間接免疫熒光法和酶聯免疫吸附試驗對抗中性粒細胞胞質抗體檢測方法的結果比較

于 瀟

（沈陽金域醫學檢驗所有限公司實驗室診斷部，遼寧 沈陽 110164）

抗中性粒細胞胞質抗體（ANCA）是抗中性粒細胞顆粒和單核細胞溶酶體的IgG抗體。腎肺綜合征的發病率與ANCA密切相關且已有許多關于靶抗原的報道[1-3]。抗原蛋白酶3（PR3）檢測和抗原髓過氧化物酶（MPO）檢測可有效的診斷非傳染性非典型肺炎[4-6]。目前臨床ANCA實驗室檢測技術主要有臨床間接免疫熒光法（IIF）、臨床酶聯免疫吸附法（ELISA）、臨床放射免疫法（RIA）、臨床免疫印跡法（IB）和臨床流式細胞儀（FCM）檢測，其中臨床IIF和臨床ELISA法在臨床上應用較為廣泛。筆者用IIF和ELISA檢測ANCA并對兩種臨床方法的結果進行了一致性分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月至2019年1月在沈陽金域醫學檢驗所有限公司實驗室診斷部的抗中性粒細胞胞質抗體檢測樣本200例進行IIF和ELISA檢測，所有陽性結果的血清分管并置零下75 ℃保存。

1.2 方法 儀器及試劑：①IIF試劑由德國奧蒙公司的粒細胞鑲嵌檢測試劑盒批號為F100134Y。每個試驗區包含四種生物切片即乙醇固定顆粒細胞生物切片、甲醛固定顆粒細胞生物切片、Hep2細胞生物切片和靈長類肝組織生物切片。②熒光顯微鏡由德國奧蒙宮制造的歐洲之星熒光顯微鏡。③Pr3試劑、MPO試劑由德國奧蒙公司的MPO和Pr1酶聯免疫吸附試劑盒，分別為E04234BK和E09235AQ批次；IIF法嚴格按照制造商的試劑說明操作，陰性和陽性對照血清清稀釋比為1∶14并在500倍熒光顯微鏡下用異硫氰酸熒光素（FITC）和乙醇固定中性粒細胞基質板標記熒光抗體。均勻胞質顆粒特異性熒光對胞質型（CANCA）呈陽性并對核周型抗體（PANCA）呈陽性。由于抗核抗體ANCA（ANA）會干擾乙醇固定的中性粒細胞基質ANCA的判斷，故Hep2細胞全部陽性熒光模型由兩名有經驗的中級技術人員進行判斷。用ELISA定量檢測Pr3和MPO時，應嚴格按照檢測程序進行，且陽性截止值大于25 RU/mL。

1.3 統計學方法 使用SPSS20.0對數據進行分析且，臨床IIF檢測陽性、陰性檢測例數為計數資料，行χ2檢驗，P＜0.05表明差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢驗方法檢測ANCA結果比較 兩種方法的一致性較好且差異具有臨床統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩種檢驗方法檢測ANCA結果比較

3 討論

ANCA在小血管炎發病機制、診斷、病程監測及復發預測等方面的臨床價值已得到證實[3]。單獨使用IIF法或酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測非傳染性非典型肺炎準確率較高，并隨著臨床生物基質片制備工藝的標準化和商業化及ANCA重組混合抗原和錨定結合技術的應用使兩種臨床方法的檢測結果基本一致[4]。結果表明IIF陰性和酶聯免疫吸附試驗陽性樣品中的Pr3和MPO濃度均低于其他樣品，這種低濃度的樣品導致了很弱的熒光或IIF法的負熒光發生，IIF法在一些研究中也得到了類似的結果[7-10]。ANA法和ANCA同時存在的現象非常普遍，一些研究報道了ANA對臨床IIF檢測ANCA結果的干擾[11-12]。本研究采用四種生物切片，用乙醇固定顆粒細胞生物切片，甲醛固定的粒細胞生物切片，Hep2細胞生物切片，靈長類肝組織生物切片，在一個血清樣品中臨床檢測ANCA。臨床IIF試驗能部分消除ANA的干擾。一些同時有ANCA和ANA陽性的樣本，由于無法識別其差異，可能被判定為臨床陰性，但選擇特定的酶聯免疫吸附試驗也不會導致漏檢[13-14]。研究發現ANCA與炎癥性腸病病變、腎小球基底部病變、膜疾病病變、Felty綜合征、慢性呼吸道感染也相關[15-16]。在這些疾病中，ANCA試驗的臨床熒光表現主要是PANCA，但有學者認為此表現不同于典型表現，但在臨床實際工作中很難做出明確的區分[17-18]。因此有研究將其歸類為PANCA，與這些疾病相關的ANCA的靶抗原主要是非MPO[19]。有報道稱粒細胞特異性蛋白酶、人體乳鐵蛋白、人體組織蛋白酶G、人體人溶菌酶相光膜蛋白2等靶抗原感染有關[20-21]。分析原因認為，IIF是粒細胞固定的，且基質片劑可以檢測幾乎所有抗出血性血清中，與ANCA相關靶抗原的抗體，但ELISA只能檢測單個抗原成分，并且取決于試劑情況。ANCA靶抗原可以采用常規檢測法，IIF法可以提供更豐富的臨床信息[12]，因此，可以根據個體的臨床差異，篩選出更多種類的ANCA相關靶抗原。筆者研究發現臨床兩種方法的臨床一致性較好，差異具有臨床統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，IIF和ELISA單獨檢測抗中性粒細胞胞質抗體均有漏檢，聯合臨床檢測的效果最佳。