頂空固相微萃取氣質(zhì)聯(lián)用法分析羊耳菊花的揮發(fā)性成分

許培增，劉明娟，羅貞貴，曾雅靜，蔡 偉，2，3

（1.湖南醫(yī)藥學(xué)院，湖南 懷化 418000；2.湖南醫(yī)藥學(xué)院新型抗體藥物及其智能運輸系統(tǒng)湖南省重點實驗室，湖南 懷化 418000；3.湖南醫(yī)藥學(xué)院侗醫(yī)藥研究湖南省重點實驗室，湖南 懷化 418000）

羊耳菊（Inula cappa）屬菊科羊耳菊屬植物，廣泛分布于湖南、廣西、貴州、廣東、印度、越南和泰國［1］，是一種重要的民族藥，民間以其全草或根入藥，其味辛，微苦，性平，具有祛痰定喘、活血調(diào)經(jīng)及治跌打損傷等作用，可用于治療感冒發(fā)熱［2］、咽喉腫痛［3］、風(fēng)濕腫痛［4］、瘧疾、痢疾和肝炎［5］。羊耳菊的主要化學(xué)成分有三萜類、甾體類、黃酮類和倍半萜內(nèi)酯類化合物［6-9］。目前，關(guān)于羊耳菊根和地上部分的揮發(fā)性成分研究報道較少［10，11］，未見國內(nèi)外文獻(xiàn)中有利用頂空固相微萃取法結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對羊耳菊花的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析的報道。因此，本研究首次采用了頂空固相微萃取氣質(zhì)聯(lián)用法對羊耳菊花中的揮發(fā)性成分進(jìn)行鑒定，為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究和質(zhì)量控制研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

羊耳菊于2018年10月采摘自湖南省懷化市，由湖南醫(yī)藥學(xué)院蔡偉副教授鑒定為羊耳菊。

1.2 儀器

75μm CAR-PDMS微萃取纖維頭（美國SUPELCO公司），容積為4 mL的頂空瓶，毛細(xì)管柱（5%苯基二甲基聚硅氧烷，30 m×0.25 mm，0.25μm，Thermo Scientific，USA），Thermo ISQLT低溫質(zhì)譜儀（Thermo Scientific，Bremen，Germany），Thermo trace 1300氣相色譜（Thermo Scientific，Bremen，Germany），質(zhì)譜檢索數(shù)據(jù)庫NIST 17。

1.3 方法

1.3.1 揮發(fā)性成分的提取 揮發(fā)性成分通過SUPELCO公司（美國）提供的配4 mL頂空瓶和75μm CAR∕PDMS纖維的手動固相微萃取（SPME）支架提取。

1.3.2 固相微萃取條件 固體微萃取手柄首次使用前，萃取頭插入至進(jìn)樣口中，在65℃預(yù)活化5 min后方可使用。然后，將羊耳菊花粉末（約20 mg）放入裝有SPME纖維的小瓶中，在65℃下將纖維暴露在密封小瓶的上部空間30 min以吸收揮發(fā)物。最后，取出SPME纖維并直接注入氣相色譜-質(zhì)譜入口，用于解吸揮發(fā)性成分5 min。

1.3.3 GC-MS分析

1）色譜條件。采用TG-5MS毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25μm）。升溫程序：50℃保持3 min，以2℃∕min升至100℃，保持5 min，然后以2℃∕min升至160℃，保持3 min，最后以10℃∕min升至280℃，保持5 min；載氣為（純度為99.999%）He氣，柱流量1 mL∕min，分流模式下前進(jìn)樣口溫度為300℃，分流比50∶1。

2）質(zhì)譜條件。離子源：EI源；離子化能量：70 eV；離子源溫度280℃；全掃描范圍40～620m∕z；無溶劑延遲。

2 結(jié)果與分析

通過保留指數(shù)（RI，在相同的試驗條件下計算C7-C30正構(gòu)烷烴的保留時間）和MS庫檢索（NIST 17）對化合物進(jìn)行了鑒定。羊耳菊花的揮發(fā)性成分及其含量見表1，總離子流如圖1所示。

圖1 高分辨提取總離子流

表1 羊耳菊的揮發(fā)性成分

由表1可知，共檢測鑒定出50種化合物，占揮發(fā)性成分的86.74%。主要成分為百里酚（19.70%）、（-）-β-石竹烯（12.19%）、香芹酚（8.13%）和異丁酸百里香酯（8.13%）。百里酚又名麝香草酚，是一種單萜酚類植物源化合物，因其抗菌、抗氧化、抗炎、低毒性、安全性高等特點在食品防腐保鮮中廣泛應(yīng)用［12，13］。（-）-β-石竹烯有抗炎、鎮(zhèn)痛、神經(jīng)保護(hù)、抗腫瘤、防治肝損傷等生物活性，具有抗腫瘤、抗糖尿病、保護(hù)肝、防治骨質(zhì)疏松、調(diào)節(jié)血脂等作用，還可以治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎［14，15］；香芹酚具有良好的抗氧化、抗炎、抑菌等生物活性［16］。所以推測羊耳菊花中起抗炎作用的主要成分可能是百里酚、（-）-β-石竹烯和香芹酚，起鎮(zhèn)痛作用的主要成分可能是（-）-β-石竹烯。

3 結(jié)論

羊耳菊的全草或根可供藥用，有除痰定喘、活血調(diào)經(jīng)及治跌打損傷等作用。對羊耳菊花的化學(xué)成分研究表明，其主要成分為三萜類、甾體類、黃酮類和倍半萜內(nèi)酯類化合物。根據(jù)頂空固相微萃取氣質(zhì)聯(lián)用法共鑒定出羊耳菊花50種化合物，該方法能快速獲得其組成成分，有利于提取易揮發(fā)性化合物，可用于羊耳菊的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和質(zhì)量控制研究。