建設新型冠狀病毒PCR檢測實驗室的探討

肖 濤，吳春鋒，陳 晶，陳珊珊，阮丹燕

上海市金山區亭林醫院檢驗科，上海 201505

目前，聚合酶鏈反應(PCR)被廣泛應用于疾病診斷[1]，它可對疾病相關的DNA序列進行體外引物定向酶促擴增[2]，從而具有極高的敏感性和特異性，是基因擴增技術的一次重大革新[3]。新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)被納入《中華人民共和國傳染病防治法》[4]規定的乙類傳染病，采用甲類傳染病的預防和控制措施，要求二級以上的綜合性醫院建立新型冠狀病毒PCR檢測實驗室。上海市金山區亭林醫院檢驗科按照國家相關要求，對PCR實驗室進行了必要的升級改造，結合新型冠狀病毒檢測中發現的問題，制訂了相應的新型冠狀病毒PCR檢測操作管理流程，現將新型冠狀病毒PCR實驗室的建設經驗總結如下。

1 實驗區域的劃分

為了確保核酸在檢測過程中不受到污染，需要加強實驗防污染的建設，首先根據現有的實際情況，因地制宜合理挑選出合適檢測核酸的地方進行規劃、設計PCR實驗室；按照《臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準》1.1條[5]，將核酸實驗室大體分為3個獨立的實驗區，即試劑準備區、標本制備區、擴增及產物分析區；每個實驗區都是獨立的房間，不同的區與區之間有傳遞窗，共有一條長走廊，每個實驗區有緩沖區并前后各有一道自動可關閉門，緩沖區在兩扇門之間呈“Z”字樣。各實驗區門上須有一個可視窗，各實驗區進入實驗室進行操作的走向呈單一方向，并必須遵守：PCR實驗室大門→走廊→外門→緩沖區→內門→實驗區內；4個實驗區之間的走向應遵循單向的原則[6]：試劑準備區→標本制備區→擴增及產物分析區，不可逆向行走，避免出現交叉污染。實驗室安裝門禁(人臉識別)，并設有權限，只允許PCR實驗工作的人員才有資格進入，其他人員一律免入內。實驗室的走廊上掛有試劑準備區制度、標本制備區制度、擴增及產物分析區制度等3塊制度牌。見圖1。

1.1實驗室標簽的制作 為了便于區分每個實驗室的不同，不同的工作區域使用不同顏色的標簽貼在各實驗區所用儀器設備上、穿不同顏色工作服[6]。分別用白、藍、綠、紅等4種顏色制成標本接收區、試劑準備區、標本制備區、擴增及產物分析區標簽，每個實驗區都統一按規定的唯一顏色制作規格大小相同的標簽貼于本實驗區的所有器材上。門上應貼有“生物危害標識”，生物安全標識內容主要包括生物安全標示、二級生物安全實驗室、實驗室名稱、實驗室負責人、聯系電話、外來人員未經許可嚴禁入內等。

2 設備的配置

2.1試劑準備區的功能及作用 試劑準備區主要是進行是實驗試劑的儲存及試驗時的試劑配制等。試劑準備區儀器、設備有醫用冷藏冷凍箱(2～8 ℃)、放入醫用冰箱的溫度計(-40～40 ℃)、醫用離心機、振蕩儀、移動紫外線消毒車、移液器(10、20、100、200、1 000 μL)、電子天平、燒杯、量筒、玻璃棒、溫濕度表等。

2.2標本制備區的功能及作用 標本制備區主要是進行標本的分裝、加樣離心、核酸提取、樣本的保存等。標本制備區的主要儀器設備有醫用冷藏冷凍箱(2～8 ℃)、存放標本的冰箱、放入醫用冰箱的溫度計(-40～40 ℃)、全自動核酸提取儀、干式恒溫器、醫用離心機、振蕩儀、紫外線消毒車、生物安全柜、微型計算機、移液槍、溫濕度表等。

2.3擴增及產物分析區的功能及作用 擴增及產物分析區主要是進行核酸擴增實驗，以及對擴增產物的分析檢測等。擴增及產物分析區主要儀器設備有核酸分析儀(熒光PCR分析儀)、移動紫外線消毒車、微型計算機、醫用冷藏冷凍箱、移液槍、溫濕度表、溫度計等。見圖1。

圖1 PCR實驗室的平面圖

3 人員的配備

人員是實驗室關鍵的一環。根據實驗的需要，配備一定數量的人員(至少兩名檢驗專業中級職稱的人員并持有PCR上崗證)，在經驗豐富、中級或以上職稱的人員中挑選業務水平較好的，并具有PCR資格證的人擔任此實驗室的負責人，或由該實驗組組長負責實驗室和PCR工作人員的管理[7]。PCR實驗室工作人員須參加國家衛生健康委員會或上海市臨床檢驗中心舉辦的醫療機構臨床基因擴增檢驗技術實驗人員上崗培訓，經理論培訓學習，通過理論考試及實踐考核合格后，取得PCR上崗證[8]；新取得PCR上崗證人員需在老員工的指導下進行實驗，或派去已建好PCR實驗室并開展工作且技術成熟的單位進行學習。在實驗操作時，實驗操作按標準操作規程進行。

4 環境的控制

為確保外界空氣不受污染，根據傳染病的管理辦法，核酸實驗室標本制備區、擴增及產物分析區設定為負壓，這樣就可以防止室內空氣外流。實驗室要保證里面工作人員的舒適性，需安裝空調，但空調不能采用中央空調，不同實驗區之間是獨立的排風通道，獨立的排風系統，用監控系統控制室內環境，系統顯示器安裝在長走廊上，可以不進入實驗區就可觀看實驗區內的溫度、濕度、負壓等。進出實驗工作區應做到人、物分離，避免交叉感染，不同實驗區之間有專用的用品，如手套、鞋套、防護服、帽子、口罩、消毒用品、垃圾桶、拖把等，擺放有序，并貼有本區專用顏色的標簽，以便于區分不同實驗區間的用品。

5 質量體系文件的建立與管理

根據本科室相關程序文件，核酸實驗室也相繼建立體系文件，包括預防措施管理程序、安全手冊、質量手冊、信息系統程序手冊、人員培訓和考核管理程序、環境設施管理程序(溫濕度記錄、冰箱溫度記錄、臺面消毒記錄、空氣消毒記錄)、設備管理程序(儀器、設備的使用記錄、維護記錄、保養記錄)、標本管理程序、報告審核程序、廢棄物管理程序、消防安全管理程序、事故報告程序、隱私保護手冊、標本管理手冊(主要是標本的接收、運送、檢測、保存、處理)、保密程序(主要對患者的資料信息、原始數據及檢測結果等保密，新型冠狀病毒PCR工作人員均有保密的責任)。

6 實驗室生物安全管理

新型冠狀病毒具有傳染性，主要是通過呼吸道飛沫傳播和接觸性傳播[9]，檢測操作會與標本直接性接觸，進入PCR實驗的前后都須嚴格按照規范做好防護[10]，對儀器和物體表面、地面、標本轉運箱、空氣、防護服、手套等進行消毒處理，廢棄物統一放在高壓蒸汽滅菌鍋里進行有效的消毒滅菌，從而有效避免二次污染。

7 新型冠狀病毒PCR檢測的質量控制

7.1儀器、設備 對儀器、設備定期進行校準，保證儀器、設備正常運行，登記每天儀器、設備的運行情況和保養、維修記錄等。

7.2試劑 檢測試劑是檢測中必備的一環。為確保檢測結果的準確性，更換新試劑時，應對新批號試劑進行驗證，并保存原始記錄及登記。

7.3環境因素 檢測時，環境也會對結果有一定的影響，如濕度、溫度、污染等。每天都須對濕度、溫度進行登記。

7.4人員操作 工作人員要嚴格按操作流程進行規范操作，加強學習、培訓[11]。

7.5室內質控 應每天進行室內質控評估。室內質控是保證實驗結果可靠、準確的一項工作[12]，是對該實驗室檢測前、中、后過程的評估。

7.6室間質控 須定期參加室間質控，使本實驗室檢測的結果與其他實驗室的結果有可比性，符合上海市臨床檢驗中心的要求。

8 結 語

本院新型冠狀病毒PCR實驗室在區域劃分、設備配置、人員配備、環境控制、質量管理等方面都得到了合理配置或嚴格管理，可以更好地為患者服務，同時為其他新型冠狀病毒PCR實驗室的建設提供參考。