皮膚淺部真菌患者KOH鏡檢結果及細胞免疫相關指標對真菌感染和定植的鑒別價值分析

林寧寧，楊正生,林瑞靜,張路方,楊會君*

(1.秦皇島市第一醫院 皮膚科,河北 秦皇島066000；2.河北灤平縣中醫院 體檢科,河北 灤平068250)

真菌廣泛分布在自然界中，且部分真菌對人類間接或者直接有利，另一部分真菌同時有害，臨床上根據多數致病性真菌感染侵犯部位分為深部真菌感染和淺部真菌感染兩類[1]。其中皮膚淺表真菌感染是指多種條件致病菌或者致病真菌感染人體皮膚、甲、毛發等淺表組織，大多數的真菌感染發生后疾病較為頑固，較易出現交叉感染和傳播，若不及時治療則在一定程度上誘導全身感染的發生[2-3]。另外有研究顯示，真菌感染的前兆為真菌定植，僅靠臨床上常用的真菌培養無法對真菌感染和定植進行鑒別，給此病治療方案的選擇帶來了不便[4]。基于上述形式，積極鑒別皮膚淺表真菌感染情況、感染和定植情況，對此類患者治療方案的選擇和預后恢復具有重要的意義，在本文中分析皮膚淺部真菌患者氫氧化鉀溶液(KOH)鏡檢結果及細胞免疫相關指標對真菌感染和定植的鑒別價值，為臨床上治療方案的選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2019年1月-2020年1月醫院收治的皮膚淺表真菌感染患者135例作為研究對象，男72例，女63例，年齡25-67歲，平均年齡(43.70±17.65)歲，樣本：體癬樣本28例，足癬樣本24例，甲癬樣本27例，花斑糠疹樣本29例，頭癬樣本27例，所有患者及家屬均知情同意本次研究，簽署知情同意書，且經醫院倫理委員會批準。

納入標準：患者臨床表現均符合皮膚淺部真菌感染的標準，樣本采集前近7 d內未使用任何抗真菌藥物治療，自愿參與本次研究。

排除標準：除皮膚淺部真菌感染外合并其他部位感染者，如肺部感染、呼吸道感染等；合并自身免疫系統性疾病者；合并惡性腫瘤者；存在全身感染征象者；合并精神障礙、溝通障礙者。

1.2 方法

1.2.1KOH鏡檢 取10 g KOH加入至30 ml蒸餾水中，待其溶解后依次加入40 ml二甲基亞砜、5 ml丙三醇混合均勻后加入蒸餾水至100 ml混合均勻，將所需檢測的樣本放置于載玻片上，滴加1滴-2滴上述所制備的試劑，蓋上載玻片，將周邊溢出的液體吸除干凈后在顯微鏡下鏡檢。

1.2.2細菌感染和定植診斷 取KOH鏡檢得到的105例陽性患者檢測部位標本，放置于無菌瓶中，在行涂片、革蘭染色后行鏡檢觀察，若患者樣本涂片鏡檢顯示有細菌周圍存在大量的白細胞浸潤、吞噬且伴隨著非組織樣本正常菌群為細胞感染，無明顯白細胞浸潤為細菌定植。根據上述結果將105例陽性患者分為真菌感染組79例和真菌定植組26例。

1.2.3細胞免疫相關指標檢測 采用流式細胞儀檢測真菌感染組、真菌定植組患者細胞免疫相關指標CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+比值。取細胞感染組、真菌定植組患者清晨空腹靜脈血3 ml，放置于EDTA-K2抗凝真空采血管中，分為兩管，一管加入20 μl CD4+單克隆抗體，另一管加入20 μl CD3+、20 μl CD8+單克隆抗體，在室溫環境下孵育0.5 h后將融血劑加入至各管中，待完全溶血后行離心處理，10 000×g離心5 min，將上清液棄除后，使用洗滌液洗滌，之后將150 μl固定劑加入至各管中，使用0.5 ml PBS混合均勻制備為懸液，將細胞濃度調整為1×105-1×106/mL，使用美國BectonDickinso公司流式細胞儀檢測CD3+、CD4+、CD8+水平，并計算CD4+/CD8+比值，分析細胞免疫相關指標CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+比值對細胞感染、定植的鑒別價值。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 KOH鏡檢結果分析

如表1、圖1所示，135例樣本中KOH鏡檢顯示105例陽性，陽性檢出率為77.78%(105/135)。其中體癬樣本陽性檢出率為85.71%(24/28)，足癬樣本陽性檢出率為79.17%(19/24)，甲癬樣本陽性檢出率為81.48%(22/27)，花斑糠疹樣本陽性檢出率為65.52%(19/29)，頭癬樣本陽性檢出率為77.78%(21/27)。

圖1 KOH鏡檢結果分析

表1 KOH鏡檢結果分析

2.2 真菌感染組、真菌定植組患者細胞免疫相關指標表達比較

如表2所示，與真菌定植組相比，真菌感染組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+降低，CD8+升高，差異具有統計學意義(P<0.05)。

表2 真菌感染組、真菌定植組患者細胞免疫相關指標表達比較

2.3 細胞相關免疫指標對皮膚淺表細菌感染和定植的鑒別價值ROC曲線分析

如表3、圖2所示，與CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+單獨鑒別相比，4項聯合對皮膚淺表細菌感染和定植的鑒別價值最為理想(P<0.05)。

圖2 細胞相關免疫指標對皮膚淺表細菌感染和定植的鑒別價值ROC曲線分析

表3 細胞相關免疫指標對皮膚淺表細菌感染和定植的鑒別價值ROC曲線分析

3 討論

皮膚淺表性真菌感染在皮膚科較為常見，且隨著近年來人們生活環境的改變，此病的發生率表現為逐年升高的趨勢，其主要侵犯表皮、甲、毛發等，嚴重影響著患者的生活質量[5-7]。臨床上對于皮膚淺表真菌感染的診斷多采用真菌培養和直接KOH鏡檢，但常規的真菌培養存在一定的缺點，其診斷結果與所采集樣本的質量、數量、近期用藥情況等相關，且此種診斷方式耗時長[8]。與真菌培養相比，KOH鏡檢具有簡便、快速、經濟，不需要特殊儀器即可診斷[9-10]。在本文研究中分析皮膚淺表真菌感染患者KOH鏡檢結果，發現135例樣本中KOH鏡檢顯示105例陽性，陽性檢出率為77.78%，陽性檢出率較高，說明KOH鏡檢對皮膚淺表真菌感染的檢出率較高，且體癬樣本中的真菌感染檢出率最高。

臨床研究顯示，真菌感染和定植與患者治療療效明顯相關，真菌感染和定植不同，真菌定植可以是真菌和宿主之間建立長期持續的共生關系或者是無害關系的最后一步，其可轉化為真菌感染，共生或致病取決于宿主和微生物的特征，但均依賴于真菌首先成功定植在宿主組織表面[11-13]。臨床上隨著對真菌感染和定植的逐漸深入研究發現，在感染和定植過程中機體較易出現全身性或者局部的免疫反應，打破了機體正常的細胞免疫平衡狀態，導致細胞免疫失衡，表現為細胞免疫相關指標表達升高或者降低。目前多采用T淋巴細胞亞群評估機體免疫狀態[14-15]。T淋巴細胞亞群主要包括CD3+、CD4+、CD8+，其中CD3+存在于全部成熟T細胞表面，CD3+、CD4+具有免疫功能，CD8+具有抑制細胞免疫功能，CD4+/CD8+可進一步反映出機體整體的免疫狀態，CD4+、CD8+之間在功能上相互制約、相互誘導，經相互作用在機體中形成特異性的T淋巴細胞網絡系統，發揮其維持和調節機體免疫反應的作用[16-18]。基于上述研究基礎，在本文研究中分析細胞免疫相關指標對真菌感染和定植的鑒別價值，結果發現，真菌感染與定植不同，相比真菌定植，真菌感染發生后對患者機體免疫功能產生的損傷更為嚴重，表現為細胞免疫相關指標CD3+、CD4+、CD4+/CD8+降低，CD8+升高。

另外本文采用ROC曲線進一步分析細胞免疫相關指標對皮膚淺部真菌感染和定植的鑒別價值，相比各指標的單項鑒別，其聯合鑒別價值更為理想，可根據T淋巴細胞亞群數量鑒別皮膚淺表真菌感染或是定植，以制定針對性的干預措施，以促進患者恢復。

綜上所述，KOH鏡檢可明顯檢出皮膚淺部真菌，且細胞免疫相關指標CD3+、CD4+、CD4+/CD8+在真菌感染中降低，CD8+在真菌感染中升高，可用于真菌感染和定植的鑒別。