溫陽(yáng)化痰貼對(duì)小兒哮喘TH1、TH2細(xì)胞因子免疫調(diào)節(jié)的臨床研究

董艷，李靜，辛德莉，徐榮謙，潘鴻，盛夢(mèng)娟，付玉林，楊潔

1.北京市昌平區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院兒科，北京 102208；2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院熱帶病研究所，北京 100050；3．北京東直門醫(yī)院兒科，北京 101121；4．北京市海淀區(qū)中醫(yī)醫(yī)院兒科，北京 100086

支氣管哮喘是一種以氣道高反應(yīng)性和慢性炎癥性氣道阻塞為特征的變態(tài)反應(yīng)性疾病[1]。研究顯示[2]，Th1/Th2細(xì)胞免疫可參與支氣管哮喘發(fā)病，其可參與支氣管哮喘患者多種炎癥介質(zhì)的調(diào)控。該研究選取2016年1月—2018年6月期間在該院治療的123例支氣管哮喘穩(wěn)定期患兒，對(duì)其血清Th1/Th2細(xì)胞免疫平衡的變化進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院門診接收和住院治療的小兒哮喘緩解期的患兒123例，隨機(jī)分為治療組63例與對(duì)照組60例。治療組男30例，女33例；年齡4～12歲，平均年齡（6.0±1.2）歲。對(duì)照組男31例，女29例；年齡4～12歲,平均年齡（6.2±0.8）歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。患兒及家屬知情同意下進(jìn)行，且試驗(yàn)通過(guò)該院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：均處于緩解期的4～14歲哮喘患兒；癥狀積分≥12分。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①不符合哮喘緩解期診斷標(biāo)準(zhǔn)；②敷貼穴位局部皮膚有破損者；③在治療過(guò)程中，出現(xiàn)發(fā)熱、哮喘急性發(fā)作或肺炎及多種感染性疾病急性發(fā)作期；④不能堅(jiān)持或不能配合治療。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

①西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)2008年制定兒童哮喘防治指南[3]。中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：小兒哮喘緩解期診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒藥管理局1994年頒發(fā)的《中醫(yī)病癥診斷療效標(biāo)準(zhǔn)·中醫(yī)兒科病癥診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》的哮喘診斷依據(jù)及緩解期的分類標(biāo)準(zhǔn)[4]。

1.3 方法

1.3.1 治療方法 對(duì)照組給予哮喘常規(guī)治療 吸入舒利迭(沙美特羅50μg和100μg丙酸氟替卡松)（注冊(cè)證號(hào)：H20150323）,口服孟魯斯特鈉4 mg或5 mg（注冊(cè)證號(hào)：H20160440，批準(zhǔn)文號(hào)：H20160441），治療組在此基礎(chǔ)上2016年和2017年夏季初伏、中伏、潤(rùn)中伏及末伏，連續(xù)2年進(jìn)行溫陽(yáng)化痰貼（京藥制字z20110007）穴位敷貼治療，每伏貼3 d。

1.3.2 藥物制備 溫陽(yáng)化痰貼（北京中醫(yī)醫(yī)院配制）：炒介子、細(xì)辛、百部、白芷、醋五味子、冰片。藥膏0.5 g/帖。選穴根據(jù)經(jīng)絡(luò)辨證原則：分別選取肺俞穴、大椎穴、膻中穴、膏盲穴帖敷。用75%酒精消毒穴位處皮膚，待晾干后將敷貼固定在穴位上，根據(jù)患兒年齡，4～6歲留置2～3 h，6～14歲留置4～6 h。從2016年“三伏”起對(duì)符合標(biāo)準(zhǔn)的60例患者連續(xù)2年進(jìn)行“三伏”貼敷。每伏貼3 d。貼敷當(dāng)天不宜用涼水洗澡，禁食生冷、油膩、辛辣食品。

1.3.3 操作方法 患兒入組后采集清晨空腹靜脈血6 mL，其中3 mL用于檢測(cè)Th1、Th2表達(dá)情況，3 mL采用低溫離心機(jī)4℃下2 500 r/min離心10 min，分離血清后分為2份，編號(hào)保存于深低溫冰箱，ELISA法檢測(cè)血清Th1細(xì)胞因子：干擾素-γ（IFN-γ），Th2細(xì)胞因子：白介素-4（IL-4）水平，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.4 觀察指標(biāo)

抽取兩組患兒治療前后的靜脈血，比較兩組患兒治療前后Th1/Th2型細(xì)胞因子和CD3+、CD4+、CD8+及CD4/CD8。Th1細(xì)胞因子，干擾素-γ（IFN-γ），Th2細(xì)胞因子，白介素-4（IL-4）的表達(dá)情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患治療前后Th1/Th2型細(xì)胞因子變化水平比較

治療前兩組患兒IFN-γ和IL-4比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，同組患兒IFN-γ高于治療前，IL-4低于治療前，Th1/Th2型細(xì)胞因子均明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組患兒治療后比較，治療組患兒改善明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 兩組患兒治療前后各項(xiàng)免疫指標(biāo)比較

治療前兩組患兒CD3+、CD4+、CD8+及CD4/CD8比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后同組患兒CD3+、CD4+高于治療前，CD8+低于治療前，CD4/CD8免疫水平明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組患兒治療后比較，治療組免疫指標(biāo)改善明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表1 兩組患兒治療前后Th1/Th2細(xì)胞因子變化水平的比較（±s）Table 1 Comparison of Th1/Th2 cytokine levels of children before and after treatment in the two groups（±s）

表1 兩組患兒治療前后Th1/Th2細(xì)胞因子變化水平的比較（±s）Table 1 Comparison of Th1/Th2 cytokine levels of children before and after treatment in the two groups（±s）

注：治療前兩組比較，P＞0.05；同組治療前后比較，P＜0.05；兩組治療后比較，P＜0.05

組別 Th1細(xì)胞因子IFN-γ（ng/L）Th2細(xì)胞因子IL-4（ng/L） Th1/Th2對(duì)照組（n=60）治療前治療后治療組（n=63）治療前治療后t值25.51±6.65 35.53±4.67 65.76±5.76 51.54±6.76 0.38±4.43 0.68±4.87 23.72±5.43 48.79±7.98 1.930 60.87±4.98 38.45±3.56 3.210 0.38±4.88 1.26±5.76 2.150

表2 兩組患兒治療前后各項(xiàng)免疫指標(biāo)的比較（±s）Table 2 Comparison of various immune indexes of children between the two groups before and after treatment（±s）

表2 兩組患兒治療前后各項(xiàng)免疫指標(biāo)的比較（±s）Table 2 Comparison of various immune indexes of children between the two groups before and after treatment（±s）

注：治療前兩組比較，P＞0.05；同組治療前后比較，P＜0.05；兩組治療后比較，P＜0.05

組別 CD3+（%） CD4+（%） CD8+（%） CD4/CD8對(duì)照組（n=60）治療前治療后治療組（n=63）治療前治療后t值54.87±5.65 66.45±6.45 32.65±3.54 39.76±4.65 38.53±4.45 30.56±5.54 0.84±2.65 1.30±1.75 58.67±6.65 75.78±5.87 3.540 35.65±4.54 48.87±5.65 2.430 36.87±4.87 25.45±3.56 3.030 0.96±2.21 1.92±1.23 1.860

3 討論

通過(guò)該課題的研究證實(shí)，治療組的細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、Th1/Th2、免疫指標(biāo)CD3+、CD4+、CD8+及CD4/CD8明顯改善且優(yōu)于對(duì)照組(P＜0.05)。證明溫陽(yáng)化痰貼敷對(duì)處于緩解期哮喘患者的IL-4和IFN-γ水平具有調(diào)節(jié)效果，考慮主要是通過(guò)對(duì)TH細(xì)胞的分化進(jìn)行調(diào)節(jié)，也就是對(duì)TH細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化進(jìn)行調(diào)節(jié)，對(duì)向Th2分化進(jìn)行抑制，達(dá)到對(duì)IL-4、IFN-γ的水平進(jìn)行影響的目的。使Th1/Th2的平衡得到調(diào)節(jié)，從而使血清體液免疫水平得到調(diào)節(jié)和上升，使抵抗力得到加強(qiáng)，降低哮喘發(fā)作次數(shù)，同時(shí)也使哮喘發(fā)作的程度降低，對(duì)哮喘的發(fā)生進(jìn)行控制。

在支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制中，免疫失衡和炎癥介質(zhì)的過(guò)度表達(dá)起著重要作用。相關(guān)研究表明[5]，腫瘤壞死因子，白細(xì)胞介素，干擾等都參與了兒童支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制。細(xì)胞免疫失衡與炎癥介質(zhì)的過(guò)度釋放密切相關(guān)。 T淋巴細(xì)胞亞群中Th1和Th2的表達(dá)可以在疾病過(guò)程中釋放機(jī)體的免疫能力和炎癥介質(zhì)的釋放，這與支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[6]。 Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、IFN-γ等，參與遲發(fā)型超敏反應(yīng)炎癥和細(xì)胞免疫的發(fā)展。

Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-10、IL-13等，與體液免疫有關(guān)[7]。在支氣管哮喘患兒中，IL-4和IL-10的表達(dá)上調(diào)，而IFN-γ的表達(dá)下降。 Th1細(xì)胞在激活和拮抗后可釋放IFN-γ，并拮抗免疫球蛋白如IgE引起的過(guò)敏反應(yīng)。釋放炎性細(xì)胞因子，如IL-4和IL-10，引發(fā)IgE介導(dǎo)的免疫反應(yīng)并形成一系列炎癥反應(yīng)[8-9]。因此機(jī)體的免疫狀態(tài)與T淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+及CD4/CD8等）呈相關(guān)性，對(duì)T細(xì)胞亞群的鑒別有重要意義。

該課題應(yīng)用溫陽(yáng)化痰貼（炒介子、細(xì)辛、百部、白芷、醋五味子、冰片）治療小兒哮喘，在三伏天開(kāi)始，有利于通經(jīng)、逐痰、扶正祛邪。貼敷治療方法能夠調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，促使丘腦-垂體-腎上腺軸的內(nèi)分泌功能改善，使機(jī)體的抗病能力得到提高。臨床結(jié)果證實(shí)，治療組細(xì)胞因子變化及免疫指標(biāo)改善情況均優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），治療后的IFN-γ是（48.79±7.98）ng/L，IL-4是（38.45±3.56）ng/L與肖小芹等[10]研究顯示，咳喘穴位敷貼對(duì)哮喘大鼠Th1/Th2免疫平衡也有改善作用，治療后的IFN-γ是（51.11±4.21）ng/L，而IL-4是（32.21±6.21）ng/L的結(jié)果相似。

綜上所述，應(yīng)用溫陽(yáng)化痰貼外治法對(duì)支氣管哮喘Th1/Th2免疫調(diào)節(jié)有明顯優(yōu)勢(shì)。