血管內皮生長因子與缺血性結腸炎相關性

盧翀 胡益冰 丁進

[摘要] 目的 研究血管內皮生長因子與缺血性結腸炎相關性，探討VEGF在缺血性結腸炎早期診斷中的應用價值。 方法 選取2018年6月至2020年3月在我院消化內科就診的缺血性結腸炎患者50例為研究組，選取同期未患病者53例為對照組。比較研究組治療前后與對照組血液中的VEGF表達水平;血液及結腸組織中的VEGF RNA表達水平;分析研究組治療前后血液及結腸組織中VEGF RNA表達水平的相關性。 結果 治療前研究組血液中VEGF水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異無統計學意義（P>0.05）。治療前研究組結腸組織及血液中VEGF RNA表達水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異無統計學意義（P>0.05）。研究組治療前后血液及結腸組織中VEGF RNA表達水平的相關性分析結果顯示，兩者表達水平呈正相關。 結論 VEGF在缺血性結腸炎的早期診斷中具有一定的意義，有助于提高早期診斷率，改善患者預后。

[關鍵詞] 缺血性結腸炎;血管內皮生長因子;生物醫學;VEGF RNA

[中圖分類號] R574? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）09-0026-04

The correlation between vascular endothelial growth factor and ischemic colitis

LU Chong? ?HU Yibing? ?DING Jin

Department of Gastroenterology， Affiliated Jinhua Hospital， Zhejiang University School of Medicine， Jinhua? ?321000， China

[Abstract] Objective To study the correlation between vascular endothelial growth factor and ischemic colitis， and to explore the application value of VEGF in the early diagnosis of ischemic colitis. Methods Fifty patients with ischemic colitis who were treated in the Department of Gastroenterology of our hospital from June 2018 to March 2020 were selected as the study group， and 53 patients with no disease during the same period were selected as the control group. The expression levels of VEGF in the blood， the expression levels of VEGF RNA in the colon tissue and in the blood of the study group before and after treatment and between the two groups were compared. The correlation between the expression levels of VEGF RNA in the blood and colon tissue of the study group before and after treatment were analyzed. Results Before treatment， the blood VEGF level in the study group was significantly higher than that in the control group， and the difference was statistically significant（P<0.05）; after treatment， the difference between the two groups was not statistically significant（P>0.05）. Before treatment， the expression levels of VEGF RNA in colon tissue and blood in the study group were significantly higher than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）; after treatment， the differences between the two groups were not statistically significant （P>0.05）. Analysis showed that the correlation between the expression levels of VEGF RNA in blood and colon tissues in the study group before and after treatment were positively correlated. Conclusion VEGF has a certain significance in the early diagnosis of ischemic colitis， which helps to increase the early diagnosis rate and improve the prognosis of patients.

[Key words] Ischemic colitis; Vascular endothelial growth factor; Biological medicine; VEGF RNA

缺血性結腸炎（Ischemic colitis，IC）是因腸道動脈供血不足或靜脈回流受阻導致的結腸缺血性損傷性疾病，是缺血性結腸炎中最常見的臨床類型[1]。IC的臨床表現多種多樣，早期確診較困難，誤診率高，術后死亡率高達21%。血液檢測在IC快速診斷中有重要意義[2]。在一定的時間內，組織如果沒有獲得充分的血液，機體為了維護自身的穩定狀態，會出現一些適應性反應，現有的文獻提出，缺氧誘導因子1α（Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）和血管內皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）等與上述現象相關[3]。細胞處于缺氧狀態時，泛素蛋白酶體因不斷發生降解而減少，與此同時，HIF-1α的分子濃度則會不斷升高。VEGF由HIF-1α復合物產生，其與特異性受體KDR/Flk-1結合，刺激內皮細胞增殖，從而生成血管[4-5]。本研究旨在分析缺血性結腸炎及健康人群血液和結腸組織中VEGF的表達水平，探討VEGF在IC早期診斷中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年6月至2020年3月在我院消化內科就診的IC患者50例為研究組，其中男23例，女27例;年齡41～88歲，平均（62.51±6.24）歲;基礎疾病史包括動脈硬化、高血壓病、高脂血癥、糖尿病、便秘、腹部手術史。診斷標準：參考2015年美國胃腸學院發表的《結腸缺血的臨床指南》[6]。納入標準[6-8]：①出現IC的臨床癥狀，如腹痛、腹瀉，便血等;②結腸鏡提示腸壁缺血表現或術中發現結腸缺血、壞死;③腹部影像學結果提示，伴（或不伴）腸壁增厚、腸腔狹窄、腸管擴張、腹腔積氣積液及腹部血管狹窄或閉塞等。排除標準：①感染性結腸炎、假膜性腸炎、炎癥性腸病、憩室炎和結腸癌等相關疾病;②資料不完整。選取同期未患病者53例為對照組，其中男25例，女28例;年齡43～84歲，平均（63.27±5.32）歲;入組前均進行結腸鏡檢查，并且未發現結腸病變。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，所有研究對象及其家屬簽署知情同意書。

1.2 方法

收集兩組研究對象入院時血液樣本1 mL，采用離心機（1000 g，10 min）分離血清，保存至-80℃冰箱內。

收集患者結腸組織勻漿，通過RNA試劑盒（RNeasy Mini Kit，Qiagen，Valencia）提取樣本自身RNA[9]。采用ABI prism 7700系統（TaqMan PCR，Applied Biosystems）、Assays-on-Demand引物、探針組Hs00153153m1及TaqMan Assay試劑4339277F進行RT-PCR分析，以GADPH為內參照，測定VEGF的表達水平[10]。嚴格按照ELISA試劑盒（Human VEGF Immunoassay Quantikine，R&D Systems，Minneapolis，USA）說明書進行操作，獲得VEGF濃度標準曲線，從而檢測出兩組患者血清中VEGF的表達水平[11-12]。

為保證檢查結果的準確性，研究組結腸鏡檢查時取活檢標本3處，其中2處位于病變結腸黏膜，1處位于正常結腸黏膜;對照組結腸鏡檢查時取活檢標本3處，其中2處位于降結腸黏膜，1處位于乙狀結腸黏膜。將活檢標本置于含有100 μL RNA穩定劑的1.5 mL Microfuge管中，置于-80℃冰箱內保存，隨后對所有標本進行RT-PCR分析[13]。

研究組保守治療為主，予全身應用廣譜抗生素、禁食等，鼻飼拜阿司匹林腸溶片（Bayer Vital GmbH，批準文號：J20080078，規格：100 mg）100 mg，1次/d，療程為14 d。所有研究對象均不使用其他活血化瘀中藥、降纖酶、抗凝劑或溶栓治療。研究組治療7～10 d后臨床癥狀明顯緩解，復查結腸鏡顯示病變結腸黏膜接近正常，同時可見瘢痕，采用上述方法收集研究組治療后的血清及結腸組織標本進行檢測分析。

1.3 統計學方法

應用SPSS 23.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用（x±s）表示，采用t檢驗;計數資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義[14]。

2 結果

2.1 兩組血液中VEGF水平比較

治療前研究組血液中VEGF水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。經過7～10 d積極治療，研究組患者結腸組織過表達的VEGF基本恢復正常水平。

2.2 兩組VEGF RNA表達水平比較

治療前研究組結腸組織及血液中VEGF RNA表達水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表2～3。經過7～10 d積極治療，研究組患者結腸組織區域過表達的VEGF RNA基本恢復正常水平。

2.3研究組血液及結腸組織中VEGF RNA表達水平相關性分析

對研究組治療前后血液及結腸組織中VEGF RNA表達水平進行相關性分析，結果顯示，兩者表達水平呈正相關。

3討論

缺血性結腸炎發病急，具有腹痛、便血癥狀消失快，結腸黏膜病變恢復快的疾病特點[15-16]。目前結腸鏡檢查是缺血性結腸炎的首選診斷手段和金標準。結腸鏡檢查所見結合活檢病理可與腸結核、炎癥型腸病及結腸腫瘤相鑒別[17]。缺血性結腸炎發病急，又缺乏特異的臨床表現，雖然結腸鏡為缺血性結腸炎診斷的主要方法，但其為有創性檢查，且對于可疑壞疽型缺血型腸炎，則禁忌結腸鏡檢查[18]。探索缺血性結腸炎診斷的簡便、快捷的血液標志物協助結腸鏡診斷，為今后的發展方向。

本研究結果顯示，治療前研究組血液中VEGF水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。經過7～10 d積極治療，研究組患者結腸組織黏膜損傷基本恢復正常，過表達的VEGF也基本恢復正常水平，提示當組織在一定時間內無法得到充足的血液時，機體為了維護自身的穩定將會生成HIF-1α因子，其不僅能夠促使基因進行轉錄，還能夠在一定程度上增加部分蛋白質和酶，或提高它們的活性，如果人體處于缺氧狀態時，這種因子還能夠有效預防細胞的凋亡[19]。

本研究結果顯示，治療前研究組結腸組織及血液中VEGF RNA表達水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;治療后組間比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。經過7～10 d積極治療，研究組患者結腸組織黏膜損傷基本恢復正常，瘢痕區域過表達的VEGF RNA也基本恢復正常水平，提示當組織在一定時間處于缺血狀態時，機體為了維護自身的穩定性會誘導VEGF表達，以使組織所遭受的損傷程度不會繼續擴大，同時具備一定的修復作用[20-21]，經過一段時間后，組織將會恢復到正常狀態，由缺血誘導出現的相關因子也會逐漸降低，直至恢復到正常水平。因此，缺血性結腸炎內部存在一定的缺血性危害。

同時，觀察研究結果顯示，缺血性結腸炎血液中也可檢測到過表達的VEGF因子，并且與結腸組織中VEGF表達情況呈明顯正相關，提示外周血中VEGF表達水平可在一定程度上反映出腸道的缺血性危象，為該疾病的早期診斷提供了參考。

綜上所述，VEGF的血管生成在缺血性結腸炎中具有關鍵作用。當組織處于缺血狀態時，血管生成因子VEGF的表達水平將會上升，此時旁分泌因子將會得到一定的信號，并和特定的受體進行反應，促使相應的內皮細胞進行增殖。上述結果為缺血性結腸炎的發病機制提供了相應的分子證據，提示缺血性因子會在缺血性結腸炎自身的病理學過程中具有相對關鍵的作用。本研究證實了VEGF能夠在缺血性結腸炎對應的病變位置發生過表達，在臨床工作中，為評估結腸組織的缺血情況或展開進一步的修復，可以通過對上述因素的表達水平進行評價，進而做出更為準確的判斷。同時，利用血液中VEGF的檢測，有助于高齡或有禁忌證等不能實施結腸鏡檢查的患者的臨床診斷，減少誤診概率，對缺血性結腸炎的臨床診斷、病情評估及指導治療等方面均具有重要的價值。

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（收稿日期：2020-08-23）