藤本月季腋芽離體培養技術研究

張麗華，姜繼發，房春暉

(吉林省鎮賚縣園林管理中心，鎮賚 137300)

藤本月季(Mordencvs.ofChlimbersandRamblers)屬薔薇科薔薇屬，由于其干莖柔軟細長呈藤木狀或蔓狀，又稱爬藤月季、爬蔓月季等。藤本月季為落葉植物，莖上有鉤刺，單數羽狀復葉，花單生、聚生或簇生，花色繁多，常見的有朱紅、大紅、鮮紅、粉紅、金黃、橙黃、復色、潔白、鑲邊色、原色等，花型各異、豐富多彩且多數種類花朵碩大，因此觀賞性特別高，另花期較長，可三季開花，開花時節香氣四溢，園林應用效果極佳[1-2]。園林應用中主要以觀賞花朵為主，進行人工搭架或綁扎造型，或依靠莖上鉤刺讓其攀緣它物自然生長，花開季節美麗壯觀，深得人們喜愛[3]。藤本月季為陽性樹種，適合在肥沃、疏松、排水良好濕潤土壤中生長，但土壤過濕則易爛根，盛夏需適當遮蔭，一般品種可耐-15 ℃低溫[4]。由于藤本月季扦插難以成活，當前苗圃中常用嫁接無性繁殖方法進行繁殖，但嫁接技術要求較高，管理繁雜，導致嫁接成活率并不理想。隨著器官離體培養技術不斷發展與成熟，本研究采用藤本月季的腋芽作為外植體，針對其離體培養過程的初代階段及繼代階段進行重點試驗，尤其是兩個階段培養基配方的優化，以尋求藤本月季快速高效的繁殖方案[5]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料：采用的藤本月季品種為“安吉拉”，由鎮賚縣園林管理中心2017年淘寶購買小苗，栽植于大棚中培育，該品種單瓣、多頭，花色粉紅。接種前到該品種植株上采集帶腋芽的莖段若干帶回組培室，以腋芽作為外植體。

供試儀器：電冰箱(浙江華恒儀器公司)、高壓滅菌鍋(河南科興儀器設備有限公司)、超凈工作臺(蘇潔精華設備公司)、攪拌儀(長春常衡電子衡器有限公司)、干燥箱(蘇州長樂玻璃儀器公司)、電子天平(海南蘇樂儀器公司)、恒溫培養箱(美格電器有限公司)等。

供試試劑：MS基本培養基所需藥品，生長調節劑6-BA、NAA、IAA、IBA、KT、GA3，84消毒液、升汞、酒精等消毒液，均由鎮賚縣園林管理中心提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 基本培養基及添加成分 以MS為基本培養基，添加不同量的植物激素6-BA、NAA、IAA、IBA、KT，添加瓊脂粉6 g/L，白砂糖30 g/L，培養基pH值調至5.8。

初代培養采用4種培養基配比，分別為A1：MS+6-BA 1.0 mg/L；A2：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L；A3：MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L；A4：MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L[6]。

繼代培養采用4種培養基配比，分別為B1：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L；B2：MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L；B3：MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L；B4：MS+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L[7]。

1.2.2 接種方法 將采集帶腋芽莖段用加入少量洗衣粉的清水清洗，再用清水沖洗。然后用解剖刀切割成2～3 cm段，先在流水下不斷沖洗30 min，再用無菌水沖洗，瀝干水后，將試材放到超凈工作臺上。先使用75%濃度的酒精浸泡10～30 s，然后用0.1%的升汞浸泡1 min，取出后立即用蒸餾水沖洗3～5次。瀝干水后放入鋪墊無菌濾紙的培養皿中。點燃酒精燈進行接種，接種時將腋芽從莖段上切離，剪取腋芽的大小為0.5 cm，保持生長點，每種培養基配比接種20瓶，每瓶接種3個腋芽[8]。

1.2.3 培養過程 將接種好的培養基瓶放入恒溫箱中培養，定期觀察培養情況，外植體會逐漸生長出愈傷組織直至達到致密結構時萌發形成芽，統計形成芽的時間及數目。當芽長至3～4 cm時，挑選生長健壯且完好的芽在超凈工作臺下切割成1～2 cm段，轉接到4種不同配比的繼代培養配方中，每種培養基配比接20瓶，每瓶接3個小段。培養過程中恒溫箱溫度控制在18～24 ℃，光照強度為2 000 Lx，光照時間為12 h/d，培養環境的濕度保持在80%～85%[9-10]。

2 結果與分析

2.1 初代培養情況

將切割好的腋芽接種到4種不同配比的初代培養基上進行誘導培養，統計的不定芽分化率見圖1，形成不定芽分化情況見表1。由圖1可知，在4個初代培養基配比中均能萌發不定芽，且不定芽分化率均高于50%，但4種培養基配比外植體生長狀況有所不同，存在差異，其中A2培養基不定芽分化率最高，達到83%，其次是A3培養基，不定芽分化率達到74%。說明在初代培養過程中，以MS+6-BA 1.0 mg/L為基礎，添加一定含量的NAA或IBA可以明顯促進不定芽分化，添加NAA的分化效果最好。由表1可知，A2、A3培養基最早形成不定芽，A2培養基平均不定芽形成數最多。綜合圖1和表1可以得出，A2培養基配方表現最優，不定芽分化率高，形成不定芽用時短且分化的芽數多；A3培養基次之，但也有較好的誘導效果。因此，在4種初代培養基配方中，A2培養基(MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L)最適合藤本月季的初代培養。

表1 4種初代培養基上不定芽分化比較

2.2 繼代培養情況

切割好的不定芽轉接到4種不同配比的繼代培養基配方中進行繼代培養，第4周長出芽叢，統計各瓶平均苗高、增殖倍數、玻璃化苗數，結果見表2。由表2可知，B1培養基的增殖倍數最大，其次是B3、B2、B4培養基；就苗高而言，B1培養基的平均苗高最高。由此可知，同等濃度的6-BA和KT相比，6-BA更適合繼代增殖培養。而同等培養條件下，高濃度的6-BA和KT比低濃度更能促進增殖。因此，僅就增殖倍數而言，藤本月季腋芽增殖最適培養基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L。

表2 4種繼代培養基上的增殖情況

但是，通過繼代培養，在較高濃度的6-BA和KT中培養藤本月季腋芽會出現玻璃化現象。李海燕等[11]研究表明，在培養基中添加適量的IAA或GA3可以減少玻璃化現象的產生。但究竟最適的GA3濃度尚未有定論。因此，為了優化已知的繼代培養基，減少玻璃化現象，并探求GA3濃度對緩解玻璃化現象的影響趨勢。再一次進行增殖培養，選取第一次繼代培養中效果較好的B1和B3培養基，向B1和B3培養基中分別添加不同濃度的GA3，4周后統計不同濃度的GA3對玻璃化現象的抑制作用，結果見表3。

表3 GA3添加量對增殖苗玻璃化的影響

由表3可知，在培養基中添加適量的GA3可以顯著緩解較高濃度6-BA和KT培養基中的玻璃化現象，但不同濃度的GA3效果不同，隨著GA3濃度的升高，玻璃化苗所占比例有所降低，但當GA3濃度達到0.5 mg/L以后，玻璃化的比例有所上升。分別添加了同等濃度6-BA和KT的培養基中，添加KT的培養基中外植體出現玻璃化的比例小，但增殖倍數較小；而加入6-BA會使玻璃化的比例高，但增殖倍數大。在培養基中添加一定濃度的GA3會顯著減緩玻璃化現象，但當濃度大于0.5 mg/L時，玻璃苗的比例又會上升。并且，在KT中添加GA3的效果更好。因此，綜合上述結論，藤本月季腋芽離體誘導的最適增殖培養基為MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+GA30.5 mg/L。

3 討論與結論

通過對腋芽的離體培養，可以得出在初代培養階段的4種不同配比培養基中，添加IAA、NAA、IBA均對外植體分化有一定的促進作用，其中NAA分化效果最好，且形成不定芽的時間最短并且芽數最多，所以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L的配方為最優初代培養基配比；而通過比較4種不同配比的繼代培養基對增殖的影響，可以得出較高濃度的KT和6-BA增殖效果較好，但6-BA的增殖效果好，可玻璃化程度較大，KT出現玻璃化現象少，卻增殖倍數較小。由于GA3的添加可以有效抑制玻璃化現象，通過比較，得出配方MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+GA30.5 mg/L為最佳增殖培養基配方。本研究只選取部分生長激素探求其對藤本月季腋芽初代培養及繼代培養階段的影響，沒有探討生根階段的最適培養基，通過本研究的結論可為藤本月季快速繁殖體系的建立提供參考依據。