肝素結合蛋白在革蘭陰性菌肺部感染中的診斷價值

喻瑩，王慶領，陳建偉

肺部細菌感染是臨床上發病率較高的呼吸系統疾病，細菌感染又可分為革蘭陽性菌（G＋）和革蘭陰性菌（G－）感染，G－感染引起重癥肺炎的概率較高，二者的區分對指導臨床用藥意義重大。臨床常根據白細胞計數、血清淀粉樣蛋白（SAA）、降鈣素原（PCT）及C-反應蛋白（CRP）等急性時相反應蛋白對肺部感染作出早期診斷[1]，但這些指標開始升高時間較晚，且對G＋和G－的鑒別作用較小。尋找一種更加快速、有效的指標在G－肺部感染的診斷中具有十分重要的意義。肝素結合蛋白（HBP）是一種嗜中性粒細胞衍生蛋白，在機體急性細菌感染的早期可升高，主要作用是對抗G－，相比其他急性時相反應蛋白具有高敏感性及特異性等優點[2]。本文通過對比HBP及SAA、PCT、CRP水平，評估HBP在G－肺部感染中的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019年12月至2020年10月在寧波大學醫學院附屬醫院呼吸科就診的肺部感染患者120例，男52例，女68例；平均年齡（42.1±13.3）歲。納入標準：（1）本次發病時間≤7 d，年齡≥18歲；（2）經血培養培養出細菌生長，且經質譜鑒定可以確定細菌類型；（3）符合《呼吸疾病診療指南》（2013年版）[3]中的肺部感染診斷標準；（4）本次發病至住院抽血、留痰標本前未使用抗生素及免疫抑制劑治療。排除標準：（1）合并膿毒癥、泌尿系統等其他系統感染；（2）合并心肌梗死、嚴重肝腎功能不全及惡性腫瘤等重大疾病。根據痰培養后質譜結果分為G＋組和G－組，并收集同期健康體檢者60例作為對照組，男28例，女32例；平均年齡（33.7±5.0）歲。

1.2 方法 患者在入院24 h內留取血液標本檢測HBP、SAA、PCT及CRP值，全部按照標準操作規程進行檢測。HBP采用免疫熒光干式定量法測定，儀器為干式熒光免疫分析儀FIC-S100（蘇州和邁精密儀器有限公司），試劑盒為肝素結合蛋白測定試劑盒（中翰盛泰生物技術股份有限公司）；SAA采用乳膠增強免疫比濁法測定，儀器為BeckmanDXI800全自動化學發光儀（美國貝克曼庫爾特公司），試劑盒為SSA測定試劑盒（寧波普瑞柏生物技術股份有限公司）；PCT采用免疫熒光法測定，儀器為TZ-310型干式熒光免疫分析儀（瑞萊生物科技江蘇有限公司），試劑盒為儀器配套試劑盒；CRP采用乳膠增強免疫比濁法測定，儀器為邁瑞CRP-M100特定蛋白免疫分析儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司），試劑盒為配套試劑盒。細菌培養：留取患者的痰液，使用Thermo BB15型CO2培養箱（美國Thermo公司）進行一般細菌培養（35℃、5%濃度的CO2條件培養24 h），篩選出單個生長的菌落進行細菌鑒定，采用VITEK MS IVD 2.0質譜鑒定儀（梅里埃診斷產品有限公司）將細菌區分為G＋及G－，并做好記錄。

1.3 統計方法 采用SPSS 19.0統計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；采用受試者工作特征（ROC）曲線分析，計算ROC曲線下面積及其相關的敏感性及特異性。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 細菌鑒定結果 根據質譜結果，G－組65例，男28例，女37例；平均年齡（48.2±14.6）歲；以金黃色葡萄球菌、鏈球菌為主。G＋組55例，男24例，女31例；平均年齡（34.9±6.4歲）；以克雷伯桿菌、銅綠假單胞菌為主。

2.2 各組HBP、SAA、PCT及CRP水平比較 3組HBP、SAA、PCT及CRP水平差異均有統計學意義（P＜0.05），且各指標G－組與G＋組、對照組差異均有統計學意義（均P＜0.05）。見表1。

表1 各組HBP、SAA、PCT及CRP水平比較

2.3 ROC曲線分析 將G－組與G＋組合并為感染組，將感染組與對照組比較，繪制ROC曲線，HBP、SAA、PCT、CRP曲線下面積（AUC）均＞0.7，且差異均有統計學意義（均P＜0.05）。其中HBP、SAA、PCT的AUC＞0.9，CRP的AUC值為0.7～0.9。見表2及圖1。

表2 各指標在感染組與對照組間的診斷效能

圖1 感染組與對照組的ROC曲線分析

將G－組與G＋組比較，HBP、SAA、PCT、CRP的AUC分別為0.816、0.603、0.420、0.383。HBP的AUC最大，處于0.7～0.9，同時差異有統計學意義（P＜0.05），且敏感性及特異性較好，分別為92.3%、69.1%；SAA的AUC為0.5～0.7，診斷準確性較低；PCT、CRP的AUC均＜0.5。見表3及圖2。

表3 各指標在G－與G＋組間的診斷效能

圖2 G－與G＋組的ROC曲線分析

3 討論

目前肺部感染是ICU及呼吸科最主要的感染類型，病死率高達11.3%～15.1%[3]。其中G－菌可釋放內毒素致病，通常引起高熱等嚴重癥狀，G－菌肺部感染的早期診斷尤為重要。痰培養是目前肺部感染病原學診斷的金標準，但痰培養需耗時1～3 d，且漏診率高，臨床常根據臨床癥狀、白細胞計數、SAA、PCT及CRP等指標進行早期臨床診斷。但以上指標升高時間較HBP慢，且特異性不高，對G＋與G－菌肺部感染鑒別效果不理想。

HBP又稱為天青殺素或CAP37，是一種多功能顆粒相關蛋白，可從遷移的多形核白細胞中迅速動員，當機體受到炎癥等刺激的早期（2 h內），HBP可由中性粒細胞釋放。釋放途徑主要包括：M蛋白-纖維蛋白原-2整合素復合物機制、p38-MAPK信號通路及白三烯受體途徑等[4]。近年來HBP在感染性疾病中的診斷價值的研究不斷涌現，《中國嚴重膿毒癥/膿毒性休克治療指南》（2014）指出HBP是早期診斷膿毒血癥最優指標[5]。現已發現HBP對肺部感染同樣具有診斷意義，唐小娟等[6]研究表明，當HBP的cut-off值為20.5 ng/ml時，對細菌性肺炎中的診斷價值優于血清SAA、PCT及WBC，與本文結果相符。

本研究結果顯示感染組與對照組HBP、SAA、PCT及CRP的AUC相差不大，且均對細菌性感染具有預測價值；而G－與G＋組HBP的AUC明顯高于SAA、PCT及CRP，且敏感性與特異性均較高，這提示HBP可以作為G－菌肺部感染的早期診斷指標。其機制可能包括：（1）HBP對G－菌的對抗作用，Gabay等[7]分離出天青殺素后認為它是中性粒細胞對抗G－菌時產生的。HBP可作為化學引誘物（單核/巨噬細胞的激活劑），由中性粒細胞2整合素連接觸發，誘導血管滲漏和水腫的形成。（2）趨化作用，HBP可作為一種趨化因子，激活單核/巨噬細胞，可差異性調節內毒素誘導的TNF-及IL-6等炎性介質產生。Heinzelmann等[8]發現HBP具有多功能特性，包括單核細胞趨化作用和LPS誘導的分離單核細胞產生TNF-、IL-1及IL-6等促炎細胞因子的增強作用。

綜上所述，HBP、SAA、PCT及CRP均可作為肺部細菌性感染的鑒別指標，其中HBP可以作為G－菌肺部感染的早期診斷指標。