細(xì)胞間黏附分子-1在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)及意義

劉鵬飛 湖南中醫(yī)藥高等專科學(xué)校附屬第一醫(yī)院乳腺科,湖南省株洲市 412000

三陰性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌常見(jiàn)的分子分型之一，是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)以及人表皮生長(zhǎng)因子2(HER-2)均呈陰性表達(dá)的乳腺癌，具有惡性程度高、易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后差等臨床特點(diǎn)，對(duì)女性健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅[1]。細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)是黏附分子免疫球蛋家族的重要成員之一，介導(dǎo)著黏附反應(yīng)過(guò)程，在促進(jìn)炎癥粘連、機(jī)體免疫調(diào)節(jié)及腫瘤惡化轉(zhuǎn)移中有著重要作用。研究表明，ICAM-1通過(guò)結(jié)合特異性受體，能夠增強(qiáng)炎癥細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞等與內(nèi)細(xì)胞之間的黏附，激活內(nèi)皮細(xì)胞，使其更易穿透到內(nèi)皮。而內(nèi)皮細(xì)胞的黏附分子通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞之間或細(xì)胞與基質(zhì)間的結(jié)合，形成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、活化，進(jìn)而參與細(xì)胞的增殖與分化、炎性反應(yīng)、免疫應(yīng)答及腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等多種生理病理過(guò)程[2]。目前，已有較多研究報(bào)道了ICAM-1在肝癌、肺癌、胃癌中表達(dá)[3-5]，但關(guān)于其在TNBC中報(bào)道的研究尚少。為此，本研究旨在探討ICAM-1在TNBC中的表達(dá)，并分析其與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2017年1月—2019年12月我院TNBC手術(shù)標(biāo)本60例，包括癌組織60例及癌旁組織60例。患者均首次發(fā)病，術(shù)前均未行放化療治療，均為女性，年齡23～81(56.12±11.65)歲；TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期29例，Ⅲ期17例，Ⅳ期5例；病理類型：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌36例，浸潤(rùn)性小葉癌6例，基底細(xì)胞癌9例，其他9例；腫塊直徑：≤2cm者26例，>2cm者34例。18例患者術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，其中局部復(fù)發(fā)4例，骨轉(zhuǎn)移6例，肝轉(zhuǎn)移6例，肺轉(zhuǎn)移2例。所有標(biāo)本固定(10%甲醛溶液)后，均行常規(guī)石蠟包埋處理，制成厚度為5μm的病理切片。

1.2 免疫組化法檢測(cè)ICAM-1在TNBC中的表達(dá) 常規(guī)標(biāo)本制片。取載玻片，采用防脫片劑處理后，置于58～60℃烤箱內(nèi)進(jìn)行烘烤，30～60min。切片脫蠟至水：二甲苯60℃環(huán)境下處理5min，共3次。予以100%酒精-95%酒精-75%酒精依次處理，各3min。采用3%H2O2，室溫條件，滅活內(nèi)源性酶，5～10min。采用pH值為6.0的枸櫞酸鹽緩沖液(0.01mol/L)進(jìn)行抗原熱修復(fù)處理。然后以5%BSA進(jìn)行封閉，ICAM-1單抗(英國(guó)Abcam)，1∶50稀釋，4℃環(huán)境下放置過(guò)夜。加入生物素化山羊抗兔IgG，37℃環(huán)境下放置20min。加入試劑SABC，37℃條件下放置20min。DAB顯色處理，加蒸餾水1ml，混勻后加至切片。最后采用蘇木素復(fù)染，以堿性PBS返藍(lán)，用中性樹(shù)脂進(jìn)行封片。

1.3 結(jié)果判讀 所有免疫組化切片均由兩名高年資病理醫(yī)師進(jìn)行評(píng)估。參照文獻(xiàn)中標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例與著色深度進(jìn)行綜合評(píng)分，在每個(gè)切片中隨機(jī)選取5個(gè)視野，各視野分別計(jì)100個(gè)細(xì)胞，然后按細(xì)胞數(shù)≤25%、25%～50%、>50%分別計(jì)1分、2分、3分；ICAM-1蛋白屬于細(xì)胞膜蛋白，著色部位為細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)，按無(wú)著色、淺黃色、深黃色或棕褐色分別計(jì)0分、1分、2分。最終得分為兩項(xiàng)評(píng)分之積，綜合評(píng)分為0分或1分，判定為陰性表達(dá)，綜合評(píng)分為2分、3分、4分或6分，則判定為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 觀察指標(biāo) (1)比較TNBC癌組織及癌旁組織ICAM-1表達(dá)情況；(2)比較不同臨床病理特征的TNBC患者ICAM-1表達(dá)情況差異；(3)比較ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)與陰性表達(dá)TNBC患者的生存預(yù)后。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料比較行χ2或Fisher精確概率檢驗(yàn)；用Kaplan-Meier對(duì)TNBC患者進(jìn)行生存曲線分析；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TNBC癌組織及癌旁組織ICAM-1表達(dá)情況對(duì)比 TNBC癌組織ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)率(75.00%，45/60)明顯高于癌旁組織(10.00%，6/60)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=51.867，P<0.001)。

2.2 ICAM-1表達(dá)與TNBC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 ICAM-1表達(dá)與TNBC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.035)、組織學(xué)分級(jí)(P=0.002)、TNM分期(P=0.030)顯著相關(guān)，而與年齡(P=1.000)、腫瘤直徑(P=0.764)、病理類型(P=0.397)、脈管癌栓(P=1.000)等無(wú)關(guān)。見(jiàn)表1。

表1 ICAM-1表達(dá)與TNBC臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

2.3 ICAM-1表達(dá)與TNBC患者生存預(yù)后的關(guān)系 Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)者生存期明顯低于ICAM-1陰性表達(dá)者(χ2=5.745，P=0.015)。見(jiàn)圖1。

3 討論

TNBC是一種特殊類型的乳腺癌，易復(fù)發(fā)且轉(zhuǎn)移早。由于該類型乳腺癌的ER、PR、HER-2均呈陰性表達(dá)，內(nèi)分泌治療與靶向治療均難以發(fā)揮效果，而臨床又缺乏規(guī)范的化療方案，使得其被視為較頑固的腫瘤，故尋找其治療靶點(diǎn)成為一大難題。

圖1 ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)與陰性表達(dá)的TNBC患者生存曲線

ICAM-1是黏附分子免疫球蛋家族的重要成員之一，在促進(jìn)炎癥粘連、機(jī)體免疫調(diào)節(jié)及腫瘤惡化轉(zhuǎn)移中有著重要作用。其通過(guò)結(jié)合特異性受體，能夠增強(qiáng)炎癥細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞等與內(nèi)細(xì)胞之間的黏附，激活內(nèi)皮細(xì)胞，使其更易穿透到內(nèi)皮。而內(nèi)皮細(xì)胞的黏附分子通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞之間或細(xì)胞與基質(zhì)間的結(jié)合，形成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、活化，進(jìn)而參與細(xì)胞的增殖與分化、炎性反應(yīng)、免疫應(yīng)答及腫瘤生長(zhǎng)繁殖、轉(zhuǎn)移等多種生理病理過(guò)程[6]。ICAM-1在正常組織中表達(dá)水平較低，但在肺、腎、胃組織中有著較高表達(dá)。新近研究發(fā)現(xiàn)，ICAM-1在多種前列腺癌[7]、卵巢癌[8]等多種惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)，與惡性腫瘤具有相關(guān)性。Hayes等[9]學(xué)者對(duì)300例正常組織、癌組織進(jìn)行了免疫組化研究，發(fā)現(xiàn)ICAM-1表達(dá)與惡性腫瘤相關(guān)，在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。已有較多研究報(bào)道了ICAM-1與肺癌[10]、肝癌[11]等臨床病理參數(shù)的關(guān)系。但關(guān)于ICAM-1與乳腺癌尤其是TNBC關(guān)系的報(bào)道尚少。因此，本研究采用免疫組化法對(duì)TNBC癌組織與癌旁組織的ICAM-1表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，ICAM-1在癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期相關(guān)，提示ICAM-1或許可作為反映TNBC惡性程度的指標(biāo)。此外，本研究還顯示，ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)者生存期明顯低于ICAM-1陰性表達(dá)者，提示ICAM-1表達(dá)與TNBC患者預(yù)后相關(guān)，ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)者預(yù)后較差。

綜上所述，ICAM-1與TNBC的侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)，可作為判斷腫瘤惡性程度的指標(biāo)，其高表達(dá)可提示預(yù)后不良。ICAM-1有望成為治療TNBC的潛在靶點(diǎn)。