基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究九香蟲(chóng)腎保護(hù)作用機(jī)制

何天目段燦燦侯曉暉李曉飛張建永*

（1.遵義醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，貴州 遵義563003； 2.遵義醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴州 遵義563003； 3.遵義醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)藥理教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨特色民族藥教育部國(guó)際合作聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，貴州 遵義563003）

九香蟲(chóng)是半翅目蝽科兜蝽屬九香蟲(chóng)（Aspongopus chinensisDallas）的干燥體，別名打屁蟲(chóng)、屁巴蟲(chóng)等，廣泛分布于貴州、云南、四川等地，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥昆蟲(chóng)。始載于《本草綱目》：“咸溫?zé)o毒，用于膈脘滯氣，脾腎虧損，壯元陽(yáng)”。《本草新編》 中記載：“蟲(chóng)中之至佳者，亦興陽(yáng)之物，以扶衰弱最宜”［1］，古籍皆強(qiáng)調(diào)了其對(duì)腎的補(bǔ)益作用。2020 年版《中國(guó)藥典》 收錄九香蟲(chóng)，認(rèn)為其歸肝、脾、腎經(jīng)，具有理氣止痛，溫中助陽(yáng)的功效，主治腎虛陽(yáng)痿，胃寒脹痛等［2］。同時(shí)九香蟲(chóng)在民間常用于泡酒，具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)、理氣止痛、興陽(yáng)益精之功效［3］。九香蟲(chóng)發(fā)揮腎保護(hù)作用的功效屢有記載，其機(jī)制可能與尿素循環(huán)、抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子基因磷酸化、抗炎等有關(guān)［4?9］，但其具體分子機(jī)制尚不清楚。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于“藥物?靶點(diǎn)?疾病”相互作用網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，通過(guò)分析基因、疾病、藥物等網(wǎng)絡(luò)庫(kù)的關(guān)聯(lián)，利用專業(yè)算法及網(wǎng)絡(luò)分析軟件，整體揭示“藥物?靶點(diǎn)”、“靶點(diǎn)?疾病”、“藥物?疾病”互作的奧秘，揭示復(fù)雜藥物協(xié)同作用于人體的奧秘，并指導(dǎo)臨床精準(zhǔn)用藥及新藥研發(fā)［10］。目前，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)已經(jīng)被廣泛用于中藥腎毒性等的研究中，如有研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析雷公藤腎毒性［11］、商陸腎損傷［12］、朱砂安神丸肝腎解毒等作用機(jī)制［13］，為其臨床應(yīng)用提供參考。

綜上，本研究擬采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)探討九香蟲(chóng)腎保護(hù)作用機(jī)制，為提高九香蟲(chóng)的藥用效應(yīng)，擴(kuò)大其臨床應(yīng)用提供新的線索。

1 方法

1.1 九香蟲(chóng)活性成分篩選及靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 本研究通過(guò)檢索中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方、Pubmed、Web of Science 等國(guó)內(nèi)外數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取九香蟲(chóng)主要化學(xué)成分，經(jīng)Pubchem 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：／ ／pubchem.ncbi.nlm.nih.gov／）驗(yàn)證和轉(zhuǎn)化，并整理分類。

1.2 九香蟲(chóng)靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 采用Chemdraw19.0 軟件繪制活性成分的結(jié)構(gòu)后輸入到 Targetnet 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：／ ／targetnet.scbdd.com／）預(yù)測(cè)作用靶點(diǎn)，篩選條件為：預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率（Accuracy，AUC）＞＝0.7，預(yù)測(cè)概率（Probability，Prob）＞0.9［14］。并經(jīng)Uniprot（https：／ ／www.uniprot.org／）校正和轉(zhuǎn)化，確定物種為“Homo sapiens”的靶點(diǎn)。進(jìn)一步采用Cytoscape3.7.0 軟件構(gòu)建九香蟲(chóng)“成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，并運(yùn)用Network Analyzer 插件分析網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)。

1.3 九香蟲(chóng)腎保護(hù)作用潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過(guò)在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)（http：／ ／www.genecards.org／）、比較基因組學(xué)毒理數(shù)據(jù)庫(kù)（The Comparative Toxicogenomics Database，CTD，http：／ ／ctdbase.org／）、Digsee 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：／ ／210.107.182.71／geneSearch／）中輸入 關(guān)鍵詞“腎毒性（nephrotoxicity）、腎損傷（renal injury、kidney injury）”，篩選已報(bào)道的、標(biāo)記有“marker／mechanism”的基因，剔除重復(fù)基因，得到腎損傷靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)，并經(jīng)Uniprot 校正，篩選物種為“Homo sapiens”的靶點(diǎn)，利用image GP 工具（http：／ ／www.ehbio.com／ImageGP／index.php／）繪制維恩圖整合九香蟲(chóng)腎保護(hù)共同靶點(diǎn)。

1.4 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)與“核心成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建String［15］（Search Tool for the Retrieval of InteractingGenes／Proteins，Version：11.0，http：／ ／string?db.org／）數(shù)據(jù)庫(kù)旨在整合所有可公開(kāi)獲得的蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)相互作用信息來(lái)源，搜尋已知蛋白質(zhì)和預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)之間相互作用的系統(tǒng)。將九香蟲(chóng)腎保護(hù)共同靶點(diǎn)導(dǎo)入String 數(shù)據(jù)庫(kù)，選用Multiple proteins 工具，篩選物種為人源，選取高置信度（high con?fidence，0.7），獲取蛋 白相互作用。將其導(dǎo) 入Cytoscape3.7.0 軟件繪制蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（protein protein interaction network，PPI network），并與“成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行融合（Merge），運(yùn)用Network Analyzer 插件分析網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，篩選出節(jié)點(diǎn)度高于平均值的節(jié)點(diǎn)進(jìn)一步構(gòu)建“核心成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，用于后續(xù)分析。

1.5 核心靶點(diǎn)基因功能及通路分析 Enrichr［16］數(shù)據(jù)庫(kù)（http：／ ／amp.pharm.mssm.edu／Enrichr／＃）常用于基因富集分析，包含來(lái)自102 個(gè)基因集庫(kù)的180 184 個(gè)帶注釋的基因集。同時(shí)將“1.4”項(xiàng)下篩選后的核心靶點(diǎn)導(dǎo)入Enrichr 網(wǎng)站，選取GO 生物進(jìn)程（Biological Process）、細(xì)胞組分（Cellular Component）、分子功能（Molecular Function）及Pathways（KEGG 2019 Human）進(jìn)行GO、KEGG 通路富集分析。以P＜0.05 為條件，依據(jù)綜合得分（combined score），通過(guò)image GP 工具繪制“GO 細(xì)胞組分、分子功能及生物進(jìn)程富集分析”及“KEGG 通路富集氣泡圖”。

1.6 iGEMDOCK 分子對(duì)接 iGEMDOCK［17］是開(kāi)源的分子對(duì)接軟件，用于系統(tǒng)評(píng)估和活性篩選，通過(guò)基于對(duì)接位點(diǎn)（蛋白質(zhì)?配體作用）和化合物性質(zhì)（原子組成）使用k?均值和分層聚類方法提供后分析工具，能直接導(dǎo)入配體分子進(jìn)行對(duì)接，并且允許多個(gè)配體同時(shí)進(jìn)行對(duì)接。其能量打分函數(shù)通過(guò)蛋白質(zhì)?化合物相互作用的靜電、氫鍵和范德華力打分，結(jié)果以能量的高低去判斷結(jié)合程度，化合物分子與受體結(jié)合的構(gòu)象穩(wěn)定時(shí)能量越低，結(jié)合性越高。將九香蟲(chóng)核心成分與靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，并以腎保護(hù)藥物卡托普利（Captopril，Pubchem ID：44093）及氯沙 坦（Losartan，Pubchem ID：3961）作為陽(yáng)性對(duì)照藥［18?19］。具體方法為，首先在在PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：／ ／www.rcsb.org／）中搜索靶點(diǎn)的蛋白結(jié)構(gòu)，限定物種為人，以PDB 格式上傳后選擇限定配體（bounded ligand）類型準(zhǔn)備對(duì)接；核心成分通過(guò)Chem 3D 19.0 軟件使化合物能量最小化后以Mol 格式上傳后選擇標(biāo)準(zhǔn)對(duì)接模式進(jìn)行分子對(duì)接，具體對(duì)接參數(shù)為generic evolutionary method ＝200、generation ＝70、number of solution＝2。

2 結(jié)果

2.1 九香蟲(chóng)活性成分篩選 通過(guò)檢索國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，經(jīng)Pubchem 轉(zhuǎn)化，剔除相同成分，共篩選到九香蟲(chóng)活性成分93 種，見(jiàn)表1，且與文獻(xiàn)報(bào)道的九香蟲(chóng)主要活性成分相符。主要分為核苷酸類（18 種）、多巴胺類（18 種）、營(yíng)養(yǎng)成分（16 種）、芳香類成分（5 種）及其他成分（36 種）。其中，多巴胺類（±）?Aspongamide A、Aspongopusamide A、N?乙酰多巴胺及3，4?二羥基苯丙酮等腎保護(hù)作用成分在本研究中均被收錄［4?5］。

表1 九香蟲(chóng)主要活性成分

續(xù)表1

續(xù)表1

2.2 九香蟲(chóng)靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 采用Targetnet 數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)93 個(gè)活性成分的作用靶點(diǎn)，并經(jīng)Uniprot 校正后共獲取靶點(diǎn)288 個(gè)。進(jìn)一步采用Cytoscape3.7.0 軟件構(gòu)建九香蟲(chóng)“成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖1。其中，按照度值大小排名前五的成分為1，2?苯二醇（O22，degree＝83）、2，3?丁二醇（O31，degree ＝79）、3，4?二羥基苯乙醇（O23，degree ＝72）、十三烷（Q1，degree ＝70）、十二烷二酸（Y9，degree＝70）；排名前五的靶點(diǎn)為碳酸酐酶6（Carbonic anhydrase 6，CA6，degree ＝69）、碳酸酐 酶7（Carbonic anhydrase 7，CA7，degree＝65）、碳酸酐酶5B（Carbonic anhydrase 5B，CA5B，degree ＝64）、碳酸酐酶5 A（Carbonic anhydrase 5 A，CA5A，degree ＝63）、羧酸酯酶2（Cocaine esterase，CES2，degree＝59）。

圖1 九香蟲(chóng)“成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)

2.3 九香蟲(chóng)腎保護(hù)作用潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 以腎毒性（nephro?toxicity）及腎損傷（renal injury、kidney injury）為關(guān)鍵詞在GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到靶點(diǎn)1 432 個(gè)、CTD 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到102 個(gè)、Digsee 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到279 個(gè)，去除重復(fù)靶點(diǎn)，并經(jīng)Uniprot 校正整合共得到腎毒性相關(guān)靶點(diǎn)1 565 個(gè)。腎毒性相關(guān)1 565 個(gè)靶點(diǎn)與九香蟲(chóng)288 個(gè)靶點(diǎn)取交集得到九香蟲(chóng)發(fā)揮腎保護(hù)作用潛在靶點(diǎn)104 個(gè)，用于后續(xù)進(jìn)一步分析。

2.4 蛋白相互作用（PPI）與“核心成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建分析 將九香蟲(chóng)腎保護(hù)104 個(gè)靶點(diǎn)蛋白導(dǎo)入String 數(shù)據(jù)庫(kù)中，獲取相互作用關(guān)系，去除孤立靶點(diǎn)后得到94 個(gè)靶點(diǎn)蛋白，隨后將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.7.0 軟件構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖2。并與“成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行融合，去除孤立節(jié)點(diǎn)共有182 個(gè)節(jié)點(diǎn)。其中88 個(gè)節(jié)點(diǎn)代表九香蟲(chóng)成分，平均度值為10.55，大于平均度值的成分有49 個(gè)；94 個(gè)節(jié)點(diǎn)代表九香蟲(chóng)腎保護(hù)靶點(diǎn)，平均度值為16.02，大于平均度值的靶點(diǎn)有36 個(gè)，將49 個(gè)活性成分與36 個(gè)靶點(diǎn)構(gòu)建“核心成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖3，運(yùn)用Network Analyzer 插件按照度值大小排名前10 核心成分、靶點(diǎn)見(jiàn)表2。

表2 九香蟲(chóng)腎保護(hù)核心成分?靶點(diǎn)（Top10）

圖3 九香蟲(chóng)腎保護(hù)“核心成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)

圖2 蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)

2.5 GO 富集分析和KEGG 靶點(diǎn)通路注釋分析 將篩選出的36 個(gè)核心靶點(diǎn)導(dǎo)入Enrichr 數(shù)據(jù)庫(kù)，以P＜0.05 為條件進(jìn)行GO 富集分析及KEGG 通路注釋分析，結(jié)果按綜合得分大小排列。GO 分析得到686 個(gè)生物進(jìn)程、90 個(gè)分子功能及29 個(gè)細(xì)胞組分，結(jié)果見(jiàn)圖4（Top10）。KEGG 通路注釋分析，共富集到91 條關(guān)鍵通路，根據(jù)綜合得分大小取前20條通路，并用image GP 工具進(jìn)行可視化，見(jiàn)表3、圖5。

表3 KEGG 通路富集分析（Top20）

圖4 GO 細(xì)胞組分、分子功能及生物進(jìn)程富集分析（Top 10）

圖5 KEGG 通路富集氣泡圖（Top 20）

2.6 iGEMDOCK 分子對(duì)接 采用iGEMDOCK V2.1 軟件將九香蟲(chóng)腎保護(hù)“核心成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)中的49 個(gè)核心成分與度值較高的10 個(gè)核心靶點(diǎn)選擇對(duì)接位點(diǎn)后進(jìn)行分子對(duì)接，見(jiàn)表4，其中Toll 樣受體（Toll?like receptor 9，TLR9）因無(wú)人源蛋白結(jié)構(gòu)未進(jìn)行分子對(duì)接。配體與受體結(jié)合的構(gòu)象穩(wěn)定時(shí)能量越低，結(jié)合可能性越大。其分子對(duì)接結(jié)果見(jiàn)圖6，1，2?脫氫?N?乙酰基多巴胺（D1）、3，4?二羥基苯基乙酸（O24）、阿斯吡嗪（O16）、亞麻酸（Y6）等結(jié)合性較強(qiáng)，且與陽(yáng)性藥結(jié)果相似，內(nèi)皮型一氧化氮合酶（Nitric oxide synthase，endothelial，NOS3）、花生四烯酸5?脂氧合酶（Arachidonate 5?lipoxygenase，ALOX5）、組蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylase 4，HDAC4）、轉(zhuǎn)錄因子（Transcription factor p65，RELA）及半胱天冬酶9（Caspase?9，CASP9）等靶點(diǎn)結(jié)合性也較高。其中NOS3 靶點(diǎn)與成分3，4?二羥基苯基乙酸（O24）及1，2?脫氫?N?乙?；喟桶罚―1）結(jié)合性較強(qiáng)，見(jiàn)圖7。

圖6 九香蟲(chóng)腎保護(hù)靶點(diǎn)分子對(duì)接結(jié)果

表4 九香蟲(chóng)腎保護(hù)靶點(diǎn)分子對(duì)接信息

圖7 NOS3 與O24、D1 最佳對(duì)接形式

3 討論

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為腎為“先天之本”、“生命之源”，腎具藏精、主水、主納氣、主骨、生髓等功效［20］。九香蟲(chóng)作為傳統(tǒng)中藥，因其補(bǔ)腎壯陽(yáng)、興陽(yáng)益精、氣血雙宣之功效而被廣泛藥食兩用，正如民間常說(shuō)“有錢人吃人參鹿茸，無(wú)錢人吃打屁蟲(chóng)”。目前研究發(fā)現(xiàn)，九香蟲(chóng)水提取物灌胃腎陽(yáng)虛小鼠后，小鼠血清中尿素含量下降，力竭游泳時(shí)間延長(zhǎng)，具有腎保護(hù)作用［1］。九香蟲(chóng)提取物Aspongopusamide A、N?乙酰多巴胺及3，4?二羥基苯丙酮等可能通過(guò)抑制環(huán)氧合酶?2（Prostaglandin G／H synthase 2，COX?2／PTGS2）對(duì)高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞發(fā)揮腎保護(hù)作用［4］。也有研究發(fā)現(xiàn)九香蟲(chóng)中（±）?Aspongamide A 在腎細(xì)胞上能抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（transforming growth factor?β1，TGF?β1）誘導(dǎo)的基因磷酸化，并能抑制高糖誘導(dǎo)的促細(xì)胞炎癥因子和膠原分泌，在慢性腎病及腎纖維化上發(fā)揮腎保護(hù)作用［5］。同時(shí)，結(jié)合本研究中“PPI”網(wǎng)絡(luò)及通路富集分析進(jìn)一步探析發(fā)現(xiàn)，Aspongopusamide A、N?乙酰多巴胺及3，4?二羥基苯丙酮可能通過(guò)基 質(zhì)金屬 蛋白酶9（Matrix metalloproteinase?9，MMP9）、環(huán)氧合 酶?1（Prostaglandin G／H synthase 1，PTGS1）、TLR9、ALOX5 等靶點(diǎn)間接作用于COX?2 靶點(diǎn)，且與調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素17（interleukin 17，IL?17）、腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor，TNF）信號(hào)通路、5?羥色胺能突觸及花生四烯酸代謝有關(guān)。此外，TLR9、PTGS1 及ALOX5 等靶點(diǎn)在“核心成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)中度值均較高，表明本研究預(yù)測(cè)較準(zhǔn)，同時(shí)新發(fā)現(xiàn)的靶點(diǎn)通路，為進(jìn)一步研究提供了參考。因此開(kāi)展網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究對(duì)于更好揭示九香蟲(chóng)腎保護(hù)作用具有一定意義。

3.1 九香蟲(chóng)腎保護(hù)“多成分?多靶點(diǎn)?多通路”特點(diǎn)與分子對(duì)接驗(yàn)證 經(jīng)九香蟲(chóng)腎保護(hù)“核心成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)及KEGG 通路富集分析，九香蟲(chóng)發(fā)揮腎保護(hù)作用的核心成分有49 個(gè)，核心靶點(diǎn)36 個(gè)，關(guān)鍵通路達(dá)91 條，揭示了九香蟲(chóng)發(fā)揮腎保護(hù)作用是通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多通路共同作用的機(jī)制。經(jīng)分子對(duì)接驗(yàn)證，阿斯吡嗪、亞麻酸、1，2?脫氫?N?乙?；喟桶返瓤赡苁前l(fā)揮腎保護(hù)作用的活性成分。核心“成分?靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)中度值較高的NOS3、ALOX5、HDAC4 及RELA 等核心靶點(diǎn)與九香蟲(chóng)成分結(jié)合性也較強(qiáng)，提示本次靶點(diǎn)預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性較高。整合網(wǎng)絡(luò)及通路富集分析，九香蟲(chóng)可能通過(guò)“腎素分泌”、“腎素?血管緊張素系統(tǒng)”、花生四烯酸代謝、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）、精氨酸代謝等通路發(fā)揮腎保護(hù)作用，并將以上通路結(jié)果可視化，見(jiàn)圖8。

圖8 關(guān)鍵KEGG 通路分析

3.2 九香蟲(chóng)可能通過(guò)“腎素分泌”、“腎素?血管緊張素系統(tǒng)”發(fā)揮腎保護(hù)作用 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（Angiotensin?converting enzyme，ACE）、前列腺素E2 受 體EP2 亞型（Prostaglandin E2 receptor EP2 subtype，PTGER2）、前列腺素E2 受體EP4 亞型（Prostaglandin E2 receptor EP4 subtype，PTGER4）和腺苷受體 A1（Adenosine receptor A1，ADORA1）靶點(diǎn)參與了腎素分泌通路；ACE、氨肽酶（Aminopeptidase N，ANPEP）靶點(diǎn)參與了“腎素?血管緊張素系統(tǒng)”通路。其中，ACE 可作用血管緊張素Ⅱ（Angio?tensin Ⅱ，AngⅡ）生成腎素，發(fā)揮收縮血管和刺激醛固酮分泌的生理效應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn)ACE 活性降低可導(dǎo)致AngⅡ水平降低，從而保護(hù)腎細(xì)胞［21］。有研究發(fā)現(xiàn)抑制糖尿病腎病小鼠COX?2 表達(dá)下調(diào)尿前列腺素E2 水平抑制腎素分泌發(fā)揮腎保護(hù)作用［22］。因此，九香蟲(chóng)可能通過(guò)作用于ACE 等靶點(diǎn)，通過(guò)調(diào)節(jié)腎素分泌等發(fā)揮腎保護(hù)作用。

3.3 九香蟲(chóng)腎保護(hù)可能與花生四烯酸代謝、VEGF 信號(hào)通路有關(guān) PTGS2、ALOX5、PTGS1 靶點(diǎn)參與了花生四烯酸代謝途 徑，PTGS2、CASP9、NOS3、蛋白激酶（RAC?alpha serine／threonine?protein kinase，AKT1）參與了VEGF 信號(hào)通路。VEGF 通路下游絲裂原活化蛋白激酶（mitogen?activated protein kinase，MAPK）通路是腎毒性的關(guān)鍵抑制通路［23］，且VEGF 信號(hào)通路與花生四烯酸代謝相關(guān)，PTGS2 是其共同作用靶點(diǎn)。也有研究發(fā)現(xiàn)，花生四烯酸可引起人腎小球足細(xì)胞凋亡［24］。PTGS2 是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素的關(guān)鍵酶，PTGS2 在腎損傷中高度表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)，PTGS2 水平降低在多種藥物致大鼠腎損傷模型的保護(hù)中發(fā)揮作用［25?26］。還有研究發(fā)現(xiàn)，PTGS2 抑制劑對(duì)大鼠腎間質(zhì)纖維化有保護(hù)作用［27］。因此，九香蟲(chóng)可能通過(guò)影響VEGF信號(hào)通路及花生四烯酸代謝調(diào)節(jié)PTGS2 表達(dá)發(fā)揮腎保護(hù)作用。

3.4 九香蟲(chóng)腎保護(hù)可能與精氨酸代謝有關(guān) 本研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)型一氧化氮合酶（Nitric oxide synthase，brain，NOS1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（Nitric oxide synthase，inducible，NOS2）及NOS3 靶點(diǎn)參與了精氨酸代謝通路，且NOS3 靶點(diǎn)在分子對(duì)接驗(yàn)證中結(jié)合性較強(qiáng)。腎臟在精氨酸代謝中扮演重要角色，而一氧化氮合酶是一種同工酶，在腎單位中廣泛表達(dá)。精氨酸在人體內(nèi)通過(guò)鳥(niǎo)氨酸循環(huán)，參與尿素的形成［28］。有研究發(fā)現(xiàn)金匱腎氣丸及六味地黃丸可通過(guò)影響精氨酸代謝發(fā)揮腎保護(hù)作用［29］。也有研究發(fā)現(xiàn)，二惡烷腎毒性［30］、阿奇霉素腎毒性［31］、多囊腎病發(fā)生［32］、腎移植術(shù)后急性腎損傷也與精氨酸代謝途徑有關(guān)。因此，九香蟲(chóng)可能通過(guò)影響精氨酸代謝調(diào)節(jié)尿素循環(huán)等發(fā)揮腎保護(hù)作用。

綜上所述，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分子對(duì)接等一系列整合分析從系統(tǒng)層面揭示九香蟲(chóng)腎保護(hù)“多成分、多靶點(diǎn)、多通路”的分子作用機(jī)制。發(fā)現(xiàn)阿斯吡嗪、亞麻酸、1，2?脫氫?N?乙?；喟桶芳癗OS3、ALOX5、HDAC4、RELA 等潛在治療成分與靶點(diǎn)，可能通過(guò)調(diào)節(jié)“腎素分泌”“腎素?血管緊張素系統(tǒng)”、花生四烯酸代謝、VEGF、精氨酸代謝等通路有關(guān)，為九香蟲(chóng)腎保護(hù)作用機(jī)制研究及其資源進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供參考。