

表4 惡性腫瘤組

5 討論

Chen 等的研究提示Sema4D 可能是早期準確預測EOC 預后不良的可靠工具，對促進EOC 微環境中腫瘤的擴散和轉移具有重要作用[2-3]。VM 是惡性腫瘤中一種特殊的血管形態，由高度侵襲性的腫瘤細胞構成。這種腫瘤細胞介導的血供模式與癌癥患者預后不良密切相關。可以初步認為，Sema4D 的促進腫瘤發生發展的作用可能與VM 相關，其具體機制有待進一步研究證實。結合既往研究，對于VM 陽性病例，可能存在對抗血管生成不敏感或療效不佳情況，具體情況如何有待進一步研究分析證實。本研究同時檢測了腫瘤中的微血管數，提示Sema4D 與MVD 呈正相關關系，與既往結果相似。然而有趣的是，VM 與MVD 也呈正相關，3 者均與惡性腫瘤的分化程度有關，可見三者之間相關密切。Sema4D 可促血管生成早已證實，而Sema4D 可能同時存在有促VM 生成作用。