lncRNA XIST在膠質瘤中的表達及生物學功能

陳剛 唐海濤 王玉春 王凱 張磊 王晶 曹艷菲

膠質瘤作為神經系統腫瘤中占比較高的一類疾病，與本病相關的眾多研究中，關于腫瘤發生發展的研究多見。lnc RNA是近年來在較多疾病患者中研究較多的方面，其對于細胞周期調控及細胞分化調控等方面發揮著重大作用，其表達或功能方面的異常與較多疾病的發生發展密切相關，而各類lnc RNA在膠質瘤患者中的表達研究不斷增多[1-2]，XIST作為lnc RNA中研究較多的一類，其在膠質瘤中的細致變化研究[3]，包括對生物學功能的影響研究不足，故認為其仍有待深入探究，以為膠質瘤的診治提供參考依據。本研究就lnc RNA XIST在膠質瘤中的表達水平及其生物學功能進行研究與探討，現將研究結果總結分析并報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

（1）選取2018年6月—2019年5月的35例膠質瘤患者為觀察組，同時期的35例腦外傷患者為對照組。對照組中包括男性22例，女性13例，年齡為21～63歲，平均年齡（39.0±6.6）歲；致傷原因：車禍致傷者26例，其他9例。觀察組中包括男性23例，女性12例，年齡為22～63歲，平均年齡（39.2±6.9）歲；分級：Ⅰ級者8例，Ⅱ級者10例，Ⅲ級者9例，Ⅳ級者8例。兩組的年齡與性別比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。（2）中科院細胞庫膠質瘤U87及U251細胞。

1.2 方法

采集觀察組的膠質瘤組織標本及對照組的健康腦組織標本進行檢測，采用實時定量PCR法進行組織lnc RNA XIST表達情況的檢測；進行轉染試劑的配置，對膠質瘤細胞U87及U251進行轉染，術前1 d接種于6孔板，首先以10%血清培養皿進行培養，細胞配合度在70%～80%時嚴格按照標準進行轉染處理，形成siRNA XIST，并設置siRNA-NC；于轉染完成后48 h進行克隆數方面的檢測與統計，主要為以克隆形成實驗進行檢測，以5 000個細胞于培養皿中進行培養，直至克隆集落形成后進行下一步的固定染色處理，進行U87及U251細胞克隆數的統計；然后采用AnnexinV/PI雙染色細胞凋亡試驗進行凋亡細胞的檢測，在細胞融合度在80%時進行培養基清洗，依次進行其他處理，并以流式細胞儀進行檢測，判定各個象限的細胞情況，統計凋亡細胞比率；對U87及U251進行Transwell細胞侵襲實驗檢測，培養后，基底膜干燥后采用單細胞懸液進行培養，并于顯微鏡下進行5個視野細胞穿膜數的統計。然后統計及比較兩組、觀察組中不同分級者的組織lnc RNA XIST表達情況，同時檢測轉染siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251細胞克隆數、凋亡細胞比率及細胞穿膜數。

1.3 統計學檢驗

研究中的數據采用軟件SPSS 23.0進行分析，計量資料采用（）表達，進行t檢驗，重復測量的計量資料進行方差分析，計數資料采用（%）表示，進行χ2檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組、觀察組中不同分級者的組織lnc RNA XIST表達情況比較

觀察組的lnc RNA XIST表達高于對照組，觀察組中不同分級者的組織lnc RNA XIST表達比較，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2 siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251細胞克隆數比較

轉染siRNA XIST的U87及U251 XIST表達量下調為80%；轉染siRNA AGAP2-AS1的U87及U251細胞克隆數低于siRNA-NC，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表2。

2.3 siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251凋亡細胞比率比較

轉染siRNA AGAP2-AS1的U87及U251凋亡細胞比率高于siRNA-NC，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表3。

2.4 siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251細胞穿膜數比較

轉染siRNA AGAP2-AS1的U87及U251細胞穿膜數低于siRNA-NC，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表4。

3 討論

近年來關于各類長鏈非編碼RNA在腫瘤發生發展中的作用研究不斷增多，研究普遍顯示，其在各類腫瘤的生殖、侵襲等功能中具有重要的調控作用[4-5]。而lnc RNA XIST作為一類重要長鏈非編碼RNA，有研究認為其是miR-429、miR-204-5p的靶向miRNA，而miR-429及miR-204-5p對于膠質瘤的增殖、遷徙及侵襲等生物學行為有調控作用[6-8]。臨床中關于lnc RNA XIST在膠質瘤患者中的表達變化研究可見的同時，其對于膠質瘤分期的檢測作用仍有待深入研究[9-10]，而其對膠質瘤增殖、侵襲及凋亡等方面的針對性影響研究極為匱乏，因此進一步細致探究lnc RNA XIST對膠質瘤生物學功能的調控作用意義較高。

本研究就lnc RNA XIST在膠質瘤中的表達水平及其生物學功能進行探究，結果顯示，膠質瘤病灶組織的lnc RNA XIST表達升高，且分級較高者的膠質瘤組織lnc RNA XIST表達相對更高，同時siRNA XIST的U87及U251細胞克隆數及細胞穿膜數低于siRNANC，凋亡細胞比率高于siRNA-NC，因此認為lnc RNA XIST在膠質瘤中的檢測價值較高，其對于膠質瘤的生物學行為具有較強的調控作用。分析原因，可能與lnc RNA XIST通過調控miR-429及miR-204-5p等miRNA來實現對膠質瘤細胞的血管形成、細胞增殖及侵襲等影響[11]，且分級越高者的表達越高，與疾病的進展情況有關[12]。綜上所述，我們認為lnc RNA XIST在膠質瘤中的表達水平較高，lnc RNA XIST的高表達狀態提升了膠質瘤細胞的增殖及侵襲能力。

表1 兩組、觀察組中不同分級者的組織lnc RNA XIST表達情況比較 （）

表1 兩組、觀察組中不同分級者的組織lnc RNA XIST表達情況比較 （）

組別lnc RNA XIST觀察組 Ⅰ級（n=8） 1.03±0.15Ⅱ級（n=10） 1.86±0.21Ⅲ級（n=9） 2.29±0.28Ⅳ級（n=8） 2.81±0.37 F值 70.585 P值 0.000整組（n=35） 2.10±0.26對照組（n=35） - 0.95±0.12 t值 - 23.758 P值 - 0.000

表2 siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251細胞克隆數比較 （）

表2 siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251細胞克隆數比較 （）

分類 U87 U251 siRNA XIST 86.32±15.33 88.63±17.65 siRNA-NC 198.68±22.31 210.35±25.35 t值 24.557 23.312 P值 0.000 0.000

表3 siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251凋亡細胞比率比較 （）

表3 siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251凋亡細胞比率比較 （）

分類 U87 U251 siRNA XIST 25.25±2.68 29.89±2.72 siRNA-NC 12.23±1.37 9.96±1.63 t值 25.592 37.183 P值 0.000 0.000

表4 siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251細胞穿膜數比較 （）

表4 siRNA XIST與siRNA-NC的U87及U251細胞穿膜數比較 （）

分類 U87 U251 siRNA XIST 16.65±2.21 19.96±2.53 siRNA-NC 58.83±3.39 66.76±3.90 t值 61.664 59.558 P值 0.000 0.000