基于網絡藥理學探討紅萸飲治療潰瘍性結腸炎的分子機制

張馨心 周唯 陸金根 王佳 潘一濱 許言午

摘要 目的：采用網絡藥理學的方法，對紅萸飲（HYY）治療潰瘍性結腸炎（UC）的作用機制進行探討。方法：通過TCMSP平臺和Uniprot數據庫對HYY進行活性成分及作用靶點篩選和標準化;在Genecards和在線人類孟德爾遺傳數據庫中獲取疾病靶點。采用Draw Venny Diagram程序生成藥物活性成分-疾病靶點數據集及韋恩圖;String網站生成蛋白-蛋白互作網絡圖;Cytoscape 3.7.2軟件構建成分-靶點網絡;利用R3.6.0軟件進行GO功能注釋和KEGG通路富集分析。實驗通過DSS建立C57 UC小鼠模型，利用HE染色、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、qPCR檢測來進一步驗證。結果：共篩選出HYY 4味藥所含50種類藥成分;預測出110個潛在靶點;其中UC相關靶點共計3 870個;HYY-疾病共同靶點70個，主要富集于88個生物過程和113條信號通路上。實驗也表明HYY可改善UC模型結直腸上皮完整性，降低血清IL-6和結直腸VEGF基因表達。結論：結合實驗分析HYY可能通過調節CASP3、IL-6、VEGFA等靶點，調控PI3K-Akt等信號通路，從而調控細胞凋亡、血管生成，抑制炎性反應來達到對UC的治療作用。

關鍵詞 紅萸飲;網絡藥理學;潰瘍性結腸炎;炎性反應;凋亡;血管生成

Mechanism of Hongyu Drink in the Treatment ofUlcerative Colitis Based on Network Pharmacology

ZHANG Xinxin1，ZHOU Wei1，LU Jin′gen1，WANG Jiawen1，PAN Yibin1，XU Yanwu2

（1 Longhua Hospital of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200032，China; 2 College of Basic Medicine of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200032，China）

Abstract Objective：To explore the mechanism of the action of Hongyu Drink （HYD） in the treatment on ulcerative colitis （UC） by network pharmacology.Methods：The active ingredients and targets of HHD were screened by TCMSP platform，and the targets′ name of the selected targets were standardized by Uniprot database.The search was performed in Genecards database and online human Mendelian genetic database to obtain disease target points.The Draw Venny Diagram online program was used to generate the pharmaceutically active ingredient-disease target data set and the Venn diagram.Protein-protein interaction network map was generated by using String website; component-target network was constructed by using Cytoscape 3.7.2 software; GO function annotation and KEGG pathway enrichment analysis were performed by R3.6.0 software.The C57 UC mouse model was established by DSS，and HE staining、ELIS、qPCR were used to verify the results of network pharmacology detection.Results：A total of 50 kinds of drug components were included in the 4 herbs of HHY; 110 potential targets were predicted; the total number of UC-related disease targets was 3870; a total of 70 common targets of Pulsatilla chinensis-disease were obtained，and the co-targets were mainly enriched in 88 biological processes and 113 signaling pathways.The experimental results showed that HYDin can improve the colorectal epithelial integrity of UC animal model and reduce the expression of VEGF mRNA in serum IL-6 and colorectal tissues.Conclusion：Combined with experiment，network pharmacology analysis shows that HYDin may regulate the CASP3，IL-6，VEGFA，et al，and PI3K-Akt signaling pathway，et al，which regulates apoptosis，angiogenesis and inhibition of inflammation，achieves a therapeutic effect on ulcerative colitis.Other pathways need our further study.

Keywords Hongyu Decoction; Network pharmacology; Ulcerative colitis; Inflammation; Apoptosis; Angiogenesis

中圖分類號：R285;R284文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.01.009

潰瘍性結腸炎（Ulcerative Colitis，UC）是一種病因尚不十分清楚的結腸和直腸慢性非特異性炎癥性疾病。病變部位多位于乙狀結腸和直腸，也可延伸至降結腸，甚至整個結腸。UC病程漫長，常反復發作，嚴重影響患者的生命質量。2015年世界胃腸組織（World Gastroenterology Organization，WGO）發布的《炎癥性腸病全球指南》顯示UC在北歐、英國和北美的高患病率已趨于保持穩定，而在南歐、亞洲和大多數發展中國家，原本較低的患病率正在升高[1]。有研究推測，國內UC的患病率為11.6/10萬[2]，且近年呈明顯上升趨勢[3-4]。

中醫學無UC的病名，主要根據疾病各時期不同的臨床表現來命名和治療。紅萸飲是龍華醫院肛腸科陸金根教授臨床治療UC的常用有效方劑，具有急攻緩補，內外兼施，益氣溫陽、清熱排毒的功效，但其具體的作用機制仍不十分清楚。本研究擬采用網絡藥理學方法，深入探討紅萸飲治療UC的分子機制。

1 資料與方法

1.1 資料來源

1.1.1 紅萸飲活性成分及其作用靶點的篩選

通過中藥系統藥理學數據庫與分析平臺（TCMSP）檢索紅萸飲中大血藤、敗醬草、黃芪、山茱萸4味中藥的化學成分，并根據化合物類藥性（Drug-Likeness，DL）大于0.18，口服生物利用度（Oral Bioavailability，OB）大于30%篩選藥物的活性成分及靶點。通過Uniprot數據庫，將已篩選出的靶點名稱進行標準化，建立藥物活性成分靶點數據集。

1.1.2 UC疾病相關基因的檢索

以“Ulcerative colitis”作為關鍵詞，在Genecards（https：//www.genecards.org/）和在線人類孟德爾遺傳數據庫（Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM）（https：//omim.org/）中檢索獲取UC相關的疾病靶點，建立疾病靶點數據集。

1.2 方法

1.2.1 紅萸飲活性成分抗UC疾病蛋白靶點的篩選和可視化網絡的構建

1.2.1.1 紅萸飲活性成分抗UC疾病作用靶點的篩選

采用Draw Venny Diagram在線程序（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）將藥物活性成分靶點數據集和疾病靶點數據集相交獲得藥物活性成分與疾病的共同靶點，此交集集合為藥物活性成分治療UC的可能潛在靶點，生成藥物活性成分抗疾病作用靶點數據集。

1.2.1.2 紅萸飲活性成分抗UC疾病作用靶點的可視化網絡構建

將篩選出的藥物活性成分抗疾病作用靶點數據集、藥物活性成分列表等輸入到Cytoscape 3.7.2軟件中，構建紅萸飲活性成分抗UC疾病靶點的可視化網絡。

1.2.2 構建紅萸飲活性成分抗UC疾病作用靶點的蛋白質-蛋白質相互作用網絡及網絡核心基因統計

1.2.2.1 蛋白質-蛋白質相互作用（Protein-Protein Interaction，PPI）網絡的構建

將藥物活性成分抗疾病作用靶點數據集提交至String網站（https：//string-db.org/）按minimum required interaction score為medium confidence（0.400）生成PPI網絡圖。

1.2.2.2 網絡核心基因的統計分析

根據網絡節點間的連接度尋找網絡的核心基因，進行統計分析，生成網絡關鍵基因連接度統計條圖。

1.2.3 紅萸飲活性成分抗UC疾病作用靶點的功能和通路富集性分析

1.2.3.1 紅萸飲活性成分抗UC疾病作用靶點的功能（Gene Ontology，GO）富集分析

利用R3.6.0軟件，安裝Bioconductor的colorspace、stringi、DOSE、clusterProfiler、pathview、ggplot2等程集包，以p value Cutoff=0.05，q value Cutoff=0.05為標準，對活性成分抗疾病作用靶點數據進行GO富集分析。

1.2.3.2 紅萸飲活性成分抗UC疾病作用靶點的通路（Pathway）富集分析

利用R3.6.0軟件，安裝Bioconductor的colorspace、stringi、DOSE、clusterProfiler、pathview等程集包，以p value Cutoff=0.05，q value Cutoff=0.05為標準，利用Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome（KEGG）數據庫對活性成分抗疾病作用靶點數據進行通路富集分析。

經上述GO和KEGG分析將成分、靶點及通路的關聯度更加數據化，以便得出更加明確的結果，進一步說明活性成分靶蛋白和信號通路在紅萸飲治療潰瘍性結腸炎中的作用。

2 結果

2.1 紅萸飲活性成分及其作用靶點

在TCMSP數據庫中的檢索、篩選表明，紅萸飲4味中藥中滿足OB>30%，DL>0.18的單體成分共有58種，對應499個相關靶點;去除不同單味藥間重疊活性單體成分計有50種，見表1，對應110個相關靶點，見圖1。

2.2 UC疾病相關蛋白靶點的獲取

通過Genecards和OMIM數據庫進行檢索，刪除檢索結果中重復的靶點，獲得UC相關的疾病靶點共計3 870個。

2.3 紅萸飲活性成分抗UC疾病作用蛋白靶點的篩選和可視化網絡的構建

2.3.1 紅萸飲活性成分抗UC疾病作用靶點的篩選

獲得藥物活性成分與疾病的共同靶點計70個，見圖1，生成活性成分抗疾病作用靶點數據集。此集合為藥物活性成分治療疾病的潛在靶點。

2.3.2 紅萸飲活性成分抗UC疾病靶點可視化網絡的構建

進一步利用Cytoscape建立藥物活性成分和活性成分抗疾病作用靶點數據集的相關聯系的可視化網絡圖，見圖2。

2.4 紅萸飲活性成分抗UC疾病靶點的蛋白-蛋白相互作用網絡

經STRING分析后得到PPI網絡，共獲得693條相互作用關系，平均節點連接數（Average Node Degree）為19.8，PPI enrichment p-value：<1.0e-16，見圖3;按節點連接度從大到小為標準篩選網絡關鍵基因統計，見圖4（只顯示前30條）。

2.5 紅萸飲活性成分抗UC作用蛋白靶點的GO和KEGG富集分析

2.5.1 紅萸飲活性成分抗UC作用靶點的功能富集分析

以p value Cutoff=0.05，q value Cutoff=0.05為標準，對活性成分-疾病靶點數據進行GO功能富集性分析，共獲得88個統計學顯著的結果。這些結果顯示與核受體活性（Nuclear Receptor Activity）、轉錄因子活性，配體直接調控序列特異性DNA結合（Transcription Factor Sctivity，Direct Ligand Regulated Sequence-specific DNA Binding）、蛋白質異二聚活性（Protein Heterodimerization Activity）、泛素樣蛋白連接酶結合（Ubiquitin-like Protein Ligase Binding）、類固醇激素受體活性（Steroid Hormone Receptor Activity）等功能相關，見圖5。

2.5.2 紅萸飲活性成分抗UC作用靶點的KEGG分析

以p value Cutoff=0.05，q value Cutoff=0.05為標準，對活性成分抗疾病靶點數據進行KEGG通路富集性分析，共獲得113個統計學顯著的結果。主要富集在PI3K-Akt信號通路、卡波西肉瘤相關皰疹病毒感染通路、人巨細胞病毒感染通路、乙肝病毒通路、前列腺癌通路、流體剪切應力與動脈粥樣硬化通路上，其中按P值由小到大排列前20條通路的氣泡見圖6。

3 實驗驗證

3.1 實驗材料

3.1.1 實驗動物

C57BL6小鼠（上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，許可號：SYXK（滬）2015-0020）70只，雌性，體質量18～20 g。造模前在復旦大學清潔級動物房飼養1周，給予充足食料，自由飲水，每日光照12 h，溫度21～25 ℃，空氣濕度40%～70%。

3.1.2 藥物與試劑

大血藤中藥配方顆粒（廣東一方制藥有限公司，批號：408124K）、敗醬草中藥配方顆粒（廣東一方制藥有限公司，批號：407071K）、黃芪中藥配方顆粒（廣東一方制藥有限公司，批號：407250K）、山萸肉中藥配方顆粒（廣東一方制藥有限公司，批號：405142K）依據《中藥藥理研究方法學》計算出中藥人鼠等效劑量比例為大血藤：敗醬草：黃芪：山萸肉=5∶10∶10∶4;Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS，M.W.36000-50000購于MP Biomedicals LLC，CAS#9011-18-1）;美沙拉秦緩釋顆粒劑（艾迪莎，上海愛的發制藥有限公司，批號：15237）;RayBioMouse IL-6 ELISA Kit（購于美國RayBiotech公司，批號：ELM-IL6）;TaKaRa SYBRòPremix Ex TaqTM試劑盒（貨號RR420A）。

3.1.3 儀器

Synergy2多功能酶標儀（BioTek公司，美國，型號：Synergy2）、Applied Biosystems 7300 Fast Real-Time PCR System（ABI公司，美國，型號：Stepone）。

3.2 實驗方法

3.2.1 實驗分組與給藥

配置2.5%DSS，小鼠自由飲用10 d。造模后隨機分為6組，每組10只。正常組（Norm）：消毒蒸餾水自由飲用10 d，第11天處死5只;消毒蒸餾水灌胃（10 mL/kg，2次/d）7 d，第18天處死5只。模型組（DSS）：2.5%DSS自由飲用10 d，第11天處死10只。空白對照組（DSS+NS）：2.5%DSS自由飲用10 d，消毒蒸餾水灌胃（10 mL/kg，2次/d）7 d，第18天處死10只。陽性藥物對照組（DSS+5ASA）：2.5%DSS自由飲用10 d，美沙拉秦灌胃（0.5 g/kg，2次/d）7 d，第18天處死10只。紅萸飲高劑量組（DSS+HH）：2.5%DSS自由飲用10 d，紅萸飲灌胃（3.0 g/kg，2次/d）7 d，第18天處死10只。紅萸飲低劑量組（DSS+HL）：2.5%DSS自由飲用10 d，紅萸飲灌胃（1.5 g/kg，2次/d）7 d，第18天處死10只。

3.2.2 HE染色檢測小鼠結直腸組織病理學改變

給藥7 d后處死所有小鼠，在小鼠直腸及結腸處各取1段長約1 cm的結腸組織，4%甲醛溶液固定，制備石蠟切片，行HE染色，10×10倍光鏡下觀察腸黏膜損傷情況，按參考文獻方法進行病理組織學評[5-7]，具體見表2。

3.2.3 ELISA檢測血清IL-6水平

給藥7 d后處死所有小鼠，摘眼球取血，取血清-80 ℃凍存，待測IL-6水平。測定時每份樣本取50 μL血清，2倍稀釋后取100 μL稀釋液，按照ELISA試劑盒說明書進行操作，酶標儀450 nm處檢測樣本吸光值，根據標準品不同濃度的吸光值繪制標準曲線，再通過樣本吸光值根據標準曲線算出相應的IL-6濃度。

3.2.4 qPCR檢測直腸組織VEGF水平

設計引物，見表3，采用Trizol法提取各組小鼠直腸組織RNA并行反轉錄。取反轉錄后的cDNA行q-PCR檢測基因表達。液氮保存組織常規提取RNA，紫外分光光度計法定量后取10 μg總RNA逆轉錄為cDNA。q-PCR條件：95 ℃，30 s;95 ℃，5 s;60 ℃，34 s;40個循環，10 μL體系上機分析。以VEGF產物量/β-actin產物量的比值為最終結果。

3.3 統計學分析

采用IBM SPSS Statistics 21統計軟件。計量資料采用均數±標準差（±s）進行描述，2組正態分布計量資料組間比較采用t檢驗，多組正態分布計量資料組間比較采用單因素方差分析，2組及多組偏態分布計量資料組間比較采用秩和檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

3.4 實驗結果

3.4.1 HE染色檢測小鼠結直腸組織病理學改變

在10×10光鏡下觀察，正常組小鼠結、直腸形態完整，無明顯異常;模型組小鼠結腸黏膜間或固有層上皮細胞脫落、炎性細胞浸潤、有潰瘍且面積較大;空白對照組部分有潰瘍，炎性細胞浸潤;各用藥組小鼠結腸黏膜炎癥明顯改善，黏膜較完整，部分有潰瘍且面積較小，輕微炎性細胞浸潤，見圖8、10。分析病理組織學評分，見表4、5，與正常組比較，空白對照組和模型組結、直腸組織病理學評分顯著提升（P<0.01）;與模型組比較，紅萸飲高劑量組和低劑量組結、直腸組織病理學評分顯著降低（P<0.01）;與空白對照組比較，陽性藥物對照組結、直腸組織病理學評分降低（P<0.05）;紅萸飲高劑量組、紅萸飲低劑量組與陽性藥物對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。見圖7、9。

3.4.2 ELISA檢測血清IL-6水平

與正常組比較，模型組及空白對照組血清中IL-6表達明顯升高（P<0.01）;與模型組和空白對照組比較，紅萸飲高劑量組、紅萸飲低劑量組和陽性藥物對照組IL-6表達均明顯下降（P<0.01）;紅萸飲高劑量組、紅萸飲低劑量組與陽性藥物對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05），見表6、圖11。

3.4.3 qPCR檢測直腸組織VEGF水平

與正常組比較，模型組及空白對照組結腸組織中VEGF表達明顯降低（P<0.01）;與模型組和空白對照組比較，紅萸飲高劑量組、紅萸飲低劑量組和陽性藥物對照組VEGF表達均上升（P<0.05）;紅萸飲高劑量組、紅萸飲低劑量組與陽性藥物對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05），見表7、圖12。

3.4.4 結論

中藥紅萸飲對DSS誘導的UC小鼠結直腸上皮完整性及IL-6和VEGF指標有明顯調節作用。與對照組比較，模型組結直腸病理分數明顯降低，血清IL-6含量明顯升高，VEGF mRNA表達上調。中藥紅萸飲能夠降低DSS誘導的UC小鼠結直腸病理分數，血清IL-6含量，抑制VEGF mRNA的表達。這從一定程度上證實了我們在中藥-成分-靶點-信號通路網絡中連接度最高的網絡藥理學檢測。

4 討論

網絡藥理學是整合了系統生物學、藥物化學、藥理學和生物化學的一門新興學科[8]。其借助已研究出的大量生物學信息，構建藥物分子-作用靶點-疾病的生物網絡，分析三者之間可能的關聯，從而給出了藥物對疾病作用機制的線索，為多靶點藥物的開發和機制研究提供了依據[9-10]。中藥作用機制的研究具有有效成分過于復雜、作用機制不夠明確等特點，而網絡藥理學恰好可以為此類研究提供有力的工具。對復方中藥的網絡藥理學研究業已成為研究中藥分子機制的新策略和新模式。順應了中醫藥現代化的潮流，適應了推動中藥復方深入研究和擴大臨床適應證發展的需要，有力保障了中醫藥的世界發展[11]。

龍華醫院肛腸科陸金根教授經歷將近10年的臨床經驗總結，結合潰瘍性結腸炎中醫證候的濕毒內蘊、氣血壅滯、脾腎虧虛病機，創立紅萸飲，以清熱解毒、涼血活血，兼職溫補脾腎。方中君藥大血藤具有清熱解毒、活血通絡的功效，也是治療腸癰的要藥。在TCMSP檢索到的大血藤主要成分中，類藥性最高的前兩位活性成分是β-谷甾醇（Beta-Sitosterol）和谷甾醇（Sitosterol）。谷甾醇是真核生物生物膜的重要組成部分，其中的β-谷甾醇對免疫調節、炎性反應、疼痛、潰瘍具有較強的抵抗作用。有研究表明，β-谷甾醇具有抵抗大鼠慢性乙酸型與冷應激型胃潰瘍的活性，并具有抵抗多種胃潰瘍模型的胃黏膜保護效果[12]，這與潰瘍性結腸炎的病理表現的治療有一定的相似關聯性。同時這兩位活性成分在方中敗醬草和山茱萸中均有較高的表達。敗醬草為方中臣藥，與紅藤合用，加強清熱解毒，活血排膿的作用。在TCMSP檢索到的敗醬草的主要活性成分中，蒙花苷（Linarin）、槲皮素（Quercetin）、山柰酚（Kaempferol）含量較高。研究表明蒙花苷作為黃酮類化合物不僅具有抗炎作用，而且還具有血管保護的作用，可以減少炎性反應遞質IL-6、TNF-α等的產生，并可以通過PI3K-Akt信號通路而發揮其作用[13-14]。槲皮素是多羥基黃酮類化合物，具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎等多方面生物活性[15-17]。研究表明，槲皮素可以抑制細胞中絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）級聯激活，對LPS誘導小鼠巨噬細胞RAW264.7炎性反應具有保護作用[18]。也有研究顯示槲皮素和山柰酚對腸道炎性反應有抑制作用[19]，此外槲皮素和山柰酚也是方中佐使藥黃芪的主要活性成分。以上結果均從另一個角度證實了本研究預測結果的可靠性，也無疑為深入探討紅萸飲抗UC有效單體成分及其機制的研究提供了重要指導依據。

在中藥-成分-靶點-信號通路網絡中連接度最高的前6位靶點為CASP3，IL-6，VEGFA，EGFR，MAPK8和MYC。CASP3是一種蛋白剪切酶，屬于凋亡家族的重要成員，在細胞凋亡機制網絡中居中心地位，是致使凋亡發生的關鍵。它一旦被激活，即可發生下游的級聯反應，從而發生凋亡，不可逆轉，因而CASP3也被稱為“死亡蛋白酶”[20]。IL-6是白細胞介素家族的一員，也是重要的炎性反應遞質，可以結合其受體以激活其一系列的炎性反應。在由死亡受體介導的凋亡途徑中，炎性反應遞質IL-6可以激活CASP8，從而進一步介導CASP3的活化最終導致凋亡的發生[21]。研究表明，在細胞內介導凋亡及炎性信號轉導的通路中，CASP3的升高與腸道炎性反應的發生密切相關[22]。也有研究表明IL-6與炎性反應、腸道炎性反應以及潰瘍性結腸炎的關系密切[23]，IL-6作為黏膜固有層產生的一種在炎性反應中發揮重要作用的細胞因子，可以調節免疫反應及多種細胞的增殖和分化。IL-6和其受體相結合可以激活JAK產生磷酸化，并進一步特異地激活STAT3發生磷酸化轉移入核，從而誘導STAT3異常活化導致炎性反應的發生;也可以調節STAT3下游基因如VEGF的表達，在細胞凋亡的調控等過程中發揮重要作用[24]。VEGFA是PDGF/VEGF生長因子家族的成員。它可以誘導內皮細胞的增殖，促進細胞遷移，抑制凋亡并誘導血管通透性。有研究顯示VEGF在活動性UC炎性組織中表達增強可以加速血管和內皮細胞的增殖以及細胞代謝，可引起血小板大量激活，血管收縮、微血栓形成等，影響腸黏膜微循環，加重腸黏膜缺氧損傷和導致病情的惡化[25]。而EGFR本身具有酪氨酸激酶活性，一旦與表皮生長因子（EGF）組合可啟動細胞核內的有關基因，從而促進細胞分裂增殖。在紅萸飲自由度較高的生物學功能中，EGFR和泛素樣蛋白連接酶結合功能有密切的關聯，EGFR和VEGFA也同蛋白質異二聚化活性功能密切。臨床上潰瘍性結腸炎也表現有黏膜及黏膜下層的損傷[26]，而結直腸黏膜的不典型增生也被認為與潰結最嚴重并發癥結腸癌的發生密切相關[27]，這也進一步印證了VEGFA和EGFR與潰瘍性結腸炎病理的密切關聯。我們在實驗驗證中也證明，紅萸飲可以調節c57 UC模型小鼠結腸組織中VEGF mRNA水平的降低，也進一步證實了VEGF的關鍵性。MAPK8是促有絲分裂原活化蛋白激酶家族（MAPKs）的重要成員，MYC為原癌基因，二者均是PI3K-Akt信號通路上的重要組成因子，二者共同作用發揮該通路在細胞凋亡和炎性反應上的重要作用[28]。因此，紅萸飲可能主要是通過影響CASP3、IL-6、VEGFA、EGFR、MAPK8和MYC等靶點發揮對潰瘍性結腸炎的治療作用的。

從通路富集分析結果可知，在該治療過程中主要涉及通路可能是PI3K-Akt信號通路、卡波西肉瘤相關皰疹病毒感染通路、人巨細胞病毒感染通路、乙肝病毒通路、前列腺癌通路、流體剪切應力與動脈粥樣硬化通路等。PI3K/Akt信號通路參與細胞的分化、增殖、凋亡及血管生成等病理生理過程，是目前研究細胞凋亡信號調控通路之一。在中藥-成分-靶點-信號通路網絡中自由度最高的前6位靶點中，EGFR、VEGFA、MYC也均是上述兩條通路上的關鍵因子，其中IL-6也作為PI3K通路上的一個重要的外源性細胞因子而存在，同樣也可以激活細胞衰老信號通路和TNF炎性反應通路從而發生一系列的反應[29];此外也有研究證實PI3K信號通過與樹突狀細胞表面的CD80/CD86相互作用，可以調節IL-6的分泌[30]。我們通過實驗驗證紅萸飲確對c57 UC小鼠模型血清水平的IL-6有抑制作用，進一步證實了IL-6在紅萸飲治療UC疾病中的關鍵性。由此我們可以發現，紅萸飲可能是通過調控細胞凋亡、血管生成和抑制炎性反應來達到對潰瘍性結腸炎的治療作用。

綜上所述，本研究利用網絡藥理學方法與技術，挖掘到紅萸飲中50種類藥性成分及110個潛在靶點，潰瘍性結腸炎疾病相關靶點3 870個，其中紅萸飲活性成分抗UC作用靶點70個。通過對這些靶點進行GO生物過程及KEGG信號通路的富集性分析，預測紅萸飲可能是通過調節CASP3，IL-6，VEGFA，EGFR，MAPK8，MYC等靶點，調控PI3K-Akt信號通路、卡波西肉瘤相關皰疹病毒感染通路、人巨細胞病毒感染通路、乙肝病毒通路、前列腺癌通路、流體剪切應力與動脈粥樣硬化通路等，從而通過調控細胞凋亡、血管生成和抑制炎性反應來達到對潰瘍性結腸炎的治療作用。由于各種平臺數據庫數據及相應分析算法和軟件功能的限制，得出的其他結論還有待實驗研究的進一步證實。

參考文獻

[1]Bernstein CN，Eliakim A，Fedail S，et al.World Gastroenterology Organisation Global Guidelines Inflammatory Bowel Disease：Update August 2015[J].J Clin Gastroenterol，2016，50（10）：803-818.

[2]Lui R，Ng SC.The Same Intestinal Inflammatory Disease despite Different Genetic Risk Factors in the East and West？[J].Inflamm Intest Dis，2016，1（2）：78-84.

[3]朱水津，江石湖，馬天樂，等.766例IBD住院患者的人口資料分析[J].胃腸病學，2013，18（7）：425-427.

[4]朱振華，曾志榮，彭俠彪，等.廣東省中山市炎癥性腸病的發病率及臨床特點[J].中華消化雜志，2013，33（6）：390-393.

[5]Butzner JD，Parmar R，Bell CJ，et al.Butyrate enema therapy stimulates mucosal repair in experimental colitis in the rat[J].Gut，1996，38（4）：568-73.

[6]Ekstrm GM.Oxazolone-induced colitis in rats：effects of budesonide，cyclosporin A，and 5-aminosalicylic acid[J].Scand J Gastroenterol，1998，33（2）：174-1791.

[7]Sangfelt P，Carlson M，Thrn M，et al.Neutrophil and eosinophil granule proteins as markers of response to local prednisolone treatment in distal ulcerative colitis and proctitis[J].Am J Gastroenterol，2001，96（4）：1085-1090.

[8]Hopkins AL.net work pharmacology：the next paradigm in drug discovery[J].Nat Chem Biol，2008，4（11）：682-690.

[9]王歡歡，吳宏偉，李欣，等.基于網絡藥理學分析厚樸抗抑郁的物質基礎及其作用機制[J].中國實驗方劑學雜志，2019，25（10）：162-169.

[10]陳文娜，朱愛松，叢培瑋，等.基于網絡藥理學的二陳湯治療冠心病分子機制研究[J].中草藥，2019，50（2）：441-448.

[11]Li S，Zhang B.Traditional Chinese medicine network pharmacology：theory，methodology and application[J].Chin J Nat Med，2013，11（2）：110-120.

[12]肖志彬，劉小雷，成日青，等.β-谷甾醇對阿司匹林副作用抵抗及抗炎作用影響的實驗研究[J].內蒙古醫科大學學報，2015，37（4）：350-354.

[13]吳亞軍，蘇潔，黃浦俊，等.蒙花苷對TNF-α誘導的血管內皮細胞炎癥損傷及TLR4/IκBα/NF-κB信號通路的影響[J].中國現代應用藥學，2017，34（5）：637-643.

[14]許韓婷，蘇潔，吳亞軍，等.蒙花苷對脂多糖誘導的血管內皮細胞炎癥損傷的影響[J].中藥藥理與臨床，2016，32（1）：29-32.

[15]Chen KC，Hsu WH，Ho JY，et al.Flavonoids Luteolin and Quercetin Inhibit RPS19 and contributes to metastasis of cancer cells through c-Myc reduction[J].J Food Drug Anal，2018，26（3）：1180-1191.

[16]Men K，Duan X，Wei XW，et al.Nanoparticle-delivered quercetin for cancer therapy[J].Anticancer Agents Med Chem，2014，14（6）：826-832.

[17]李韶靜，廖應芬，杜青.槲皮素納米載藥系統的研究與應用[J].中國中藥雜志，2018，43（10）：1978-1984.

[18]任改艷，張步有，黃劍林.槲皮素對LPS誘導小鼠RAW264.7細胞炎癥的保護作用[J].中成藥，2019，41（8）：1795-1799.

[19]卞藝斐.馬齒莧對實驗性腸炎大鼠的保護作用及其機制研究[D].北京：中國農業大學，2018.

[20]楊濤，費振海，鐘興明.Caspase家族與細胞凋亡的研究進展[J].浙江醫學，2018，40（18）：2083-2087，2091.

[21]焦佩娟，應小平.Caspase-3與腫瘤細胞凋亡關系的中醫藥研究進展[J].山東中醫雜志，2017，36（8）：721-724.

[22]步楠，王燁，王瑞，等.雷公藤多苷通過JAK2/STAT3信號通路減輕潰瘍性結腸炎大鼠腸黏膜細胞凋亡及炎癥的實驗研究[J].現代消化及介入診療，2019，24（5）：466-470.

[23]Chen YY，Ma ZB，Xu HY，et al.IL-6/STAT3/SOCS3 signaling pathway playing a regulatory role in ulcerative colitis carcinogenesis[J].Int J Clin Exp Med，2015，8（8）：12009-12017.

[24]董艷，曹永清，陸金根.IL-6/STAT3信號通路在潰瘍性結腸炎發病中的機制及香連丸對其的干預作用[J].上海中醫藥雜志，2016，50（6）：75-79.

[25]Zundler S，Neurath MF.Integrating Immunologic Signaling Networks：The JAK/STAT Pathway in Colitis and Colitis-Associated Cancer[J].Vaccines（Basel），2016，4（1）：5.

[26]Adams SM，Bornemann PH.Ulcerative colitis[J].Am Fam Physician，2013，87（10）：699-705.

[27]Matsuoka H，Ikeuchi H，Uchino M，et al.Clinicopathological features of ulcerative colitis-associated colorectal cancer pointing to efficiency of surveillance colonoscopy in a large retrospective Japanese cohort[J].Int J Colorectal Dis，2013，28（6）：829-834.

[28]查錫良.生物化學[M].7版.北京：人民衛生出版社，2010：375-375.

[29]嵇瑩瑩，龔國清.PI3K/Akt/mTOR通路在炎癥相關疾病中分子機制研究進展[J].藥學研究，2018，37（4）：226-229.

[30]楊丕山，宋愛梅.TNF-α/NF-κB信號通路對牙周炎發展和牙周再生的影響及其干預[J].口腔醫學，2019，39（1）：1-5.

（2020-02-24收稿 責任編輯：楊覺雄）

基金項目：國家自然科學基金青年基金項目（81202696）;上海中醫藥大學研究生創新培養專項（Y201920）

作者簡介：張馨心（1993.11—），女，醫學碩士，規培醫師，研究方向：中醫藥治療肛腸疾病的研究，E-mail：agathazkitazawa@163.com

通信作者：潘一濱（1975.11—），女，醫學博士，副主任醫師，研究方向：中醫藥治療肛腸疾病的研究，E-mail：panyibin29@163.com

;許言午（1974.04—），男，理學博士，副教授，研究方向：中藥藥理及其機制，E-mail：xyw551268@sina.com